氫氣能減少人肺上皮細胞系缺氧/復氧損傷后炎性因子釋放

劉軍肖，韓晨燕，付國俊

(1.河北省人民醫院呼吸內科，河北石家莊050051;2.河北省直機關第一門診部保健科，河北石家莊050051;3.滄州市人民醫院皮膚科，河北滄州061000)

肺部良好的血液循環是組織細胞攝取氧及保證細胞生存的基本條件，肺部缺血、缺氧誘發過度的炎性反應，是肺損傷重要病理過程［1］。近年來，研究發現氫氣具有抗炎作用，減輕缺血再灌注損傷等炎性因子過量釋放［2］。本實驗擬探討氫氣對肺細胞缺氧復氧損傷后炎性反應的影響，進一步證明氫氣對肺細胞缺氧復氧后炎性因子的作用。

1 材料與方法

1.1 材料:BEAS-2B 人正常肺上皮細胞(中國科學院細胞庫)。缺氧培養箱為長沙華曦電子科技有限公司生產的YCP-50S 三氣培養箱，使用99.9 % N2。ELISA 試劑盒(R＆D公司)。肺細胞系A549(ATCC 公司)。DMEM(Invitrogen 公司)。

1.2 細胞培養及分組:細胞應用含10%胎牛血清的DMEM培養。當細胞匯合后，消化、傳代，細胞傳代3 次后，用于實驗。富氫液的制備:將含10%胎牛血清的DMEM 培養基置于高純氫氣環境中，0.4 MPa 壓力下加壓暴露4 h，至氫氣溶解于培養基達到飽和狀態，放于4 ℃貯存備用。實驗開始后，將H/R 和H/R+H2組細胞于缺氧培養箱中培養60 min，后于正常培養箱中繼續培養30 min。分為4 組:Con:對照組;Con +H2:對照+氫氣組;H/R:缺氧/復氧損傷組;H/R+H2:缺氧/復氧損傷+氫氣組。實驗結束后，收集細胞及培養液備用。

1.3 檢測指標:MTT 法檢測細胞活力:將細胞接種于96 孔板，應用MTT 和DMSO，在酶聯免疫檢測490 nm 處吸光度值。炎性因子濃度的測定:采用ELISA 法，檢測TNF-α、IL-1β 和HMGB1 濃度，嚴格按照說明書要求進行。用Western blot 法測定NF-κB 的表達:收集細胞蛋白，進行凝膠電泳、轉膜、封閉后，用NF-κB 單克隆抗體及二抗進行孵育?！?br>