膠體金免疫層析法聯(lián)檢食品中5 種典型沙門(mén)氏菌模型的建立和優(yōu)化

夏詩(shī)琪，徐超蓮，劉道峰，郭 琦，吳松松，賴衛(wèi)華*

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

膠體金免疫層析法聯(lián)檢食品中5 種典型沙門(mén)氏菌模型的建立和優(yōu)化

夏詩(shī)琪，徐超蓮，劉道峰，郭 琦，吳松松，賴衛(wèi)華*

（南昌大學(xué) 食品科學(xué)與技術(shù)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江西 南昌 330047）

采用膠體金標(biāo)記抗沙門(mén)氏菌單克隆抗體，將沙門(mén)氏菌單克隆抗體和驢抗鼠抗體（二抗）噴涂于硝酸纖維膜上分別作為檢測(cè)線和質(zhì)控線，研制能聯(lián)檢5 種典型沙門(mén)氏菌（甲型副傷寒沙門(mén)氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、鴨沙門(mén)氏菌）的膠體金免疫層析試紙條。結(jié)果表明，該試紙條能達(dá)到同時(shí)檢測(cè)5 種沙門(mén)氏菌的目的，其中甲型副傷寒沙門(mén)氏菌的檢測(cè)靈敏度最高，為105CFU/mL；鼠傷寒沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌和鴨沙門(mén)氏菌的檢測(cè)靈敏度為106CFU/mL。沙門(mén)氏菌加入量為10～100 CFU時(shí)，增菌16～20 h，該試紙條能夠檢測(cè)出牛奶、雞蛋樣本中的5 種沙門(mén)氏菌。本實(shí)驗(yàn)研制的試紙條能快速高效地聯(lián)檢食品中5 種典型的沙門(mén)氏菌，特異性高、靈敏度好，在對(duì)多種沙門(mén)氏菌進(jìn)行聯(lián)檢方面有很重要的應(yīng)用價(jià)值。

沙門(mén)氏菌；膠體金免疫層析試紙條；聯(lián)檢；食品樣本

沙門(mén)氏菌（Salmonella）是一類(lèi)重要的食源性致病菌。目前，沙門(mén)氏菌血清型約有2 500多種[1]，它可以引發(fā)胃腸炎、傷寒、敗血癥等多種疾病[2-3]。沙門(mén)氏菌的暴發(fā)具有全球性，據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球每年因感染沙門(mén)氏菌而患胃腸炎的患者約有9 380萬(wàn)，死亡人數(shù)高達(dá)15萬(wàn)人[4]。美國(guó)、丹麥、俄羅斯等發(fā)達(dá)國(guó)家均有沙門(mén)氏菌感染事件的報(bào)道。在美國(guó)，每年被食源性病原菌感染的患者中約100萬(wàn) 例是由沙門(mén)氏菌導(dǎo)致的[5]。2010年3—9月，在丹麥由鼠傷寒沙門(mén)氏菌引起的感染病例高達(dá)172 例[6]。2013年，俄羅斯彼爾姆某學(xué)校暴發(fā)了一場(chǎng)因沙門(mén)氏菌而引起的食物中毒案例，導(dǎo)致150 名中學(xué)生患病[7]。近年來(lái)，我國(guó)受沙門(mén)氏菌的威脅越來(lái)越大。2001年我國(guó)疾病預(yù)防控制中心在全國(guó)11 個(gè)省市設(shè)點(diǎn)采樣并檢測(cè)了七大類(lèi)農(nóng)產(chǎn)品及食品（生肉、熟肉、生奶、冰激淋、酸奶、水產(chǎn)品和蔬菜共4 034 份樣品），沙門(mén)氏菌平均檢出率為3.32%[8]。2009—2011年，相關(guān)部門(mén)對(duì)在東北、西北、華東地區(qū)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)隨機(jī)抽取的1 779 份禽肉樣品進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示樣品沙門(mén)氏菌的平均污染率為12.5%[9]。因此，建立快速有效的檢測(cè)方法對(duì)于沙門(mén)氏菌的臨床診斷與預(yù)防具有重大的意義。

膠體金免疫層析技術(shù)（colloidal gold immunochromatographic assay，GICA）是一種以膠體金為示蹤標(biāo)記物，基于抗原抗體反應(yīng)的免疫標(biāo)記技術(shù)[10]。該方法快速便捷，操作簡(jiǎn)單，不需要特殊設(shè)備就能得到肉眼可見(jiàn)的結(jié)果，適用于現(xiàn)場(chǎng)大量樣品的快速篩查[11-13]。沙門(mén)氏菌可分為五大類(lèi)，其中包括甲組的甲型副傷寒沙門(mén)氏菌（Salmonella paratyphi A）、乙組的鼠傷寒沙門(mén)氏菌（Salmonella typhimurium）、丙組的豬霍亂沙門(mén)氏菌（Salmonella choleraesuis）、丁組的腸炎沙門(mén)氏菌（Salmonella enteritidis）和戊組的鴨沙門(mén)氏菌（Salmonella anatum）。本研究建立雙抗夾心模型，研制膠體金試紙條聯(lián)檢食品樣本中5 種典型的沙門(mén)氏菌，并對(duì)試紙條的靈敏度和特異性進(jìn)行了評(píng)價(jià)。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑與儀器

牛奶、雞蛋 南昌天虹購(gòu)物中心。

氯化金（HAuCl4）、酪蛋白、檸檬酸三鈉 美國(guó)Sigma公司；正辛酸（純度＞98.0%） 梯希愛(ài)（上海）化成工業(yè)發(fā)展有限公司；BPW培養(yǎng)基、SBG磺胺增菌液、P-10B新生霉素、P-73 0.1%煌綠溶液 北京陸橋技術(shù)有限公司；5 種沙門(mén)氏菌（包括甲型副傷寒沙門(mén)氏菌（ATCC 9150）、鼠傷寒沙門(mén)氏菌（ATCC 13311）、豬霍亂沙門(mén)氏菌（ATCC 10708）、腸炎沙門(mén)氏菌（ATCC 13076）和鴨沙門(mén)氏菌（ATCC 9150），編號(hào)分別為A、B、C、D、E）、單核增生李斯特菌ATCC 13932、弗氏檸檬酸桿菌ATCC 43864 美國(guó)典型菌種保藏中心；19 種非沙門(mén)氏菌，包括阪崎腸桿菌CMCC 45401、阪崎腸桿菌CMCC 45402、大腸桿菌CMCC 25922、金黃色葡萄球菌CMCC 45401、單核增生李斯特菌CMCC 54007、威爾李斯特菌CMCC 35897、西爾李斯特菌CMCC 35967、英諾克李斯特菌CMCC 11288、綿羊李斯特菌CMCC 19119、格式李斯特菌CMCC 25401、蠟樣芽胞桿菌CMCC 49027、福氏志賀氏菌CMCC 2457、宋內(nèi)氏志賀氏菌CMCC 51592 中國(guó)醫(yī)學(xué)微生物菌種保藏管理中心；枯草芽孢桿菌168、白色假絲酵母Z1、大腸桿菌NCTC 12900、副溶血弧菌ZDBE 江西疾病預(yù)防控制中心。

鼠抗沙門(mén)氏菌單克隆抗體（鼠抗甲型副傷寒沙門(mén)氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、鴨沙門(mén)氏菌單克隆抗體，編號(hào)為8H10-B3，試紙條T線上的相應(yīng)抗體編號(hào)為5G6-D7；鼠抗豬霍亂沙門(mén)氏菌單克隆抗體，編號(hào)為11D8-D4，試紙條T線上的相應(yīng)抗體編號(hào)為9G6-A4）為本實(shí)驗(yàn)室制備（免疫原：該5 種沙門(mén)氏菌外膜蛋白，制備方法：有限稀釋法，效價(jià)：8H10-B3為640 000；5G6-D7為2 560 000；11D8-D4為2 560 000；9G6-A4為1 280 000）；驢抗鼠IgG 無(wú)錫中德伯爾生物技術(shù)有限公司。

硝酸纖維素膜、吸水紙、樣品墊、結(jié)合墊 美國(guó)密理博公司；紫外分光光度計(jì) 上海棱光技術(shù)有限公司；點(diǎn)樣儀、試紙條切刀 美國(guó)BioDot公司；磁力攪拌器 江蘇金壇市金城國(guó)盛實(shí)驗(yàn)儀器廠；BHC-1300ⅡA/B3生物安全柜 蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司；ZHWY-2102C恒溫培養(yǎng)振蕩器 上海智誠(chéng)分析儀器制造有限公司；TGL-16臺(tái)式離心機(jī) 湖南長(zhǎng)沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；膠體金讀取儀 上海互幗科學(xué)儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)菌培養(yǎng)

將-80 ℃保存的沙門(mén)氏菌劃線接種于SS瓊脂培養(yǎng)基平板上，37 ℃培養(yǎng)18 h后挑取典型單菌落接種于液體LB培養(yǎng)基上，37 ℃培養(yǎng)18 h。其他菌在LB平板上劃線，方法同沙門(mén)氏菌。用0.01 mol/L 磷酸鹽緩沖溶液（phosphate buffered saline，PBS，pH 7.4）梯度稀釋后進(jìn)行菌落計(jì)數(shù)。

1.2.2 腹水辛酸硫酸銨沉淀法純化抗體

取腹水離心（9 000 r/min、4 ℃、30 min）后取上清液，向上清中加入2 倍體積的0.06 mol/L CH3COONa溶液（pH 5.0），用1 mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)pH 4.2～4.8。在攪拌條件下向每毫升原始腹水中逐滴加入33 μL正辛酸（純度＞98.0%）后，繼續(xù)攪拌30 min，4 ℃靜置2 h。離心（9 000 r/min、4 ℃、45 min），收集上清液，向上清液中加入1/10體積的0.1 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4），用1 mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH 7.4。4 ℃條件下緩慢加入(NH4)2SO4至終質(zhì)量濃度為0.277 g/mL（30 min內(nèi)完成），4 ℃靜置過(guò)夜。離心（9 000 r/min、4 ℃、45min），棄上清液，收集沉淀。沉淀用0.01 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）溶解，4 ℃透析3 d。

1.2.3 檸檬酸三鈉法制備膠體金

將100 mL 0.01% HAuCl4溶液加熱至沸騰，在攪拌的條件下迅速加入1.3 mL 1%檸檬酸三鈉溶液，繼續(xù)加熱攪拌，當(dāng)溶液的顏色完全變成紅色時(shí)，繼續(xù)加熱10 min后停止加熱，冷卻至室溫，4 ℃條件下保存。

1.2.4 膠體金的標(biāo)記

取60 個(gè)小燒杯按5×12呈矩陣排列，向每個(gè)小燒杯中分別加入1 mL膠體金。每列小燒杯用0.1 mol/L K2CO3溶液依次調(diào)節(jié)pH值至6、7、8、9、10。將每行小燒杯分為兩組，前6 行燒杯為第一組，其余為第2組。第1組標(biāo)記抗體8H10-B3，第2組標(biāo)記抗體11D8-D4，每一組每行抗體標(biāo)記量分別為5、10、15、20、25、30 μg/mL。封閉劑為5%酪蛋白。

1.2.5 膠體金標(biāo)記pH值和抗體標(biāo)記量的優(yōu)化

將A、B、C、D、E沙門(mén)氏菌菌液用0.01 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）稀釋至107CFU/mL。分別取100 μL A、B、D、E沙門(mén)氏菌菌液分別與4 μL第1組金標(biāo)抗體孵育5 min，用T線上噴有1.5 mg/mL抗體5G6-D7的試紙條檢測(cè)，10～15min后用膠體金讀取儀讀取試紙條T線的信號(hào)值；取100 μL C沙門(mén)氏菌菌液與4μL第2組金標(biāo)抗體孵育5min，用T線上噴有1.5 mg/mL抗體9G6-A4的試紙條檢測(cè)，10～15 min后用膠體金讀取儀讀取試紙條T線的信號(hào)值。對(duì)照組為0.01mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）。

1.2.6 試紙條T線抗體質(zhì)量濃度的確定

按照表1制備5 種不同T線抗體質(zhì)量濃度的試紙條，編號(hào)為a、b、c、d、e。在最優(yōu)pH值和抗體標(biāo)記量條件下，分別制備標(biāo)記了抗體8H10-B3和11D8-D4的免疫金。將A、B、C、D、E沙門(mén)氏菌菌液用0.01 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）稀釋至107CFU/mL，分別取100 μL菌液與4 μL免疫金（2 μL抗體8H10-B3免疫金、2 μL抗體11D8-D4免疫金）孵育5 min，用5 種試紙條單檢。對(duì)照組為0.01 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）。

表1 試紙條T線質(zhì)量濃度實(shí)驗(yàn)方案Table 1 Concentrations for test line mg/mL

1.2.7 試紙條靈敏度實(shí)驗(yàn)

將A、B、C、D、E沙門(mén)氏菌菌液用0.01 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）稀釋至104～108CFU/mL，分別取100 μL菌液與4 μL免疫金（2 μL抗體8H10-B3免疫金、2 μL抗體11D8-D4免疫金）孵育5 min，用最優(yōu)T線濃度的試紙條檢測(cè)，10～15 min 后讀取結(jié)果。對(duì)照組為0.01 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）。

1.2.8 試紙條特異性實(shí)驗(yàn)

將培養(yǎng)好的非靶標(biāo)細(xì)菌用0.01 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）稀釋至107CFU/mL，各取100 μL菌液加入試紙條中，10～15 min后讀取結(jié)果。對(duì)照組為0.01 mol/L PBS緩沖溶液（pH 7.4）。

1.2.9 試紙條穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

將密封好的試紙條放入60 ℃恒溫箱中加速保藏，每24 h取出，檢測(cè)105～106CFU/mL沙門(mén)氏菌，重復(fù)測(cè)定3 次。根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果判定試紙條穩(wěn)定性。

1.2.10 食品樣本的檢測(cè)

1.2.10.1 樣品前處理

將市售盒裝牛奶在無(wú)菌條件下分裝成每等份25 mL。將市售雞蛋（全蛋）在無(wú)菌條件下攪拌勻漿后分裝成每等份25 mL。

1.2.10.2 增菌

向225 mL BPW培養(yǎng)基中加入25 mL樣品，分別接種A、B、C、D、E 5 種沙門(mén)氏菌菌液。每份雞蛋基質(zhì)中另需加入1 mL新生霉素和2.5 mL 0.1%煌綠溶液，牛奶基質(zhì)不加入。37 ℃振蕩培養(yǎng)前增菌8 h。取1 mL菌液轉(zhuǎn)種到10 mL SBG磺胺增菌液中進(jìn)行選擇性增菌，37 ℃振蕩培養(yǎng)8～12 h。

1.2.10.3 檢測(cè)

選擇性增菌8 h后，每隔1 h各取100 μL菌液加入試紙條中，10～15 min后讀取結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 膠體金的表征分析

圖1 膠體金紫外-可見(jiàn)掃描圖Fig.1 UV-visible spectrum of colloidal gold

從圖1可以看出，膠體金在530 nm左右有強(qiáng)吸收峰。用透射電子顯微鏡觀察可以看出膠體金顆粒大小均一，約為35 nm左右（圖2）。

圖2 膠體金電鏡圖Fig.2 TEM image of colloidal gold particles

2.2 標(biāo)記pH值的優(yōu)化結(jié)果

抗體標(biāo)記量為10 μg/mL，標(biāo)記pH值為6、7、8、9、10時(shí)，用膠體金讀取儀讀取試紙條T線的信號(hào)值結(jié)果如圖3所示。當(dāng)pH值為7時(shí)，甲型副傷寒沙門(mén)氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌和鴨沙門(mén)氏菌試紙條T線信號(hào)值最高，因此選擇pH值為7作為抗體8H10-B3標(biāo)記pH值。豬霍亂沙門(mén)氏菌試紙條T線的信號(hào)值在pH值為6時(shí)最高，因此選擇pH值為6作為抗體11D8-D4標(biāo)記pH值。

圖3 標(biāo)記pH值的優(yōu)化結(jié)果Fig.3 Optimization of pH for antibody labeling

2.3 抗體標(biāo)記量的優(yōu)化結(jié)果

在最優(yōu)標(biāo)記pH值條件下，抗體標(biāo)記量的優(yōu)化結(jié)果如圖4所示。當(dāng)抗體標(biāo)記量為15 μg/mL時(shí)，甲型副傷寒沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌、鴨沙門(mén)氏菌試紙條T線信號(hào)值最高，抗體標(biāo)記量為15 μg/mL和20 μg/mL時(shí)鼠傷寒沙門(mén)氏菌試紙條T線信號(hào)值相差不大，從節(jié)約抗體用量的角度考慮，本實(shí)驗(yàn)選擇15 μg/mL作為抗體8H10-B3標(biāo)記量。當(dāng)抗體標(biāo)記量為5 μg/mL時(shí)，豬霍亂沙門(mén)氏菌試紙條T線的信號(hào)值最高，因此本實(shí)驗(yàn)選擇5 μg/mL作為抗體11D8-D4標(biāo)記量。

圖4 抗體標(biāo)記量的優(yōu)化結(jié)果Fig.4 Optimization of the amount of antibody labeled

2.4 試紙條T線抗體質(zhì)量濃度的優(yōu)化結(jié)果

表2 試紙條T線抗體質(zhì)量濃度的優(yōu)化結(jié)果Table 2 Optimization of test line concentration

表2結(jié)果顯示，試紙條T線抗體質(zhì)量濃度編號(hào)為a（抗體5G6-D7質(zhì)量濃度1.5 mg/mL，抗體9G6-A4濃度2.0 mg/mL）時(shí)，T線顯色最強(qiáng)。因此，本實(shí)驗(yàn)選擇T線抗體質(zhì)量濃度為a號(hào)的試紙條。

2.5 試紙條靈敏度分析

本實(shí)驗(yàn)制備的膠體金試紙條能聯(lián)檢5 種沙門(mén)氏菌。甲型副傷寒沙門(mén)氏菌靈敏度最高，為105CFU/mL；鼠傷寒沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌和鴨沙門(mén)氏菌靈敏度為106CFU/mL，結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 試紙條靈敏度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.5 Sensitivity of the strip

2.6 試紙條特異性分析

圖6 試紙條特異性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.6 Specificity of the strip

試紙條與19 株非沙門(mén)氏菌的反應(yīng)結(jié)果如圖6所示。試紙條與大腸桿菌CMCC 25922（3號(hào)）、大腸桿菌NCTC 12900（4號(hào)）、金黃色葡萄球菌CMCC 45401（6號(hào)）、弗氏檸檬酸桿菌ATCC 43864（18號(hào)）存在弱陽(yáng)性反應(yīng)；與其他菌以及PBS緩沖溶液呈陰性反應(yīng)。與大腸桿菌CMCC 25922（3號(hào)）、大腸桿菌NCTC 12900（4號(hào)）和弗氏檸檬酸桿菌（18號(hào)）存在交叉反應(yīng)的原因可能是因?yàn)楸緦?shí)驗(yàn)的目的菌與這3株菌有較多的相似抗原。金黃色葡萄球菌CMCC 45401（6號(hào)）細(xì)胞壁表面含有蛋白A，它和許多抗體的Fc片段具有親和能力，這可能是導(dǎo)致陽(yáng)性結(jié)果的原因。

2.7 試紙條穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析

結(jié)果顯示，從第3天開(kāi)始試紙條T線顯色變?nèi)酢８鶕?jù)經(jīng)驗(yàn)，膠體金免疫層析試紙條在60 ℃條件下穩(wěn)定1 d，相當(dāng)于室溫保質(zhì)3 個(gè)月。因此，本方法研制的試紙條在常溫干燥的條件下預(yù)計(jì)能保存6 個(gè)月。

2.8 食品樣品檢測(cè)

前處理后的食品樣本通過(guò)SS瓊脂培養(yǎng)基平板計(jì)數(shù)確定為陰性樣本；通過(guò)LB平板計(jì)數(shù)，確定加入樣品中增菌的目的菌均為10～100 CFU。取選擇性增菌8、9、10、11、12 h的沙門(mén)氏菌菌液用試紙條進(jìn)行檢測(cè)。試紙條的檢測(cè)結(jié)果如表3所示，在食品樣本（牛奶、雞蛋）中，通過(guò)前增菌8 h，選擇性增菌12 h能夠檢出該5 種沙門(mén)氏菌。這說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)研制的試紙條是可以用于食品樣本中5 種沙門(mén)氏菌的檢測(cè)。

表3 食品樣品檢測(cè)結(jié)果Table 3 Detection of target Salmonella in food samples using the strip

3 結(jié) 論

食源性致病菌的監(jiān)控與預(yù)防是全球面臨的重要問(wèn)題之一，其中沙門(mén)氏菌的安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)是我國(guó)疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)的重要任務(wù)之一。近年來(lái)，膠體金免疫層析試紙條法在沙門(mén)氏菌的檢測(cè)中應(yīng)用得越來(lái)越廣泛，與其他快速檢測(cè)方法（酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)等）相比，膠體金免疫層析試紙條法具有花費(fèi)低、操作簡(jiǎn)單、適合用于非專(zhuān)業(yè)人員對(duì)大量樣本進(jìn)行檢測(cè)的特點(diǎn)。柳健等[14]制備免疫層析試紙條檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌的最低檢測(cè)量為2×105CFU/mL。李翠萍等[15]對(duì)沙門(mén)氏菌膠體金試紙條進(jìn)行了評(píng)價(jià)，該方法的檢測(cè)靈敏度為106CFU/mL。Preechakasedkit等[16]研制一步法膠體金免疫層析試紙條檢測(cè)鼠傷寒沙門(mén)氏菌，檢測(cè)靈敏度為1.14×106CFU/mL。

多元檢測(cè)是膠體金免疫層析法發(fā)展的趨勢(shì)，它能同時(shí)高效地檢測(cè)目標(biāo)物，降低檢測(cè)成本，在對(duì)多個(gè)指標(biāo)進(jìn)行聯(lián)檢方面有很重要的應(yīng)用價(jià)值[17]。Moongkarndi等[18]首次建立了有兩條T線的免疫層析試紙條模型，可以同時(shí)檢測(cè)腸炎沙門(mén)氏菌和鼠傷寒沙門(mén)氏菌，檢測(cè)靈敏度分別為106CFU/mL和104CFU/mL。本實(shí)驗(yàn)針對(duì)5 種典型的沙門(mén)氏菌（甲型副傷寒沙門(mén)氏菌、鼠傷寒沙門(mén)氏菌、豬霍亂沙門(mén)氏菌、腸炎沙門(mén)氏菌和鴨沙門(mén)氏菌），建立能同時(shí)檢測(cè)該5 種沙門(mén)氏菌的膠體金免疫層析方法，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)研制的試紙條能達(dá)到聯(lián)檢的目的，檢測(cè)靈敏度為105～106CFU/mL，特異性較高。此外，鄢志剛等[19]通過(guò)比較膠體金免疫層析技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)3 種方法對(duì)牛奶、雞蛋等401 份樣品中沙門(mén)氏菌的檢測(cè)結(jié)果，最終確定在大量樣品的檢測(cè)過(guò)程中可采用膠體金免疫層析技術(shù)進(jìn)行篩檢。通過(guò)兩步增菌，本方法研制的試紙條可以同時(shí)檢測(cè)出食品樣本（牛奶、雞蛋）中5 種沙門(mén)氏菌，在對(duì)大量食品樣本現(xiàn)場(chǎng)篩檢方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。

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Preparation and Optimization of Colloidal Gold Strip for Simultaneously Detecting Five Typical Salmonella in Foods

XIA Shi-qi, XU Chao-lian, LIU Dao-feng, GUO Qi, WU Song-song, LAI Wei-hua*
(State Key Laboratory of Food Science and Technology, Nanchang University, Nanchang 330047, China)

Colloidal gold immunochromatographic assay was chosen to simultaneously detect five typical Salmonella (Salmonella paratyphi A, Salmonella typhimurium, Salmonella choleraesuis, Salmonella enteritidis and Salmonella anatum) in foods. In this assay, anti-Salmonella monoclonal antibody was labeled with colloidal gold while anti-Salmonella monoclonal antibody and donkey anti-mouse IgG were dispensed onto nitrocellulose membrane as the test line and the control line, respectively. The sensitivity of the developed strip to Salmonella paratyphi A was 105CFU/mL and to the other four strains was 106CFU/mL. When food samples (e.g., milk and egg) were inoculated with 10–100 CFU Salmonella and cultured for 16–20 h, positive results appeared on the test line of the strip. The developed method is rapid, effi cient, sensitive and specifi c. Therefore, it provides a valuable tool for simultaneously detecting different Salmonella species.

Salmonella; colloidal glod immunochromatographic assay; detection; food samples

TS207.3

A

1002-6630（2014）22-0154-05

10.7506/spkx1002-6630-201422029

2014-03-30

“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2011BAK10B01）；江西科技廳社會(huì)發(fā)展攻關(guān)項(xiàng)目（20111BBG70010-3）；江西省生豬產(chǎn)業(yè)質(zhì)量安全崗位專(zhuān)家項(xiàng)目（JXARS-03）

夏詩(shī)琪（1992—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：496508689@qq.com

*通信作者：賴衛(wèi)華（1968—），男，教授，博士，研究方向?yàn)槭称焚|(zhì)量與安全。E-mail：talktolaiwh@163.com