消氮顆粒對(duì)腺嘌呤所致慢性腎衰模型大鼠的保護(hù)作用

賈永慧，王艷俠，于燕莉，張淑瑜，畢云生（.濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，濟(jì)南 5003；.濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院腎內(nèi)科，濟(jì)南 5003）

慢性腎衰（CRF）是導(dǎo)致患者腎功能損害所出現(xiàn)的一系列癥狀和代謝紊亂組成的臨床綜合征，其病變呈進(jìn)行性發(fā)展，最終進(jìn)入終末期腎病[1]。由于血液透析和腎移植技術(shù)的進(jìn)步，CRF 的臨床療效已有明顯提高，但仍存在患者難耐受、費(fèi)用高、腎源不足等問題。中醫(yī)中藥在緩解癥狀、延緩病情進(jìn)展、保護(hù)殘余腎功能等方面有十分明顯的作用[2]。中醫(yī)理論認(rèn)為，腎主水，可調(diào)節(jié)機(jī)體水液代謝[3]，CRF 的主要病理基礎(chǔ)是濕濁淤邪、內(nèi)阻腎絡(luò)[4]，因此防治CRF應(yīng)以泄?jié)帷⒒钛鰹橹鱗5]。

消氮顆粒是由大黃、番瀉葉、丹參、制附子、車前子、制黃精等藥材組成的復(fù)方制劑。方中諸藥各秉所長，具有泄?jié)幔钛鲋Γ夜パa(bǔ)兼施，有驅(qū)邪扶正之效。可改善腎臟供血、調(diào)節(jié)臟腑機(jī)能、延緩CRF 發(fā)展或逆轉(zhuǎn)病情[6]。消氮顆粒在我院臨床應(yīng)用二十余年，作用效果十分明顯。本研究通過腺嘌呤復(fù)制大鼠CRF 模型，觀察消氮顆粒對(duì)CRF 模型大鼠血清常規(guī)、電解質(zhì)、尿液和腎臟病理學(xué)的影響，探討其作用機(jī)制，為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

B600A 型醫(yī)用低速離心機(jī)（河北省安新縣白洋離心機(jī)廠）；DXC800型全自動(dòng)生化分析儀（美國Beckman Coulter 公司）；BX53型顯微鏡（日本Olympus公司）。

1.2 藥品與試劑

腺嘌呤（上海笛柏化學(xué)品技術(shù)有限公司，批號(hào)：AA13，規(guī)格：100g/瓶，腺嘌呤含量≥98.0%）；消氮顆粒（濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院制劑室，批號(hào)：20110612，規(guī)格：6g/袋）；尿毒清顆粒（內(nèi)蒙古康臣藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號(hào)：20111018，規(guī)格：5g/袋）。

1.3 動(dòng)物

SPF級(jí)Wistar大鼠60只，♂，體質(zhì)量（200±20）g，購自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK（魯）20090001]。飼養(yǎng)條件：濟(jì)南軍區(qū)總醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心清潔級(jí)動(dòng)物房內(nèi)，全價(jià)營養(yǎng)顆粒飼料（購自山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心）飼養(yǎng)，自由飲水。

2 方法

2.1 復(fù)制模型與分組、給藥[7-12]

ig 腺嘌呤（200mg/kg），每天1次，連續(xù)30d，以復(fù)制大鼠CRF 模型。60只Wistar 大鼠隨機(jī)均分為6組，即正常對(duì)照（等容純化水）組、模型（等容純化水）組、尿毒清顆粒（2.088g/kg）組與消氮顆粒高、中、低劑量（3.956、1.977、0.989g/kg）組。模型復(fù)制成功后ig給藥，每天1次，連續(xù)30d。

2.2 指標(biāo)的測定

2.2.1 一般情況觀察 觀察大鼠體質(zhì)量、大小便、體毛、精神狀態(tài)、活動(dòng)狀況、攝食量、飲水量。

2.2.2 生化指標(biāo)的測定 末次給藥后，禁食不禁水24h，大鼠眼眶后靜脈叢采血，檢測血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、尿酸（UA）、電解質(zhì)[鉀（K+）、鈉（Na+）、鈣（Ca2+）、磷（P3+）]水平。末次給藥后，禁食不禁水24h，收集大鼠尿液，檢測尿蛋白（PRO）、中性粒細(xì)胞（LEU）、尿比重（SG）水平。半定量計(jì)分方法評(píng)定PRO、LEU水平：陰性，0分；±，1分；+，2分；++，3分。

2.2.3 腎臟病理學(xué)觀察 大鼠腎臟用10%中性甲醛固定液固定，常規(guī)脫水包埋，切片，常規(guī)脫蠟至水，HE染色，顯微鏡下觀察大鼠腎臟病理學(xué)變化。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 消氮顆粒對(duì)模型大鼠一般情況的影響

正常對(duì)照組大鼠體毛潤澤、光亮，行動(dòng)靈敏。模型組大鼠復(fù)制模型5～7d后逐漸出現(xiàn)多飲、多尿、少食、體質(zhì)量下降、精神萎靡、瞇眼、弓背、蜷縮、活動(dòng)減少、體毛干枯、豎毛等現(xiàn)象。與模型組比較，消氮顆粒高、中、低劑量組大鼠體質(zhì)量無明顯變化，體毛較潤澤，活動(dòng)增加，瞇眼、弓背、蜷縮現(xiàn)象減少。

3.2 消氮顆粒對(duì)模型大鼠血清生化指標(biāo)水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠血清Scr、BUN、UA、P3+濃度增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，消氮顆粒高、中、低劑量組大鼠血清Scr、BUN、UA、P3+濃度減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)果表明，消氮顆粒可明顯降低模型大鼠血清Scr、BUN、UA、P3+水平。消氮顆粒對(duì)模型大鼠血清生化指標(biāo)水平的影響見表1。

3.3 消氮顆粒對(duì)模型大鼠尿液生化指標(biāo)水平的影響

與正常對(duì)照組比較，模型組大鼠尿液PRO、LEU 水平升高，SG降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與模型組比較，消氮顆粒高、中、低劑量組大鼠尿液PRO、LEU 水平降低，SG 升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01或P＜0.05）。結(jié)果表明，消氮顆粒可改善模型大鼠尿常規(guī)指標(biāo)，減輕腎損傷。消氮顆粒對(duì)模型大鼠尿液生化指標(biāo)水平的影響見表2。

表1 消氮顆粒對(duì)模型大鼠血清生化指標(biāo)水平的影響（，n＝10）Tab 1 Effects of Xiaodan granules on serum biochemical indexs of model rat（，n＝10）

表1 消氮顆粒對(duì)模型大鼠血清生化指標(biāo)水平的影響（，n＝10）Tab 1 Effects of Xiaodan granules on serum biochemical indexs of model rat（，n＝10）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.01

3.4 大鼠腎臟病理學(xué)觀察結(jié)果

正常對(duì)照組大鼠腎臟顏色暗紅，組織學(xué)未見明顯改變，HE染色觀察腎小管、腎小球、系膜區(qū)寬度、系膜基質(zhì)、間質(zhì)均未見病變。模型組大鼠腎臟呈灰白色，HE 染色與正常對(duì)照組比較，系膜區(qū)明顯增寬，系膜基質(zhì)明顯增多，小管間質(zhì)可見大量炎細(xì)胞浸潤，血管壁增厚，已造成CRF。各給藥組大鼠腎臟表面均出現(xiàn)不同程度的紅、白相兼的顆粒狀紋理。與模型組比較，消氮顆粒高劑量組大鼠腎臟間質(zhì)有所改善，炎細(xì)胞減少；消氮顆粒中劑量組大鼠腎臟間質(zhì)明顯改善，有少量炎細(xì)胞浸潤，血管壁改善明顯；消氮顆粒低劑量組大鼠腎臟間質(zhì)有所改善，炎細(xì)胞減少，血管壁變薄。大鼠腎臟病理學(xué)切片見圖1。

表2 消氮顆粒對(duì)模型大鼠尿液生化指標(biāo)水平的影響（，n＝10）Tab 2 Effects of Xiaodan granules on urine biochemical indexs of rat（，n＝10）

表2 消氮顆粒對(duì)模型大鼠尿液生化指標(biāo)水平的影響（，n＝10）Tab 2 Effects of Xiaodan granules on urine biochemical indexs of rat（，n＝10）

與正常對(duì)照組比較：＊P＜0.01；與模型組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model group：#P＜0.05，##P＜0.01

圖1 大鼠腎臟病理學(xué)切片（HE，100×）A.正常對(duì)照組；B.模型組；C.尿毒清顆粒組；D.消氮顆粒高劑量組；E.消氮顆粒中劑量組；F.消氮顆粒低劑量組Fig 1 Renal pathological section microscope of rats（HE，100×）A.normal control group；B.model group；C.Niaoduqing pellet group；D.Xiaodan pellet high-dose group；E.Xiaodan pellet medium-dose group；F.Xiaodan pellet low-dose group

4 討論

大鼠ig腺嘌呤30d后，血清Scr、BUN、水平UA、P3+明顯升高，與正常對(duì)照組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），表明復(fù)制模型成功，其復(fù)制模型方法簡便可控。ig給藥后，消氮顆粒能明顯降低模型大鼠血清Scr、BUN、UA、P3+水平，改善尿常規(guī)指標(biāo)，減緩腎組織損傷。其結(jié)果與方中各藥功效一致，方中大黃可通腑瀉濁、蕩滌腸胃、炙熱積滯，促使糟粕毒素外排，番瀉葉瀉下通便、利水消脹，車前子功于降瀉、清熱利濕、清肺祛痰、利尿通淋，此三味藥均可促進(jìn)機(jī)體對(duì)代謝物的排泄，改善血常規(guī)、尿常規(guī)的各項(xiàng)指標(biāo)；附子用以峻補(bǔ)元陽、散寒除濕、溫壯腎陽，可改善腎功能；另外丹參有活血祛瘀、涼血消癰[13]之功效。大量現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，丹參能有效地改善腎功能，減少細(xì)胞的凋亡，保護(hù)組織、改善循環(huán)和抗氧化，而且改善移植腎功能療效明顯[14]；制黃精補(bǔ)氣養(yǎng)陰、健脾、潤肺、益腎[15]，可減輕腎組織損傷。

本研究發(fā)現(xiàn)，消氮顆粒中劑量組的治療效果優(yōu)于高、低劑量組，這與方中主藥大黃有關(guān)。現(xiàn)代研究表明，大黃能夠明顯增強(qiáng)胃腸蠕動(dòng)功能[16]、加速內(nèi)容物排泄、減少滯留時(shí)間，從而影響藥物代謝吸收，降低治療效果。另外，大黃藥性苦寒瀉，高劑量服用大黃易引起腹痛、腹瀉等癥狀。在臨床應(yīng)用過程中應(yīng)根據(jù)患者胃腸道情況，合理調(diào)整用藥劑量。

筆者應(yīng)用生化指標(biāo)結(jié)合病理形態(tài)學(xué)的研究，探討了消氮顆粒對(duì)腺嘌呤所致CRF 模型大鼠腎組織的保護(hù)作用，結(jié)果證明，消氮顆粒療效確切，可為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

[1]王海燕.腎衰竭[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2003：290.

[2]熊有明，謝正蘭.慢性腎衰的中醫(yī)藥治療進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述，2009，15（20）：3156.

[3]孫廣仁.中醫(yī)基礎(chǔ)理論[M].北京：中國中醫(yī)藥出版社，2002：93.

[4]周全榮，熊景，李航.腎纖維化與腎絡(luò)瘀阻關(guān)系的研究現(xiàn)狀[J].上海中醫(yī)藥雜志，2005，39（3）：63.

[5]曾瑩，張玉，趙瑛，等.葆腎康顆粒對(duì)大鼠慢性腎衰竭的防治作用[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2010，29（10）：1255.

[6]李春雨.基于代謝組學(xué)的大黃治療慢性腎功能衰竭的有效性評(píng)價(jià)及作用機(jī)制研究[D].成都：成都中醫(yī)藥大學(xué)，2010.

[7]李娟，何海霞，周遠(yuǎn)大，等.褐藻多糖硫酸酯精提物對(duì)慢性腎衰模型大鼠的保護(hù)作用研究[J].中國藥房，2012，23（23）：2120.

[8]杜卉蓮，傅曉晴.慢性腎衰動(dòng)物的模型制備及臨床應(yīng)用[J].中醫(yī)研究，2005，18（12）：53.

[9]Yokozawa T，Zheng PD，Oura H，et al.Animal model of adenine-induced chronic renal failure in rats[J].Nephron，1986，44（3）：230.

[10]梁靚靚，史業(yè)東，陳蘇寧.扶正排毒湯對(duì)腺嘌呤所致大鼠慢性腎功能衰竭模型的影響[J].天津中醫(yī)藥，2010，27（5）：409.

[11]嚴(yán)家榮，鄭桂蘭，黃小瓊，等.尿毒清顆粒防治慢性腎功能衰竭的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2010，17（10）：2077.

[12]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：31.

[13]國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：一部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：70.

[14]雷偉，周江橋，王玲瓏，等.丹參與CsA對(duì)移植腎缺血再灌注損傷防治作用的對(duì)比研究[J].臨床外科雜志，2005，13（6）：366.

[15]彭欣，張少華.中藥方劑學(xué)[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，2005：121、188、174、125.

[16]閆美娟，隋峰，林娜.大腸調(diào)節(jié)胃腸功能的作用及機(jī)制研究進(jìn)展[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16（4）：181.