山東省某奶牛場(chǎng)布病與口蹄疫血清抗體檢測(cè)及分析

岳瑞超 李 寧 劉立濤 程子龍 劉思當(dāng)

（山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院 山東 泰安 271000）

布氏桿菌病是由布氏桿菌引起的以流產(chǎn)、睪丸炎、關(guān)節(jié)炎為主要特征的人獸共患病，我國將其列為二類動(dòng)物疫病，近年來隨著我國養(yǎng)牛業(yè)的迅速發(fā)展，發(fā)病率呈明顯上升的趨勢(shì)，對(duì)我國的人類健康和公共衛(wèi)生構(gòu)成了巨大威脅[1]。口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的多種動(dòng)物(牛、羊、豬、駱駝、鹿等80多種動(dòng)物)共患的、接觸性傳染病，該病毒血清型多，傳染性強(qiáng)，除導(dǎo)致易感牛患病死亡或呈重癥感染外，還導(dǎo)致整個(gè)國家畜產(chǎn)品進(jìn)出口貿(mào)易受阻，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失和政治影響，我國將其列為一類動(dòng)物疫病。我國主要存在O型、A型和亞洲I型[2]。因此，加強(qiáng)對(duì)山東省奶牛場(chǎng)布病感染狀況和口蹄疫免疫效果的血清學(xué)監(jiān)測(cè)，對(duì)奶牛場(chǎng)重大疫病的防控不可或缺。

1 材料與方法

1.1 材料

148份血清，2013年9月采自山東省某奶牛場(chǎng)全部存養(yǎng)奶牛；布氏桿菌虎紅平板凝集抗原及試管凝集抗原均購自中國疾病預(yù)防控制中心，布氏桿菌抗體檢測(cè)ELISA試劑盒購于IDEXX公司；口蹄疫A型、亞洲I型及0型液相阻斷ELISA診斷試劑盒由內(nèi)蒙古金宇集團(tuán)提供。

1.2 方法

1.2.1 布病抗體檢測(cè) （1）虎紅平板凝集試驗(yàn)：將玻璃板上各格標(biāo)記受檢血清號(hào)，然后加相應(yīng)血清0.03ml，在受檢血清旁滴加抗原0.03ml。用牙簽類小棒攪動(dòng)血清和抗原使之混合，在陰、陽性血清對(duì)照成立的條件下，方可對(duì)被檢血清進(jìn)行判定。受檢血清在4min內(nèi)出現(xiàn)肉眼可見凝集現(xiàn)象者判為陽性(十)，無凝集現(xiàn)象，呈均勻粉紅色者判為陰性(一)。（2）試管凝集試驗(yàn)：對(duì)平板凝集試驗(yàn)陽性或可疑的血清樣品，按照《獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)》的方法進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)[3]，測(cè)定被檢血清的凝集效價(jià)。根據(jù)中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)(GB/T18646-2002)，被檢血清凝集效價(jià)達(dá)1:100以上的牛，判定為布氏桿菌病陽性;凝集效價(jià)達(dá)1:50者，判定為可疑反應(yīng)。（3）ELISA檢測(cè)：按照美國IDEXX牛布氏桿菌抗體檢測(cè)試劑盒說明進(jìn)行，檢測(cè)結(jié)果判定方法如下：S/P=(樣品OD-陰性對(duì)照OD)/(陽性對(duì)照OD-陰性對(duì)照OD)×100%。結(jié)果判定：S/P值大于等于1.2為陽性，在1.1～1.2之間為可疑，小于等于1.1時(shí)認(rèn)為抗體不存在。

1.2.2 口蹄疫ELISA抗體檢測(cè) 口蹄疫A型、亞洲I型、O型液相阻斷ELISA檢測(cè)方法按照試劑盒說明書進(jìn)行，結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)以抗原對(duì)照平均OD492值的50%為臨界值，被檢血清1:64稀釋孔在大于臨界值時(shí)為陰性，小于或等于臨界值時(shí)為陽性。

2 結(jié)果

2.1 布氏桿菌檢測(cè)結(jié)果

對(duì)148份奶牛血清進(jìn)行布病抗體檢測(cè)，結(jié)果見表1，虎紅平板凝集試驗(yàn)18份陽性，陽性率為12.2%；對(duì)虎紅平板凝集試驗(yàn)中的18份陽性樣品進(jìn)行試管凝集試驗(yàn)復(fù)診，有16份陽性，與虎紅平板凝集試驗(yàn)的符合率為88.9%，陽性率為10.8%；對(duì)148份樣品進(jìn)一步進(jìn)行ELISA檢測(cè)，結(jié)果有16份樣品為陽性，陽性率為10.8%，陽性編號(hào)與試管凝集試驗(yàn)陽性編號(hào)完全一致。

表1 布氏桿菌檢測(cè)結(jié)果

2.2 口蹄疫檢測(cè)結(jié)果

148份血清口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果見表2，A型陽性74份，陽性率50%；亞洲I型陽性133份，陽性率90%；O型陽性133份，陽性率90%。

表2 口蹄疫檢測(cè)結(jié)果

3 討論

（1）目前國家法定的布病檢測(cè)方法是虎紅平板凝集試驗(yàn)進(jìn)行初篩，通過試管凝集試驗(yàn)對(duì)陽性樣品進(jìn)行確認(rèn)。虎紅平板凝集試驗(yàn)具有操作簡單、成本低廉、用時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)，適合于田間大規(guī)模檢測(cè)，但是特異性和靈敏度都不高。試管凝集試驗(yàn)準(zhǔn)確性高，但是操作繁瑣，用時(shí)較長。ELISA方法敏感性高、特異性強(qiáng)，而且操作簡便，用時(shí)短，可以作為布病確診的輔助方法。本次調(diào)查結(jié)合三種方法對(duì)山東省某奶牛場(chǎng)進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，該牛場(chǎng)布病抗體陽性率為10.8%，由于該牛場(chǎng)從未免疫過布氏桿菌疫苗，因此可以判斷該牛群有較高比例的布氏桿菌感染。（2）比較3種布病抗體檢測(cè)方法可以看出，虎紅平板凝集試驗(yàn)與試管凝集試驗(yàn)的符合度為88.9%。試管凝集試驗(yàn)與IDEXX生產(chǎn)的ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果的陽性符合率一致，符合度100%，綜合3種檢測(cè)方法，確定該場(chǎng)的布病陽性率為10.8%。說明僅靠虎紅平板凝集試驗(yàn)檢測(cè)布病不夠準(zhǔn)確，還需要借助試管凝集試驗(yàn)或ELISA檢測(cè)方法進(jìn)行復(fù)診。（3）農(nóng)業(yè)部規(guī)定口蹄疫抗體的標(biāo)準(zhǔn)為陽性率大于等于70%，本次口蹄疫的血清學(xué)調(diào)查結(jié)果顯示，該牛場(chǎng)口蹄疫亞洲I型與O型抗體陽性率均為90%，A型抗體陽性率為50%。亞洲I型與O型高于國家口蹄疫免疫的標(biāo)準(zhǔn)要求，說明該場(chǎng)在O型和亞洲I型口蹄疫的防疫上取得了比較理想的免疫效果，但A型口蹄疫明顯低于國家規(guī)定的免疫合格率標(biāo)準(zhǔn)，這很可能跟疫苗的質(zhì)量或者免疫程序有關(guān)，真正原因有待于調(diào)查研究。

4 防控措施

（1）布病是國家二類重大疫病，是一種人畜共患病，對(duì)公共衛(wèi)生安全有重大威脅，根據(jù)國家相關(guān)規(guī)定，對(duì)實(shí)驗(yàn)室檢出的布病陽性牛立即進(jìn)行撲殺，并做無害化處理，對(duì)整個(gè)牛場(chǎng)進(jìn)行3次徹底清掃消毒，嚴(yán)格采取生物安全措施。對(duì)陰性牛進(jìn)行隔離觀察，再經(jīng)過2次檢測(cè)之后，若未發(fā)現(xiàn)布病陽性牛，方可作為健康牛群進(jìn)行飼養(yǎng)。（2）提倡牛場(chǎng)自繁自養(yǎng)，確需引進(jìn)奶牛時(shí)，要嚴(yán)格把好檢疫關(guān)，要從布氏桿菌病陰性場(chǎng)購買牛，查看檢疫證明，嚴(yán)格執(zhí)行檢疫。牛購回后隔離飼養(yǎng)觀察45d，同時(shí)，進(jìn)行2次布氏桿菌病的檢查，陰性時(shí)方可混入原奶牛群[4]。（3）鑒于該場(chǎng)A型口蹄疫抗體的陽性率只有50%，建議牛場(chǎng)盡快進(jìn)行一次口蹄疫A型疫苗注射，注射疫苗2周后進(jìn)行A型抗體陽性率檢測(cè)，看是否達(dá)標(biāo)，并建議牛場(chǎng)重新考查疫苗選購及免疫程序。（4）對(duì)奶牛場(chǎng)每年實(shí)施2次布病、口蹄疫定期的抗體監(jiān)測(cè)，掌握奶牛重大疫病的免疫防控狀況，做到未雨綢繆。牛場(chǎng)杜絕注射布氏桿菌病菌苗。（5）加強(qiáng)平時(shí)的衛(wèi)生防疫消毒工作，健全生物安全措施以切斷傳播途徑，如在養(yǎng)殖場(chǎng)或養(yǎng)殖小區(qū)門口設(shè)立消毒池或消毒間，每月進(jìn)行一次全場(chǎng)消毒，包括飲水槽也要清洗干凈，及時(shí)清理剩余的飼料。普通的消毒藥如1%～3%的石炭酸溶液3 min就可殺死布氏桿菌，2%的福爾馬林溶液15min可將其殺死。另外，使用3%的漂白粉溶液，20%的石灰乳、苛性鈉溶液消毒效果都很好。對(duì)被病牛或陽性牛污染的場(chǎng)所、用具和物品要進(jìn)行嚴(yán)格地消毒。飼養(yǎng)場(chǎng)的金屬設(shè)施、設(shè)備可采取火焰、熏蒸等方式消毒；牛場(chǎng)場(chǎng)地，可采用20%石灰乳、10%漂白粉乳劑，圈舍可用3%來蘇兒噴灑消毒。流產(chǎn)胎兒、胎衣應(yīng)深埋或燒毀，被污染的圈舍、場(chǎng)地、用具等用以上藥液進(jìn)行徹底消毒，糞便經(jīng)生物發(fā)酵消毒[5]。

[1]宮艷霞.奶牛養(yǎng)殖場(chǎng)布氏桿菌病的防治[J].中國畜禽種業(yè), 2012, 8(4): 110.

[2]石惠, 王仲賓, 鄭明學(xué)等.國內(nèi)外口蹄疫的流行情況及防制[J].畜禽業(yè), 2009, 242: 48-51.

[3]姚火春.獸醫(yī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2003.46-49.

[4]楊仕標(biāo), 信愛國, 趙文華等.云南奶(水)牛口蹄疫和布氏桿菌病血清學(xué)檢測(cè)及防控措施[J].中國奶牛, 2011, 24: 42-44.

[5]劉紅光.奶牛布氏桿菌病的防控措施[J].中國畜牧獸醫(yī)文摘, 2012, 28(9): 91.