食品中安定和氯丙嗪殘留檢測研究進展

李向麗, 張 娜， 王文林

(中山火炬職業技術學院，廣東中山 528436)

食品安全是關系到國計民生的大事。近幾年來，世界各地發生了諸多有關食品安全的事件，引起了國際、國內社會的廣泛關注和高度重視，而肉、蛋、奶等動物性食品，在我國消費食物構成中已占有愈加重要的位置。在食品安全問題備受關注的同時，鎮靜劑的使用也逐漸引起人們的重視。主要是個別商販在畜禽飼養及運輸過程中擅自非法使用鎮靜劑類藥物，最終可能導致畜禽產品中該類藥物的殘留，造成食品安全隱患，嚴重威脅人們的身體健康。目前，我國已將鎮靜劑類藥物列入食品動物禁用的獸藥及其他化合物清單[1-3]。

近年來，個別飼料生產企業為了追求飼料的轉化率和高額利潤，不顧國家的法律法規，在生產環節加入鎮靜劑類藥物，尤其是養豬生產中，飼喂安定等可導致神經麻痹、安靜嗜睡從而使豬活動量降低，達到快速催肥，縮短出欄時間，增加飼料報酬的目的。在運輸過程中，安定和氯丙嗪均可降低豬的應激反應程度，減少能耗，降低成本。但飼喂過安定的畜禽體內會有該藥物的殘留，人類通過進食攝入，并經長期蓄積后可引起中毒。目前，在動物源性食品中已全面被禁止檢出安定[5-8]。想要對食品中的這些鎮靜劑進行有效監控，建立靈敏度高、快速的檢測方法尤為必要。筆者就常見的安定和氯丙嗪兩類鎮靜劑在食品中的檢測現狀進行了綜述。

1 免疫學方法

2 色譜技術的應用

色譜法用于測定鎮靜劑類成分的殘留具有分離效率高、分析速度快、檢測靈敏度高、樣品用量少、選擇性好、可多組分同時分析測定、易于自動化等優點，但因其定性能力較差，現已大量發展了色譜與其他多種分析技術聯用。

2.1氣相色譜法張玉潔等利用氣相色譜-微電子捕獲(GC-uECD)檢測法建立了快速檢測豬肉中地西泮殘留的方法[13]。首先用乙腈超聲提取豬肉中的地西泮，C18固相萃取柱凈化，利用GC-uECD法進行殘留檢測，外標法定量。結果表明，在1～1 000 μg/L范圍內藥物色譜峰面積與濃度線性關系良好，相關系數達到0.999 4。對空白豬肉進行藥物添加回收試驗，平均回收率為83.5%～94.9%，檢出限為0.31 μg/kg，定量限為1.00 μg/kg。張澤楷等提出了氣相色譜法測定動物飼料中安定的殘留量的方法[14]。飼料經過有機溶劑提取，采用SE-54毛細管柱(30 m×0.32 mm，0.32 μm)分離，電子捕獲檢測器檢測，檢出限(2S/N)為0.007 mg/L。方法的平均回收率為79.5%～93.1%,相對標準偏差(n=8)為2.11%～4.02%。

2.3液相色譜法范盛先等建立了豬腎臟中氯丙嗪和異丙嗪殘留量檢測的高效液相色譜法[20]。豬腎臟中殘留的氯丙嗪和異丙嗪，用乙腈提取，再依次用酸化乙腈和正己烷凈化，氮氣吹干，甲醇溶解后，用Waters高效液相色譜系統，Hypersil C18柱，UV檢測器，用乙腈-水-0.5 mol/L 乙酸銨(V/V/V，50∶49∶1)為流動相，流速1.2 ml/min，波長254 nm 測定，內標法定量。結果表明，氯丙嗪在豬腎臟中的最低檢測限均為10 μg/kg，組織中添加量為10 μg/kg時，氯丙嗪的回收率為83%，批間變異系數均小于20%。王海嬌等建立了測定豬肉中安定殘留量的反相高效液相色譜法[21]。利用Al2O3層析柱對安定提取液進行凈化，高效液相色譜儀測定參數:C18柱(2 mm×150 mm,3 μm);流動相為甲醇-水-25 mmol/L乙酸銨溶液(64.8∶35.0∶0.2，V/V)；流速0.12 ml/min；光電二極管陣列檢測器，波長254 nm。試驗結果表明，提取液中各組分分離良好，安定濃度在100 ng/ml～40 μg/ml范圍內與峰面積呈線性相關，r=0.997 19,平均回收率80.8%,RSD<5%。湯文利等用高效液相色譜儀(HPLC)同時測定飼料中地西泮、安眠酮的含量[22]。在堿性條件下, 用有機溶劑提取飼料中的地西泮和安眠酮, 利用硅酸鎂小柱對提取液進行富集、凈化，用高效液相色譜儀進行檢測。HPLC 測定參數：C18柱(4.00 mm×250 mm i.d.,5 μm);流動相為乙腈-25 mmol/L乙酸銨溶液(30∶70)；流速1.00 ml/min；利用二極管陣列檢測器測定地西泮、安眠酮紫外光區的特征光譜進行定性，外標法在254、226 nm處進行定量。樣品提取液中各組分分離良好，地西泮濃度在200 ng/ml～ 100 μg/ml范圍內與峰面積呈線性相關，R=0.999 2,平均回收率92.28%～114.9%,變異系數(RSD)<5%,檢測限(S/N=3)4 ng。

2.4液相色譜-質譜法液相色譜-質譜聯用法由于進樣體積小、溶劑消耗少、靈敏度高、定性準確及檢測速度快等特點，是鎮靜劑殘留檢測的最主要手段。周德剛等采用高效液相色譜-串聯質譜建立了豬肌肉中安定的檢測方法[23]。豬肌肉組織的藥物用乙腈提取，經HLB固相柱凈化，采用正電噴霧離子源，在多反應監測(MRM)模式下測定。結果表明，安定在0.1～100 ng/ml內線性良好，相關系數r為0.998 5。在0.5、2.0、10.0 μg/kg添加水平下,加標回收率為68.2%～97.6%,檢測限為0.1 μg/kg，定量限為0.5 μg/kg。孫雷等建立了豬肉和豬腎中包括安定和氯丙嗪在內的10種鎮靜劑超高效液相色譜-串聯質譜分析方法[24]。樣品經酶解后，調節pH呈堿性，分別用乙酸乙酯和叔丁基甲醚進行萃取，高速冷凍離心去除脂肪等雜質。提取液經Waters Acquity UPLC BEH C18色譜柱分離，以0.1%甲酸乙腈溶液和0.1%甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫。電噴霧正離子(ESI + )模式電離，多反應監測(MRM)模式檢測，基質匹配標準溶液法進行定量。結果表明，10 種鎮靜劑在2～100 μg/L 范圍內呈良好的線性關系，相關系數(r)均大于0.998;10 種鎮靜劑的檢出限(S/N>3)為0.5 μg/kg，定量限(S/N>10)為1 μg/kg。3 個添加水平的回收率為64.5%～111.4%，批內、批間相對標準偏差(RSD)均小于15%。該方法具有簡便快捷、靈敏度高、定性準確等特點。錢曉東等采用高效液相色譜-串聯質譜法建立了同時測定水產品中地西泮、去甲地西泮、奧沙西泮和替馬西泮4種鎮靜劑藥物殘留的檢測方法[25]。樣品用含1%氨水的乙腈提取2次，濃縮，經正己烷去脂、HLB固相萃取柱凈化后，減壓蒸干，用甲醇-水(5∶5，V/V)定容。采用CAPCELL PAK MGⅡC18(100 mm×2.1 mm id，3.5 μm)做分離柱，以甲醇和0.1%甲酸水溶液為流動相進行梯度洗脫。采用電噴霧電離，正離子掃描，選擇反應監測，同位素內標法定量。結果表明，4 種藥物在4～250 ng/ml 范圍內呈現良好的線性關系，相關系數R2均大于0.990，定量下限均為1 μg/kg，以1、10、50 μg/kg 這3 個水平進行加標回收試驗，4種藥物的平均回收率為81.7%～119.8%，相對標準偏差為1.7%～17.3%。方法高效、靈敏，適合于水產品中這4 種鎮靜劑藥物的定量及確證分析。渠巖等建立了同時測定畜禽肉中地西泮等13種鎮靜藥物殘留量的基質固相分散-超高效液相色譜-串聯質譜方法[26]。樣品經基質固相分散樣品制備試劑盒凈化后，進行超高效液相色譜-串聯質譜分析，采用多反應監測模式，外標法定量。采用BEH C18液相色譜柱分離，以10 mmol/L 乙酸銨溶液- 甲醇為流動相進行梯度洗脫。結果表明，13種鎮靜藥物的方法檢出限為0.05～3.00 μg/kg，線性范圍內低、中、高3個添加水平的回收率為77.4%～100.2%，相對標準偏差為1.3%～14.8%。嚴麗娟等利用超高效液相色譜-高分辨飛行時間質譜，結合數據庫，建立了乳制品中地西泮、氯丙嗪等20種鎮靜劑的高通量篩查方法[27]。樣品以乙腈和酸化乙腈沉淀蛋白質和脂肪，冷凍離心濃縮，經超高效液相色譜分離，采用電噴霧離子源，正離子模式，基質匹配法進行定量分析，可在9 min內對20種鎮靜劑進行高通量篩查和定量分析。結果表明，地西泮和氯丙嗪的質量濃度分別在5～1 000 μg/L和1～500 μg/L范圍內具有較好的線性關系，檢出限分別為1.5 μg/L和0.3 μg/L，平均回收率為76.1%～108.2%，相對標準偏差為2.5%～9.0%。利用TargetAnalysis 軟件建立鎮靜劑數據庫,并應用于加標樣品的篩查分析。通過數據庫比對,樣品中添加的鎮靜劑被全部篩查出來,鑒定準確度達到了100%，保留時間偏差小于0.1 min，質量偏差小于3 mDa，同位素峰形匹配度大于89.5%。利用此方法對購自超市的8個不同品牌的50余份乳制品進行了篩查分析,均未檢出陽性樣品。

3 化學發光法

化學發光法用于測定鎮靜劑類成分的殘留具有靈敏度高、選擇性好、分析速度快、線性范圍寬等優點，但因其檢測結果穩定性和重現性較差，并且目前可被利用的發光試劑較少，使該方法的推廣應用受到制約。何樹華等利用魯米諾-鐵氰化鉀化學發光體系結合流動注射技術建立了測定氯丙嗪的化學發光新方法[28]。該方法有很高的靈敏度，檢測限為5.17×10-9g/ml(IUPAC)，線性范圍為1.0×10-8～1.0×10-6g/ml，對1.0×10-7g/ml氯丙嗪平行測定11次，其相對標準偏差為2.7%。張迎雪等提出了一種毛細管電泳化學發光聯用技術同時測定氯丙嗪和異丙嗪[29]。在酸性條件下，氯丙嗪和異丙嗪能被 Ce(Ⅳ)氧化，然后將能量轉移給熒光發射體——羅丹明6G，并以化學發光形式釋放能量。基于此，結合流動注射技術，以10 mmol/L KH2PO4/H3PO4(pH 3.5)為運行緩沖液, 實現了2種藥物的分離。此方法的線性范圍分別為4.0×10-8～2.0×10-6g/ml和2.0×10-8～2.0×10-6g/ml, 檢出限分別為 5.6 ng/ml和 3.4 ng/ml，對2.0×10-6g/ml異丙嗪平行測定9次, 相對標準偏差為2.8%。

4 總結與展望

隨著鎮靜劑的應用越來越廣泛，種類越來越多，檢測方法不僅要求高效、靈敏和準確，還要求重現性和穩定性好。目前，色譜法在鎮靜劑的檢測中應用最為廣泛。液相色譜-質譜聯用檢測技術對于鎮靜劑類藥物殘留的檢測，因其具有分辨率高、靈敏度好和分析速度快的優勢，被農業部等部門定為標準方法在廣泛應用。隨著氣相色譜法-質譜聯用檢測技術的發展，因其在靈敏度、專屬性和分離效能等方面都有優勢，在鎮靜劑類藥物殘留分析中受到越來越廣泛的關注。但檢測手段只是監控作用，從根源上解決問題還依賴于提高大眾食品安全的意識，規范食品加工企業的生產。

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