HPLC法同時測定沒食子提取物中沒食子酸、沒食子酸甲酯和沒食子酸乙酯的含量

沈 華，王 正，李 蕾，酈紅巖

（江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司，江蘇鎮(zhèn)江212009）

HPLC法同時測定沒食子提取物中沒食子酸、沒食子酸甲酯和沒食子酸乙酯的含量

沈 華，王 正，李 蕾，酈紅巖

（江蘇吉貝爾藥業(yè)有限公司，江蘇鎮(zhèn)江212009）

目的建立高效液相色譜法測定沒食子提取物中三種成分的含量方法。方法色譜柱：Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇－水（25∶75）（冰乙酸調(diào)pH至4.5）；流速為1.0 mL·min－1，柱溫：30℃，檢測波長：273 nm。結(jié)果沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯的回收率分別為99.79%、99.60%、99.45%；線性范圍分別為0.2～3.2μg、0.002～0.16μg、0.010 8～0.54μg。結(jié)論結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于該產(chǎn)品的質(zhì)量控制。

沒食子提取物；沒食子酸；沒食子酸甲酯；沒食子酸乙酯；含量測定；高效液相色譜法

沒食子為殼斗科植物沒食子樹Quercus infectoria Olivier幼蟲上由沒食子蜂Cynipegallae－Tinctoriae Olivier寄生而形成的蟲癭，于成蟲未逸出時采集。具有固氣、澀精、斂肺、止血之功效。用于大腸虛滑，瀉痢不止，便血，遺精，陰汗，咳嗽，咯血，齒痛，創(chuàng)傷出血，瘡瘍久不收口［1］。現(xiàn)代研究表明沒食子蟲癭含土耳其沒食子鞣質(zhì)、沒食子酸及并沒食子酸、樹脂等［2］，臨床研究表明沒食子具有抗菌、抗病毒，抗腫瘤等作用。本文參考相關(guān)文獻［3～5］，采用高效液相色譜法對沒食子提取物中的沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯進行測定，能夠有效控制產(chǎn)品質(zhì)量。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 高效液相色譜儀，LC－20AT泵，SPD－20A紫外檢測器（日本島津公司）；RE－2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）；Sartorius ALC－110.4電子天平（德國賽多利斯公司）；KQ－500DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；L－550離心機（湖南湘儀實驗室儀器開發(fā)有限公司）；PHS－3C pH計（上海理達儀器廠）；HH－S恒溫水浴鍋（江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠）。

1.2 試藥 沒食子酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：110831－201204，供含量測定用）；沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯標(biāo)準(zhǔn)品（購自上海時代生物科技有限公司）；甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。沒食子提取物購自西安某生物科技公司（批號為120402、120501、120503）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流動相：甲醇－水（25∶75）（冰乙酸調(diào)pH至4.5）；流速：1.0 mL·min－1；進樣量：20μL；檢測波長：273 nm；柱溫：30℃。理論板數(shù)按沒食子酸峰計算應(yīng)不低于3 000，色譜圖見圖1。

2.2 對照品溶液與供試品溶液的制備 精密稱取沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯對照品適量，加流動相制成每1 mL含沒食子酸46μg、沒食子酸甲酯70μg、沒食子酸乙酯48μg的混合溶液，搖勻，作為對照品溶液。

取沒食子提取物約0.5 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加石油醚（60～90℃）30 mL，加熱回流30 min，棄去石油醚液，藥渣揮干，加甲醇30 mL，加熱回流30 min，濾過，濾渣再用甲醇30 mL，同法提取2次，合并濾液，減壓回收溶劑，殘渣用流動相溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加流動相至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1 mL，置100 mL量瓶中，加流動相定容至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

2.3 線性關(guān)系的考察 精密稱取沒食子酸對照品0.025 0 g，于50 mL量瓶中，加流動相制成每1 mL含500μg的對照品溶液，分別精密吸取該對照品溶液1、3、5、9、16 mL，于50 mL量瓶中，加流動相定容至刻度，作為沒食子酸對照品溶液。

精密稱取沒食子酸甲酯0.002 5 g，于100 mL量瓶中，加流動相制成每1 mL含25μg的對照品溶液，分別精密吸取0.2、4、6、10、16 mL，于50 mL量瓶中，加流動相定容至刻度，作為沒食子酸甲酯對照品溶液。

精密稱取沒食子酸乙酯0.005 4 g，于100 mL量瓶中，加流動相制成每1 mL含54μg的對照品溶液，分別精密吸取0.5、2、5、10、25 mL，于50 mL量瓶中，加流動相定容至刻度，作為沒食子酸乙酯對照品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密吸取不同濃度的對照品溶液注入液相色譜儀，以進樣量（μg）為橫坐標(biāo)（X），以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)（Y），進行線性回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算得回歸方程，見表1。結(jié)果表明沒食子酸在0.2～3.2μg、沒食子酸甲酯在0.002～0.16μg、沒食子酸乙酯在0.010 8～0.54μg范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

表1 對照品的標(biāo)準(zhǔn)曲線

圖1 HPLC色譜圖

2.4 精密度試驗 精密吸取同一濃度對照品溶液，依法測定，連續(xù)進樣6次，測定峰面積，其精密度良好，沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯的RSD分別為1.98%、1.73%、1.65%。

2.5 穩(wěn)定性試驗 取同一樣品供試液，分別在0、2、4、8、12、24 h測定峰面積，其RSD分別為2.21%、2.03%、1.96%，表明樣品在24 h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.6 重復(fù)性試驗 取同一批樣品分別精密稱取6份，依法處理，測定，結(jié)果樣品中沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯的平均含量分別為81.3、5.2、72.1 mg·g－1，RSD分別為2.11%、1.89%、1.78%。2.7 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品（批號：120402）6份約0.5 g，分別加入沒食子酸、沒食子酸甲酯、沒食子酸乙酯對照品溶液，按“供試品溶液制備”項下的方法依法處理，得供試品溶液。依法測定，結(jié)果見表2。

2.8 樣品測定 分別精密稱取不同批次的沒食子提取物樣品，按供試品溶液制備方法制備，如法測定，結(jié)果見表3。

Simultaneous determ ination of gallic acid，methyl gallate and ethyl gallate from gallnut extracts by HPLC

SHEN Hua，WANG Zheng，LILei，LIHong-yan
（Jiangsu Jibrier Pharmaceutical Co.，Ltd.，Zhenjiang 212009，China）

ObjectiveTo establish amethod for the simultaneous determination of gallic acid，methyl gallate and ethyl gallate from gallnut extracts.M ethodsHPLCwas used to quantitative analysis.The Waters Symmetry C18（4.6 mm×250 mm，5μm）was used，and mobile phase was composed ofmethanol－water（25∶75）（adjust pH to 4.5 with acetic acid）.The detection wavelength was273 nm at30℃.The flow ratewas1.0mL·min－1.ResultsThe gallic acid，methyl gallate and ethyl gallate′s spotting recovery were 99.79%，99.60%，99.45%，and the linear ranges were 0.2～3.2μg，0.002～0.16μg，0.010 8～0.54μg，respectively.ConclusionThe results were accurate and the reproducibility was good.The method can be used for the quality control of the product.

Gallnut extracts；Gallic acid；Methyl gallate；Ethyl gallate；Determination；HPLC

R927.2

A

2095－5375（2014）11－0631－003

沈華，女，研究方向：藥品生產(chǎn)、生產(chǎn)工藝以及產(chǎn)品質(zhì)量控制，E－mail：shua5330＠163.com

酈紅巖，男，研究方向：新藥制劑及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，Tel：0511－88888404，E－mail：lhy707＠126.com