二十味沉香丸增強低氧性肺動脈高壓大鼠肺組織PKC-α表達

王海燕，王 剛，張曉巖，李菊英，賀菊香，李生花

(青海大學醫學院病理教研室，青海西寧810001)

慢性高原病是青藏高原特有的常見病，表現為低氧血癥、紅細胞增生和肺動脈高壓。二十味沉香丸是根據藏醫學原理，采用天然沉香、丁香等20 味藏藥合成(藏藥名:阿嘎爾尼秀日布)，具有改善心肌缺血、肺功能等作用［1］。PKC 是信號傳導通路的重要成員，可能參與了肺動脈高壓肺血管重塑的形成。本研究旨在通過二十味沉香丸干預，觀察大鼠肺動脈壓、肺組織中PKC-α 表達水平的變化，探討PKC-α 在二十味沉香丸預防低氧性肺動脈高壓中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料:兔抗大鼠PKC-α 一抗和兔HRP 辣根過氧化物酶二抗(Genetex 公司)，β-actin 抗體和羊抗兔HRP 標記二抗(Santa Cruz 公司)，BCA 蛋白濃度測定試劑盒(Pierce 公司)。二十味沉香丸(青海省金珠藏藥廠)。Wistar 大鼠SPF級，雄性200 ～250g(青海省實驗動物中心，許可證號:醫動字第14-004 號)。

1.2 肺動脈高壓大鼠模型的建立和分組:將大鼠隨機分為:1)常氧對照組;2)高原低氧組;3)藥物干預組(二十味沉香丸干預)。常氧對照組在西寧(海拔2 260 m)飼養;高原低氧組和干預組(海拔4 500 m)飼養30 d。藥物干預組動物用二十味沉香丸灌胃，每天1 次。

1.2 方法

1.2.1 大鼠肺動脈壓測定:LMS-2B 雙導生理記錄儀采集、分析肺動脈壓。

1.2.2 ELISA 分析各組血清中PKC-α 的含量:按試劑盒說明書操作。

1.2.3 Westem bolt 檢測PKC-α 的表達:使用PIPA 裂解液提取各組肺組織蛋白，BCA 法定量。后上樣、轉膜、封閉。兔抗鼠PKC-α 一抗(1∶1 000)，4 ℃過夜。加入羊抗兔二抗(1∶5 000)。LI-COR Odyssey 成像檢測，β-actin 為內參計算相對表達量。

1.2.4 免疫組化檢測PKC-α 的表達:各組肺組織切片脫蠟、水化、抗原修復、封閉，加入兔抗鼠PKC-α 一抗(1∶1 000)，4 ℃過夜。……