復(fù)方三黃酊薄層色譜鑒別與乙醇量測定的研究

丁長玲，趙永德，高 華，崔俊鳳

（1.青島大學(xué)，山東青島266021；2.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東濱州256603；3.濱州市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東濱州256605）

復(fù)方三黃酊薄層色譜鑒別與乙醇量測定的研究

丁長玲1，2，趙永德2，高 華1，崔俊鳳3

（1.青島大學(xué)，山東青島266021；2.濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院，山東濱州256603；3.濱州市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，山東濱州256605）

目的建立復(fù)方三黃酊的薄層色譜鑒別及乙醇量檢查方法。方法用硅膠G薄層板，分別以甲苯－異丙醇－乙酸乙酯－甲醇－水（6∶1.5∶3∶1.5∶0.3）、三氯甲烷－甲醇－水（30∶15∶4）、苯－乙酸乙酯（19∶1）為展開劑，溫度26℃、相對(duì)濕度62%的條件下，鑒別3種黃連、黃柏和冰片藥材，同時(shí)用Agilent 6890N氣相色譜儀，測乙醇含量。結(jié)果供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜或?qū)φ账幉纳V相應(yīng)的位置上，顯相同顏色斑點(diǎn)，測得乙醇量為48.0%～50.0%。結(jié)論本法簡單易行，可用于復(fù)方三黃酊的薄層鑒別和乙醇量測定。

復(fù)方三黃酊；薄層色譜法；乙醇量

急性創(chuàng)傷感染、慢性皮膚潰瘍、褥瘡、燒燙傷是外科常見的疾病，傳統(tǒng)的治療方法是采取清潔換藥，即使用抗菌消毒劑（碘制劑、乙醇、醋酸氯己定等）處理創(chuàng)面，然后無菌包扎。治療慢性皮膚潰瘍即在上述治療的基礎(chǔ)上配合紅外線照射。由于抗菌消毒藥沒有直接抗炎消腫作用，對(duì)改善創(chuàng)面紅腫、滲出等效果較差。復(fù)方三黃酊是一種將黃連、黃柏、黃芩粗粉，采用48%～50%乙醇溶液用滲漉法進(jìn)行處理，濾液中加入冰片后制得的用于治療褥瘡和外科創(chuàng)傷感染的酊劑。黃芩具有清熱解毒的作用，黃連有較強(qiáng)的清熱瀉火解毒的功效，黃柏有獨(dú)特的清熱燥濕解毒療創(chuàng)的效果［1］，三藥合用，消炎祛腐效果較好［2］。冰片具有去腐生肌、涼血止痛功效，既能刺激肉芽組織生長，又能減輕病人痛苦［3］。采用復(fù)方三黃酊局部濕敷治療，使藥物直接持續(xù)地作用于患部，藥物以透皮給藥的方式迅速滲透，可快速發(fā)揮其抗菌消炎、止痛消腫、祛腐生肌功效，并及時(shí)緩解了分泌物對(duì)組織的損害，使患部組織有了體液連續(xù)性更新的條件。且隨著輔料的更換，將細(xì)菌及壞死組織清除，避免了細(xì)菌內(nèi)、外毒素和代謝產(chǎn)物對(duì)組織的滯留性破壞，為創(chuàng)面創(chuàng)造了一個(gè)清潔、無菌的良性環(huán)境。具有清熱、解毒、抗菌消炎，消腫、祛腐生肌、清涼止痛作用，以加速創(chuàng)面的愈合，具有很好的臨床療效。

近年來，隨著醫(yī)藥衛(wèi)生體制改革、制藥工藝快速發(fā)展、醫(yī)院制劑配制準(zhǔn)入標(biāo)準(zhǔn)提高，使得醫(yī)院制劑的發(fā)展面臨嚴(yán)峻挑戰(zhàn)［4～6］。鑒于該藥物制備周期長，難以控制提取溶媒乙醇的含量，原標(biāo)準(zhǔn)中只有黃芩的薄層鑒別方法，無黃連、黃柏和冰片中有效成分的薄層鑒別和乙醇量測定等指標(biāo)。本文主要對(duì)黃連、黃柏、冰片進(jìn)行鑒別，用氣相色譜法對(duì)乙醇量進(jìn)行測定，能切實(shí)保證制劑的質(zhì)量，從而確?；颊哂盟幇踩?、有效。

1 材料

1.1 儀器 高速中藥粉碎機(jī)（武義縣屹立工具有限公司），滲濾桶、硅膠G薄層板（TLC Silica gel 60，50 Glass plates10×20 cm，德國默克公司提供）；Agilent6890N氣相色譜儀，Agilent 7693A自動(dòng)液體進(jìn)樣器；火焰離子化檢測器，色譜柱：HP－INNOWax Polyethlene Glycol（產(chǎn)品號(hào)：19091N－133內(nèi)徑：250.00μm，長度：30.0 m，液膜厚度：0.25μm）。

1.2 試藥 乙醇和正丙醇為色譜純（國藥集團(tuán)，批號(hào)分別為20130506和20130912）。實(shí)驗(yàn)中所用中藥材（黃連、黃芩、黃柏、冰片）均購于山東同濟(jì)堂醫(yī)藥有限公司，均經(jīng)山東中醫(yī)藥大學(xué)鑒定教研室周鳳琴教授鑒定和山東省濱州市藥品檢驗(yàn)檢測中心檢驗(yàn)，符合《中國藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn)；黃連對(duì)照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：120913－200407），鹽酸小檗堿對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110713－200208）、黃柏對(duì)照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：121510－200702）、冰片對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110743－200905）；所用試劑均為分析純。

2 復(fù)方三黃酊的制備

2.1 處方 黃連100 g，黃柏100 g，黃芩100 g，冰片5 g，50%乙醇至1 000 mL。

2.2 制備方法 以上四味（除冰片外），粉碎成粗粉，混勻，照《中國藥典》2010年版（一部）附錄ⅠO流浸膏劑與浸膏劑項(xiàng)下的滲漉法［7］，用約300 mL 50%乙醇作溶劑，攪拌均勻，濕潤，使其充分膨脹。裝入滲漉筒內(nèi)，緩緩加入50%的乙醇溶液350～400 mL，待排出藥粉粉粒之間的空氣，并有提取溶劑流出約20 mL左右時(shí)，關(guān)閉放料閥，蓋上漉筒、浸漬48 h，用滲漉法緩慢滲漉，收集初漉液和續(xù)漉液，靜置，濾過，加入冰片，調(diào)整至規(guī)定量，攪拌均勻，分裝，即得。

3 復(fù)方三黃酊的定性鑒別

3.1 黃連的鑒別 取本品10 mL，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。取黃連對(duì)照藥材0.1 g，加甲醇10 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液濃縮至約2 mL，作為對(duì)照藥材溶液。取鹽酸小檗堿對(duì)照品5.0 mg，加甲醇10 mL使其溶解，制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μL，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板（105℃加熱活化30 min）上，以甲苯－異丙醇－乙酸乙酯－甲醇－水（6∶1.5∶3∶1.5∶0.3）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸中展開，溫度：26℃、相對(duì)濕度：62%上行展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜和對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點(diǎn)。缺黃連的陰性對(duì)照同樣品處理方法，無干擾，見圖1。

圖1 黃連的鑒別圖譜1、2、3為供試品；4.為鹽酸小檗堿；5.為黃連對(duì)照藥材；6.為陰性對(duì)照

3.2 黃柏的鑒別 取本品10 mL，濾過，濾液揮干，殘?jiān)?%醋酸甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。取黃柏對(duì)照藥材0.2 g，加1%醋酸甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液濃縮至約2 mL，作為對(duì)照藥材溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μL，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板（105℃加熱活化30 min）上，以三氯甲烷－甲醇－水（30∶15∶4）下層溶液為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸中（溫度：26℃相對(duì)濕度：62%）上行展開，取出，晾干，置紫外燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的黃色熒光斑點(diǎn)。缺黃柏的陰性對(duì)照同樣品處理方法，無干擾，見圖2。

圖2 黃柏的鑒別圖譜1、2.為供試品；3.為黃柏對(duì)照藥材；4.陰性對(duì)照

3.3 冰片的鑒別 取本品10 mL，濾過，濾液揮干，殘?jiān)右宜嵋阴?mL使溶解，作為供試品溶液。取冰片對(duì)照品5 mg，加乙酸乙酯10 mL制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各2μL，分別點(diǎn)樣于同一硅膠G薄層板（105℃加熱活化30 min）上，以苯－乙酸乙酯（19∶1）為展開劑，展開，取出，晾干。噴以1%香草醛硫酸溶液，105℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。日光下檢測，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的暗紅色斑點(diǎn)。缺冰片的陰性對(duì)照同樣品處理方法，無干擾，見圖3。

圖3 冰片的鑒別圖譜

4 乙醇量檢查

4.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 火焰離子化檢測器，色譜柱：HP－INNOWax Polyethlene Glycol，起始溫度為80℃，維持5 min，再以每分鐘10℃的速率升溫至110℃；進(jìn)樣口溫度：190℃；檢測器溫度：220℃，理論板數(shù)按正丙醇峰計(jì)算應(yīng)不低于8 000，乙醇峰與正丙醇峰的分離度應(yīng)大于2.0，分流比：20∶1。按此色譜條件進(jìn)行試驗(yàn)，色譜峰分離條件好，見圖4。

圖4 供試品溶液 1.乙醇；2.正丙醇

4.2 校正因子的測定［7］精密量取恒溫至20℃的無水乙醇4、5、6 mL，分別置100 mL量瓶中，分別精密加入恒溫至20℃的正丙醇（內(nèi)標(biāo)物質(zhì)）5 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取上述3種溶液1μL，注入氣相色譜儀，分別連續(xù)進(jìn)樣3次，測定峰面積。計(jì)算校正因子，見表1。

表1 對(duì)照品溶液的峰面積及校正因子

4.3 供試品溶液的制備 精密量取恒溫至20℃的供試品10 mL，置100 mL量瓶中，精密加入恒溫至20℃的正丙醇5 mL，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，取1μL注入氣相色譜儀，按乙醇量測定方法測定，即得。

取6批樣品乙醇量測定結(jié)果分別為：49.0%、48.2%、48.6%、49.2%、48.8%、49.6%，平均含量為48.9%。根據(jù)配方及工藝流程，6批樣品乙醇含量測定在48.2%～49.6%范圍內(nèi)，因此制定乙醇量標(biāo)準(zhǔn)為48.0%～50.0%。

5 討論

5.1 在制備復(fù)方三黃酊時(shí)，要把握重點(diǎn)環(huán)節(jié)，注意裝滲漉桶前，一定先將藥材用溶劑充分膨脹、滲漉桶中的藥材松緊度要適當(dāng)、滲漉速度不能過快。一般每公斤藥材流速1～3 mL·min－1、收集濾液至量時(shí)，一定要將藥液充分靜置。

5.2 冰片不要提前溶解到乙醇中進(jìn)行滲漉，要在接好滲漉液后再加入，否則濾液中產(chǎn)生的沉淀較多。

5.3 對(duì)于中藥復(fù)方制劑的鑒別，應(yīng)根據(jù)其特點(diǎn)，尋找簡便、快速并具有較強(qiáng)專屬性的方法，才能起到有效控制質(zhì)量的目的。采用薄層色譜鑒別的方法對(duì)復(fù)方三黃酊中的黃連、黃柏、冰片進(jìn)行鑒別，其方法簡便易行，層析分離清晰，斑點(diǎn)集中，陰性對(duì)照無干擾，重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，可完善復(fù)方三黃酊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，從而更好的控制該藥品的質(zhì)量，保證臨床療效。

5.4 在展開劑的選擇上，經(jīng)過多次篩選，最后選用分別以甲苯－異丙醇－乙酸乙酯－甲醇－水、三氯甲烷－甲醇－水、苯－乙酸乙酯為黃連、黃柏、冰片的展開系統(tǒng)，分離效果較理想，斑點(diǎn)清晰無干擾，故可作為復(fù)方三黃酊中黃連、黃柏、冰片的薄層色譜鑒別方法。

5.5 本文建立用氣相色譜法測定乙醇含量，控制范圍為48.0%～50.0%，能有效去除無效成分［8］，方法簡便、靈敏，能更有效地控制藥品質(zhì)量。

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Study on identification of Compound Sanhuang Tincture by TLC and determ ination of ethanol

DING Chang-ling1，2，ZHAO Yong-de2，GAO Hua1，CUIJun-feng3
（1.Qingdao University，Qingdao 266021，China；2.Affiliated Hospital of Binzhou Medical College，Binzhou 256603，China；3.Binzhou Center for Food and Drug Control，Binzhou 256605，China）

ObjectiveTo establish an advanced TLC identification method of Compound Sanhuang Tincture，and a method for the determination of ethanol.M ethodsThe Rhizoma coptidis，Cortex phellodendri and Synthetic borneol were identified withmobile phase ofmicroemulsion form incacid by silica gel G thin layer plate.The consis ofmicroem ulsion was toluene：toluene－isopropanol－ethyl acetate－methanol－H2O＝6∶1.5：3∶1.5∶0.3，chloroform－methanol－H2O（30∶15∶4），benzene－ethyl acetate（19∶1）.The temperature was 26℃，and the relative humidity 62%.The determination of ethanol was carried outwith Agilent6890N gas liquid chromatography.ResultsThe spots in the chromatogram of the test solution corresponding to the position of each reference substance had the same color.The content of alcoholwas48.0%～50.0%.ConclusionThemethod was simple and can he used for the thin layer identification of Compound Sanhuang Tincture and the determination of ethanol.

Compound Sanhuang Tincture；TLC；Ethanol content

R927.11

A

2095－5375（2014）10－0585－004

濱州醫(yī)學(xué)院科技計(jì)劃項(xiàng)目（No.BY2010KJ20）

丁長玲，女，副主任藥師，研究方向：醫(yī)院新制劑的研發(fā)和臨床藥學(xué)，E－mail：dingling256603＠163.com

高華，男，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：天然活性物質(zhì)的提取、結(jié)構(gòu)改造和應(yīng)用，Tel：18661801816，E－mail：gaohuaqy＠126.com