小鼠脊髓損傷后周細胞促進脊髓血管新生

荊瀛黎，武清斌，苑曉晨，李炳蔚，劉明明，張曉艷，劉淑英，李宏偉，修瑞娟

(中國醫學科學院北京協和醫學院衛生部微循環重點實驗室微循環研究所，北京100005)

脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)可導致血管破裂和血管內皮細胞丟失。血管損傷可繼發性引起缺氧、缺血和炎性反應等病理反應。研究表明脊髓損傷后的血管新生有利于患者運動功能的恢復;血管密度增加與運動功能的提高密切相關［1-2］。

周細胞定位在微血管表面，對血管新生、血管重塑及穩定性等均有重要作用［3］。脊髓微血管周細胞覆蓋率較外周組織更高，提示脊髓周細胞可能具有更為重要的功能［3-4］。近年來，已有學者關注周細胞在中樞神經系統疾病病理變化中的作用，如腦缺血時周細胞大量丟失［5］，提示周細胞缺失可能與腦、脊髓等中樞神經系統微血管功能異常有關［6］。本研究擬探討周細胞在脊髓損傷后脊髓微血管新生中的作用。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要試劑:FITC-番茄凝集素(lycopersicon esculentum agglutinin lectin，LEA)(Sigma 公司);兔單克隆PDGFRβ 抗體、兔多克隆CD13 抗體和山羊單克隆CD31 抗體(Abcam 公司);FITC-標記的山羊抗兔抗體和TRITC-標記的兔抗山羊抗體(Santa Cruz 公司)。

1.1.2 實驗動物:SPF 級雄性C57BL/6(18 ～22 g)小鼠36 只［中國醫學科學院醫學實驗動物研究所，許可證號SCXK(京)2009-0007］。本實驗方案已獲得中國醫學科學院微循環研究所實驗動物倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 脊髓損傷小鼠模型的建立及分組:將36 只小鼠隨機分為椎板切除術組(sham 組)，損傷后2、7和14 d 組(S2、S7 和S14 組)，9 只/組。俯臥位固定并麻醉小鼠，參照文獻［7-8］中方法對T10 脊髓行椎板切除術，制備脊髓損傷模型，以鼠尾出現無規則痙攣性擺動為造模成功標志。……