華蟾素注射液抗肝癌細胞多藥耐藥性的蛋白質組學分析

韋 艷，盧 珩，王榮榮，陸艷玲，梁 鋼

(1.武警廣西總隊醫院藥劑科，廣西南寧530003;2.廣西醫科大學藥學院藥理教研室，廣西南寧530021)

華蟾素為干蟾皮的水化萃取物，其主要活性成分為蟾毒內酯類化合物，包括蟾毒靈、脂蟾蜍配基、華蟾酥毒基等。華蟾素注射液(cinobutacini injection，CINO)臨床上主要用于中、晚期腫瘤以及乙型肝炎等疾病，尤其在對肝癌的治療中有顯著的效果［1-2］。廣西是肝癌高發地區，中藥逆轉肝癌多藥耐藥性(multidrug resistance，MDR)的研究已成為一個熱點。有研究報道華蟾素降低P-糖蛋白表達而降低人乳腺細胞耐藥［3］，同時肝癌MDR 機制是多途徑多通路的，本實驗以華蟾素注射液逆轉肝癌細胞潛在多藥耐藥相關蛋白質為主要研究內容，利用雙向電泳及質譜分析技術，篩選華蟾素注射液作用于肝癌耐藥細胞前后的表達差異蛋白，分析華蟾素逆轉肝癌細胞多藥耐藥性的潛在分子機制，為臨床聯合用藥以減少耐藥的產生提供理論支持。

1 材料與方法

1.1 試劑

耐5-氟尿嘧啶細胞Bel-7402/FU(南京凱基生物科技發展有限公司);華蟾素注射液(安徽金蟾生化股份有限公司)。

1.2 細胞培養

用含10%胎牛血清的RPMI 1640 培養基培養，PBS 緩沖液清洗細胞，0.25%胰蛋白酶消化傳代，置37 ℃、5 % CO2的培養箱中培養。倒置相差顯微鏡觀察細胞增殖情況，取對數增殖期細胞用于實驗。

1.3 MTT 法檢測華蟾素注射液的細胞敏感性及耐藥逆轉作用

濃度為1 × 105個/mL 的耐5-氟尿嘧啶細胞的單細胞懸液種于同一96 孔板中，每孔100 μL，設5個平行孔，培養過夜，加入的華蟾素注射液濃度為:0.035、0.07、0.14、0.28、0.56、1.12 和2.24 μg/mL，設陰性及空白對照，最終體積200 μL。……