羅格列酮對BIU-87膀胱癌細胞系轉移能力的影響

何 毅，李映川，章 卓

(瀘州醫學院1.附屬醫院泌尿外科;2.藥理教研室，四川瀘州646000)

膀胱癌是常見的惡性腫瘤之一，其發病率居惡性腫瘤第9位，發生機制尚不清楚，過氧化物酶體增殖物激活受體(peroxisome proliferator activatcd receptor-γ，PPAR-γ)是一種細胞內的轉錄因子，與腫瘤細胞的分化、增殖密切相關，PPAR-γ 可能與膀胱癌發生、轉移和侵襲有關［1］。羅格列酮屬于噻唑烷二酮類藥物，是過氧化物酶體增殖物激活受體激動劑。據此，通過羅格列酮干預后觀察BIU-87 膀胱癌細胞系的侵襲和黏附能力，可以判斷PPAR-γ 與膀胱癌體外侵襲和黏附能力的關系，為膀胱癌可能的轉移機制提供科學依據。

1 材料與方法

1.1 試劑:BIU-87 膀胱癌細胞系(上海拜力生物試劑有限公司);PPAR-γ 激動劑羅格列酮(浙江萬馬公司);Transwell小室(Costar Cambridge 公司);Matrigel 膠;趨化因子人纖連蛋白(BD 公司);CCK-8 試劑盒(碧云天生物技術研究所);兔抗人PPAR-γ、MMP-9 和β-actin 抗體及羊抗兔二抗(Abcam 公司)。

1.2 CCK-8 法檢測羅格列酮對BIU-87 膀胱癌細胞活力影響:BIU-87 膀胱癌細胞常規培養。取5 ×105個/L 對數增殖期BIU-87 膀胱癌細胞接種到96 孔板中，24 h 后將96 孔板分為對照組、羅格列酮5、10、20、40 和80 mg/L 組，每個濃度4個復孔，處理24 h 后每孔加入CCK-8 10 μL 繼續培養1 h，酶標儀450 nm波長下檢測各孔吸光度值，以A 值反映細胞活力情況。實驗重復3 次。抑制率= (1－實驗組A 值/對照組A值)×100%。

1.3 羅格列酮對BIU-87 膀胱癌細胞侵襲能力的影響:Transwell 小室4 ℃預冷，將趨化因子人纖連蛋白(fibronectin，FN)涂于小室下層，Matrigel 膠包被于小室上層，37 ℃孵育1 h。根據1.2 結果，將實驗分為對照組、羅格列酮10 和20 mg/L組。實驗步驟為先將對數生長期的BIU-87 膀胱癌細胞經羅格列酮處理24 h，對照組細胞正常培養不作處理。……