蒙藥參竹精片中總黃酮的含量測定

溫愛平 張秀艷 鄔衛東 向萍 陳曉霞

1.內蒙古醫科大學藥學院，內蒙古呼和浩特010110；2.內蒙古醫科大學第一附屬醫院藥劑部，內蒙古呼和浩特010050

蒙藥參竹精片中總黃酮的含量測定

溫愛平1張秀艷1鄔衛東2向萍1陳曉霞1

1.內蒙古醫科大學藥學院，內蒙古呼和浩特010110；2.內蒙古醫科大學第一附屬醫院藥劑部，內蒙古呼和浩特010050

目的建立參竹精片中總黃酮的含量測定方法。方法采用超聲法提取，利用黃酮類與NaNO2-Al（NO3）3-NaOH發生顯色反應，以蘆丁為對照品，采用分光光度法對不同批號參竹精片中總黃酮的含量進行測定。結果蘆丁濃度在0.0102～0.0714 mg/mL范圍內與吸收度呈良好的線性關系（r=0.9997），平均回收率為98.80%，RSD為0.86%（n=9）。結論該方法簡便，重復性好，結果準確可靠，可作為參竹精片質量控制的方法。

參竹精片；總黃酮；分光光度法

蒙藥參竹精片是由參竹精顆粒（蒙藥名毛浩日查干-5）[1]改劑型而成的新藥，是由手掌參、黃精、玉竹、何首烏（制）、廣棗五味藥材組成，主要用于腎寒、腎虛、精血不足、筋骨酸痛、年邁體弱等癥狀，具有補腎壯陽、滋補強身的功能[1]。據文獻報道，參竹精片中的玉竹[2]、廣棗[3]、何首烏（制）[4]、黃精[5]均含有黃酮類成分?？傸S酮的含量測定方法有紫外-可見分光光度法[6-9]、熒光分光光度法[10]、高效液相色譜法[11-12]、薄層掃描法[13]、薄層-紫外分光光度法[14]、毛細管電泳法[15]等。有關參竹精片劑的定性定量報道有薄層鑒別[16]和大黃素的含量測定[17]，但未見有關總黃酮的報道，本文采用分光光度法對參竹精片劑中總黃酮的含量測定方法進行研究，為參竹精片的質量控制及闡釋其藥效物質基礎提供一定的科學依據。

1 儀器與試藥

AgiLent 8453紫外-可見分光光度儀（美國安捷倫科技公司）；DL-720D型數控超聲儀（上海之信儀器有限公司）；SARTORIUS-BS224S型電子分析天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）；其他容量儀器均經過校正。

參竹精片（內蒙古元和藥業有限公司生產，批號：120601、120602、140101、140102、140401、140402、140403、140404），蘆丁對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：100080-200707）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 定性鑒別

稱取參竹精片劑粉末0.5 g，置具塞錐形瓶中，加入80%乙醇25 mL，密塞，超聲處理30 min，濾過，濾液蒸去乙醇，加乙酸乙酯20 mL萃取，萃取液揮干，殘渣加80%乙醇10 mL溶解，作為鑒別用溶液。

2.1.1 鹽酸-鎂粉反應取供試液1 mL，分置兩支試管中，其中一支加入少量鎂粉，并滴加濃鹽酸數滴，同置于水浴上加熱1 min后，取出觀察，不加鹽酸鎂粉的溶液為黃色，加鹽酸鎂粉變為紅棕色。

2.1.2 三氯化鋁反應取供試液各1 mL，分置兩支試管中，其中一支加入少量1%三氯化鋁溶液，不加三氯化鋁溶液為黃色，加三氯化鋁溶液為黃綠色熒光。

2.1.3 氨水反應取供試液各1 mL，分置兩支試管中，其中一支加少量氨水，不加氨水溶液為淡黃色，加氨水溶液為橙色。

2.2 定量測定

2.2.1 提取溶劑的選擇取本品（批號：120601）粉末約0.25 g4份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別以甲醇、60%乙醇、80%乙醇和95%乙醇作溶劑，超聲提取40 min，測定其含量。結果總黃酮含量分別為3.15%、3.44%、3.67%和1.37%?？梢姡捎?0%乙醇作為提取溶劑總黃酮含量最高，故選擇80%乙醇作為提取溶劑。

2.2.2 提取時間的選擇取本品粉末（批號：120601）約0.25 g 4份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加80%乙醇25 mL，分別超聲處理20、30、40、60 min，測定其含量。結果總黃酮含量分別為2.98%、3.08%、3.67%、3.35%。可見，提取40 min總黃酮含量最高，故選定提取時間為40 min。

2.2.3 供試品溶液的制備取參竹精片10片，精密稱定，研細，取粉末約0.25 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%乙醇25 mL，密塞，稱重，超聲處理40 min，放冷，再稱重，用溶劑補足減失重量，濾過，取續濾液作為供試品溶液。

2.2.4 亞硝酸鈉用量的選擇精密量取同一供試品溶液（批號：120601）5份各1 mL，置10 mL量瓶中，分別精密加5%亞硝酸鈉溶液0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mL，混勻，放置6 min；精密加10%硝酸鋁溶液0.3 mL，混勻，放置6 min；加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，用80%乙醇稀釋至刻度，混勻，放置15 min，測定含量，結果總黃酮含量分別為2.98%、3.30%、3.39%、3.37%和3.27%?？梢?，亞硝酸鈉加0.5 mL時，總黃酮含量最高，故亞硝酸鈉的加入量確定為0.5 mL。

2.2.5 硝酸鋁用量的選擇精密量取同一供試液（批號：120601）5份各1 mL，置10 mL量瓶中，精密加5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，混勻，放置6 min；分別精密加10%硝酸鋁溶液0.1、0.3、0.5、0.7、1.0 mL，混勻，放置6 min；加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，用80%乙醇稀釋至刻度，混勻，放置15 min，測定含量，結果總黃酮含量分別為2.98%、3.19%、3.36%、3.31%、3.28%?？梢?，10%硝酸鋁加0.5 mL總黃酮含量最高，故選硝酸鋁的加入量為0.5 mL。

2.2.6 氫氧化鈉用量的選擇取同一供試液（批號：120601）5份各1 mL，置10 mL量瓶中，精密加5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，混勻，放置6 min；加10%硝酸鋁溶液0.5 mL，混勻，放置6 min；分別精密加1 mol/L氫氧化鈉溶液2、3、4、5、6 mL，用80%乙醇稀釋至刻度，混勻，放置15 min，測定含量，結果總黃酮含量分別為2.34%、3.34%、3.66%、3.58%、3.37%?？梢姡瑲溲趸c加4 mL時，總黃酮含量最高，故選氫氧化鈉加入量為4 mL。

2.2.7 測定波長的選擇精密量取供試品溶液l mL，按照上述條件顯色后，在400～800 nm波長范圍內進行光譜掃描，結果見圖1。由圖1可見，最大吸收波長在495 nm處，故選擇495 nm為測定波長。

圖1 供試品顯色后的光譜圖

2.2.8 標準曲線的制備精密稱取于120℃干燥至恒重的蘆丁對照品適量，加80%乙醇溶解并稀釋成每1毫升含蘆丁0.204 mg的溶液，作為對照品溶液。分別精密量取上述對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5 mL，置10 mL量瓶中，精密加5%亞硝酸鈉溶液0.5 mL，搖勻，放置6 min，精密加10%硝酸鋁溶液0.5 mL，搖勻，放置6 min，再加1 mol/L氫氧化鈉溶液4 mL，分別用80%乙醇至刻度，搖勻，放置15 min，以試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在495 nm的波長處測定吸光度，以濃度C（mg/mL）為橫坐標，吸光度A為縱坐標，繪制標準曲線，見圖2。以吸光度對濃度作線性回歸，得回歸方程：A=12.815C-0.0064（r=0.9997），可見濃度在0.0102～0.0714 mg/mL范圍內，與吸光度呈良好的線性關系。

圖2 蘆丁標準曲線

2.2.9精密度試驗取同一供試品溶液（批號：140404），按上述方法顯色后，測定吸光度，連續測定6次，結果分別是0.609、0.609、0.607、0.608、0.608、0.608，平均值為0.608，RSD為0.14%。表明該法的精密度較好。2.2.10穩定性試驗對顯色后的供試品溶液（批號：140404），分別在0、10、20、30、40 min時測定吸光度，共測定5次，結果分別是0.609、0.603、0.599、0.590、0.580，平均吸收值為0.596，RSD為1.91%。結果表明：供試品溶液顯色后在40 min內穩定。

2.2.11 重復性試驗取本品（批號：140404）粉末約0.25 g 6份，精密稱定，按“樣品含量測定”項下操作，測定吸光度，計算含量，結果見表1。提示，該法的重復性較好。

表1 重復性試驗結果

2.2.12 加樣回收率試驗取已知含量的參竹精片劑粉末（批號：140404，含量4.8%）約0.125 g 9份，精密稱定，分別置具塞錐形瓶中，分別精密加入蘆丁對照品適量（約相當于處方量的80%、100%、120%各3份），以下按“供試品溶液制備”項下操作，制備回收率測定溶液，并按“樣品含量測定”項下操作，測定吸光度，計算回收率，結果見表2。

表2 加樣回收率試驗結果

2.2.13 樣品含量測定精密量取供試品溶液1 mL，置10 mL量瓶中，按“標準曲線的制備”項下方法操作，以不加氫氧化鈉的測定液為空白，測定吸光度，用回歸方程計算樣品中總黃酮含量，分別對8批參竹精片劑中總黃酮的含量進行測定，結果見表3。

表3 樣品含量測定結果（n=3）

3 討論

3.1 空白的選擇

分別以試劑、供試品溶液和不加氫氧化鈉的測定液作空白，在400～800 nm波長范圍內進行光譜掃描，結果以試劑為空白，在此波長范圍內無明顯的吸收峰，其余兩空白在500 nm左右均有吸收峰，且測定結果基本一致，因此本實驗采用不加氫氧化鈉的測定液作為空白。

3.2 研究意義

本研究首次采用紫外-可見分光光度法對參竹精片中總黃酮的含量進行了測定，通過方法學考察，表明該法簡便、快速、測定結果準確可靠，為闡釋蒙藥參竹精片的藥效物質基礎及其質量控制提供科學依據，有關參竹精總黃酮的藥效還有待于進一步研究。

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（收稿日期：2014-08-07本文編輯：衛軻）

The determination of total flavonoids in Shenzhujing Tablet

WEN Aiping1ZHANG Xiuyan1WU Weidong2XIANG Ping1CHEN Xiaoxia11.College of Pharmacy,Inner Mongolia Medical University,Inner Monggol Autonomous Region,Huhhot010110,China;2.Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of Inner Mongolia Medical University,Inner Monggol Autonomous Region,Huhhot010050,China

Objective To establish the method of determination for total flavonoids in Shenzhujing Tablet.Methods The ultrasonic extraction was used,and rutin was used as reference substance,colorimetry was used to determine the total flavonoids in Shenzhujing Tablet from different batches,by flavonoids and sodium nitrite-aluminum nitrate-sodium hydroxidc producing color under alkaline conditions.Results Rutin showed good linear relationship in the range of 0.0102-0.0714 mg/mL(r=0.9997),the average recovery was 98.80%,RSD was 0.86%(n=9).Conclusion The method is simple,reproducible,the results are accurately and reliable and can be used to quality control of Shenzhujing Tablets.

Shenzhujing Tablet;Total flavonoids;Colorimetry

R284.2

B

1673-7210淵2014冤11淵b冤-0087-04

2014-08-07本文編輯：衛軻）

內蒙古自治區衛生和計劃生育委員會醫療衛生科研計劃項目（編號201302051）。

溫愛平（1962.1-），女，教授，碩士生導師，主要從事中蒙藥質量研究。

鄔衛東（1960.10-），男，主任藥師，主要從事藥品質量檢驗工作。