甲狀腺乳頭狀癌標記物選擇

周桂騫黃述斌

◇醫學基礎與藥學研究◇

甲狀腺乳頭狀癌標記物選擇

周桂騫1黃述斌2

目的：尋找更好的標記物，用于甲狀腺乳頭狀癌的診斷與鑒別。方法：選取PTC 78例，NGWPH 32例，蠟塊均帶有周圍正常甲狀腺組織作對照，采用CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56對樣本進行免疫組化染色。結果：CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56在PTC中的陽性表達率分別為100.0%、93.6%、92.3%、98.7%和1.3%。而在NGWPH中的陽性表達率分別為12.5%、3.1%、37.5%、12.5%和96.9%。兩組比較差異有統計學意義(P＜0.05)。結論：5種抗體各有優缺點，CK19、34βE12、CD56的應用價值較高，若能再聯合使用MC和Galectin-3以及仔細的圖像觀察，可以增加PTC診斷及與NGWPH鑒別診斷的準確性。

甲狀腺腫瘤 乳頭狀癌 病理診斷

甲狀腺乳頭狀癌（PTC）是甲狀腺最常見的惡性腫瘤，WHO將其定義為顯示濾泡細胞分化證據并具有獨特細胞核特征的惡性上皮性腫瘤。有些PTC單憑HE染色鏡下難以與結節性甲狀腺腫伴乳頭狀增生（NGWPH）區別。本研究旨在通過檢測CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56在PTC與NGWPH中的表達情況，探討其在兩者鑒別診斷中的應用。

1 材料與方法

1.1 臨床資料 收集2009年5月~2013年9月我院及池州市人民醫院存檔的110例經10%中性甲醛固定、石蠟包埋的甲狀腺標本，其中男34例，女76例，年齡17~79歲。包括PTC 78例，NGWPH 32例，選取蠟塊均帶有周圍正常甲狀腺組織以作對照。診斷標準為2004版甲狀腺腫瘤WHO組織學分類。切片經HE染色后觀察病理組織學形態。

1.2 免疫組化染色 應用Envision二步法采用CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56對樣本進行免疫組化染色，具體步驟按說明書進行，DAB顯色。用已知的陽性組織切片作為陽性對照，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對照。所用 CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56鼠抗人單克隆抗體與檢測試劑盒均購自福州邁新生物技術開發有限公司。

1.3 結果判定 CK19、34βE12和Galectin-3定位于細胞質內，Galectin-3偶可定位于細胞核，MC定位于細胞膜，CD56定位于細胞膜伴/不伴細胞質。參照Beesley[1]分級方法按陽性細胞所占百分比并參考著色強度確定分級。陽性表達包括（+）~（+++）。1.4 統計學方法 用SPSS11.5軟件進行統計學處理。率的比較行x2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。真實性指標計算方法：靈敏度Se=a/(a+c)×100%；特異度Sp=d/(b+d)×100%；準確度=(a+d)/(a+b+c+d)× 100%。其中a為真陽性例數，b為假陽性例數，c為假陰性例數，d為真陰性例數。

2 結果

2.1 臨床與病理資料 78例PTC，腫瘤最大徑為0.8cm~6.5cm，伴有淋巴結轉移者58例，無淋巴結轉移者12例，有8例未行淋巴結清掃。所有PTC病例鏡下均具有Juan Rosai[2]所描述的全部或部分細胞核特征。32例NGWPH的病例中，各例均有囊性變，囊內可見乳頭狀結構。其中10例細胞核染色淡，似毛玻璃樣。

2.2 免疫組化結果 PTC組與NGWPH組之間比較：CK19，x2=91.55，P＜0.01；34βE12，x2=84.35，P＜0.01；MC，x2=37.76，P＜0.01；Galectin-3，x2=86.89，P＜0.01；CD56，x2=100.5，P＜0.01。PTC組與NGWPH組之間Pearson Chi-Square:Value=3.36E2，P＜0.01，兩組之間差異極顯著。見表1。

表1 甲狀腺組織中CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56的免疫組化陽性表達

2.3 5種抗體的靈敏度、特異度和準確度比較 根據統計學處理中的公式計算CK19、34βE12、MC、Galectin-3和CD56的靈敏度、特異度和準確度，結果見表2。

表2 5種指標的靈敏度、特異度和準確度比較 （%）

3 討論

PTC是甲狀腺惡性腫瘤中最常見的一種，而甲狀腺良性病變中也常常可見乳頭狀結構。故有時僅憑HE染色難以區分良惡性，這時就需要一些可靠的標記物來協助PTC的診斷與鑒別診斷。

滕曉東等[3]認為CK19陽性表達是濾泡細胞增生惡變的主要標志。但Michel R Nasr等[4]研究發現，雖然CK19在乳頭狀癌中100%表達，其在正常甲狀腺、乳頭狀增生、濾泡性腺瘤等一些良性病變中也有較高的表達率（68%），提示CK19標記雖然對PTC有很高的敏感性，但是特異性不高。本組研究結果與文獻相似，顯示除實體亞型PTC表達較弱外，其余PTC病例均有CK19的強表達，但有34.5%的癌周濾泡及結節性甲狀腺腫的濾泡弱表達CK19。本組實驗中發現34βE12在PTC的表達率為93.6%，而NGWPH僅1例灶性表達，其特異度為96.9%，顯示這種抗體在PTC的診斷與鑒別診斷中可以發揮很好的作用。

MC和Galectin-3抗體在PTC的診斷中研究較多，文獻報道的數據差異較大[4~5]。我們的數據顯示MC在PTC的表達率為92.3%，在NGWPH也有37.5%的表達率，特異度為五種抗體中最低，與文獻報道符合。不同的實驗結論顯示Galectin-3在PTC中的表達率為82%~100%。本組實驗顯示在PTC中表達率為98.7%，但在NGWPH和正常甲狀腺中也有一定的表達，靈敏度為98.7%，特異度為87.5%，準確度為95.5%，提示其應該在診斷中有一定的價值。

我們的研究發現除1例濾泡亞型PTC有CD56的弱表達外，其余77例PTC均不表達CD56，32例NGWPH病例的乳頭狀增生區除未見表達外，其余均為強陽性表達CD56，所有標本周圍正常甲狀腺組織均有CD56的強陽性表達。其靈敏度為98.7%，特異度為96.9%，準確度為98.2%，說明在PTC的診斷中CD56是一個非常有意義的抗體。

綜上所述，在部分PTC的診斷中需要借助于免疫組化技術，但是沒有抗體能在靈敏度、特異度、準確度上達到100%，這時就需要使用一組抗體來鑒別，以期獲得滿意的效果。綜合各項數據顯示，CK19、34βE12、CD56的應用價值較高，若能再聯合使用MC和Galectin-3以及仔細的圖像觀察，可以增加PTC診斷及與NGWPH鑒別診斷的準確性。

1 BeesleyMF，MclrenKM．Cytokeratin19 and galectin-3immunohistochemistry in the differential diagnosis of solitary thyroid nodules[J]．Histopathology，2002，41(3)：236～243．

2 Juan Rosai．Papillary Thyroid Carcinoma:A Rootand-Branch Rethink[J]．Am J Clin Pathol，2008，130（5）：683～686．

3 滕曉東，王麗君，姚洪田，等．細胞角蛋白19、galectin-3、HBME-l在甲狀腺病變上的表達及鑒別診斷意義[J].中華病理學雜志，2004，33(3)：212～216.

4 MichelRNasr，SanjayMukhopadhyay，ShengleZhang，etal．Immunohistochemicalmarkersin diagnosis ofpapillarythyroidcarcinoma：utilityofHBME1combinedwith CK19 immunostaining [J]．Modern Pathology,2006,19: 1631～1637.

5 JE Barroeta，MD，ZW Baloch,MD,PHD，et al．Diagnostic Value of Differential Expression of CK19, Galectin-3,HBME-1,ERK,RET,and p16 in Benign and Malignant Follicular-Derived Lesions of the Thyroid:An Immunohistochemical Tissue Microarray Analysis[J]．Endocrine Pathology,2006,17(3):225～234.

Selection of markers in papillary thyroid carcinoma

1.Chizhou Second People's Hospital，Chizhou 247100，Anhui
2.Chizhou People's Hospital，Chizhou 247100，Anhui
ZHOU Gui-qian1,HUANG Shu-bin2

Objective:To search for a better marker for papillary thyroid cancer diagnosis and identification.．Methods:Select PTC 78 example and NGWPH 32 cases,the wax block with the surrounding normal thyroid tissue were used as control,the use of CK19,34βE12,MC,Galectin-3 and CD56 on the samples immunohistochemical staining.Results:CK19,34βE12,MC,Galectin-3 and CD56 positive expression in PTC rates were 100.0%,93.6%, 92.3%,98.7%and 1.3%.In NGWPH the positive expression rate was 12.5%,3.1%,37.5%,12.5%and 96.9%. Difference between the two groups was statistically significant(P＜0.05).Conclusions:Five kinds of antibodies have their advantages and disadvantages,CK19,34βE12,CD56 high application value,if then combined with MC and Galectin-3 as well as careful observation of the image,you can increase the PTC diagnosis and differential diagnosis accuracy with NGWPH.

Thyroid neoplasms；Papillary carcinoma；Pathological diagnosis /(編審：牛俊楊 施仲賦)

R736.1

A

1671－8054(2014)01-0088-02

1.池州市第二人民醫院病理科 安徽 247100

2.池州市人民醫院病理科 安徽 247100

2013-12-05收稿，2014-01-04修回