HPLC法測定荷葉與蓮房中荷葉堿的含量

楊 鵬

（福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122）

HPLC法測定荷葉與蓮房中荷葉堿的含量

楊 鵬

（福建中醫藥大學藥學院，福建福州350122）

目的建立高效液相色譜法測定荷葉與蓮房中荷葉堿含量的方法。方法采用Agilent Eclipse XDBC18（4.6 mm×250 mm，5μm），以乙腈－水－三乙胺－冰醋酸（27∶70.6∶1.6∶0.8）為流動相；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25℃；檢測波長：270 nm。結果荷葉堿在3.01～48.16μg·mL－1范圍內線性良好（r＝0.999 0），平均回收率為96.97%，RSD＝0.99%（n＝6）。結論該方法準確、簡便、靈敏度高、重現性好，可用于荷葉與蓮房中荷葉堿含量的測定。

荷葉；蓮房；荷葉堿；高效液相色譜法；含量測定

荷葉是睡蓮科植物蓮（Nelumbo nucifera Gaertn.）的葉片，在中國大部分地區均有分布。傳統醫學認為，荷葉具有清暑利濕、升發清陽、清心去熱、止血利水的作用［1］。1991年11月中華人民共和國衛生部衛監發（1991）第45號文件中，荷葉被列入第二批“既是食品又是藥品”的名單［2］。據文獻記載，荷葉中主要生理活性物質為生物堿和黃酮類物質［3］，其生物堿具有抑制高膽固醇血癥和動脈粥樣硬化作用，其中荷葉堿被證實為荷葉中具有降脂減肥作用的活性成分［4］，因此越來越受到重視。為了控制荷葉的質量，往往把荷葉堿作為荷葉的指標性成分，對其進行含量測定。查找文獻［5］可知，主要采用高效液相色譜法測定含量，本文也建立了高效液相色譜法測定荷葉和蓮房中荷葉堿含量的方法。實驗結果表明，該法準確度高，重現性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1100液相色譜儀：Agilent E-clipse XDB－C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色譜柱；分析天平（Sartorius AGCP225D）；KQ－500B超聲清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）；紫外分析儀（UV－1750）。

1.2 試藥 荷葉堿對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號：111566－200703）；荷葉和蓮房藥材由康美藥業股份有限公司提供。乙腈、三乙胺、冰乙酸、甲醇為色譜純，水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 色譜柱：Agilent Eclipse XDB－C18（4.6mm×250mm，5μm）；流動相：乙腈－水－三乙胺－冰乙酸（27∶70.6∶1.6∶0.8）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：25℃；檢測波長：270 nm；進樣量：20μL。在此條件下，荷葉堿的保留時間為12.5 min左右，樣品中荷葉堿與相鄰組分達到基線分離，分離度大于1.5，對照品與樣品色譜圖見圖1。

圖1 HPLC色譜圖

2.2 對照品溶液的制備 取荷葉堿對照品適量，精密稱定，加適量甲醇溶解，并制成1mL含有0.120 4 mg的對照品儲備液，精密吸取儲備液5 mL至20 mL容量瓶，加甲醇稀釋至刻度，即得對照品溶液（荷葉堿濃度為30.1μg·mL－1）。

2.3 供試品溶液的制備 精密稱定粉碎的荷葉粗粉0.5 g，置100 mL具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，加熱回流2.5 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液5 mL，置10 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45μm）濾過，濾液為供試品溶液Ⅰ。另取粉碎的蓮蓬0.5 g，回流提取，方法和操作同上所述，得供試品溶液Ⅱ。

2.4 線性關系考察 精密吸取荷葉堿對照品儲備液（0.120 4 mg·mL－1）0.25、0.5、1、2、3、4 mL，分別置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，按上述色譜條件，分別精密吸取20μL，注入液相色譜儀，測定峰面積，以對照品的濃度（μg·mL－1）為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，計算回歸方程：Y＝61 793X－7.764 6，r＝0.999 0表明荷葉堿在3.01～48.16μg·mL－1范圍內具有良好的線性關系。

2.5 精密度試驗 精密吸取對照品溶液（0.022 08 mg·mL－1）20μL，按上述色譜條件，重復進樣5次，測得荷葉堿峰面積平均值為1 276.04，計算RSD為0.11%。

2.6 重復性試驗 精密稱取荷葉供試品5份，按上述方法進行測定，考察方法的重復性，RSD為1.28%，表明該法重復性好。

2.7 穩定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、4、8、12、24 h，按上述色譜條件測定，荷葉堿峰面積的平均值為1 200.06，RSD為0.31%，表明在24 h內基本穩定。

2.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量（0.415 4%）的同批荷葉6份，每份約0.5 g。分別加入100%量的荷葉堿對照品后，按“2.3”項下方法制備供試品溶液，按上述的色譜條件測定，記錄峰面積，計算荷葉堿的平均回收率和RSD分別為96.97%、0.99%，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）

2.9 樣品含量測定 按照“2.3”項下方法制備供試品溶液，精密吸取對照溶液及供試品溶液各20 μL，注入液相色譜儀，測得 3批荷葉（批號：121111861、1304097611、31103871）中荷葉堿的含量分別為0.401 2%、0.421 1%、0.415 4%；3批蓮房（批號130409621、130709721、131111831）中荷葉堿的含量分別為0.037 48%、0.038 91%、0.038 65%。

3 討論

3.1 樣品提取方法與提取時間的選擇 根據荷葉堿易溶于有機溶劑的性質，本實驗分別用甲醇、乙醇、乙腈作為提取溶劑，回流2.5 h，結果表明，甲醇提取效果較好。

3.2 流動相的選擇 在實驗過程中，用乙腈－水－三乙胺－冰醋酸（27∶70.6∶1.6∶0.8）做流動相，保留時間短，分離效果好，達到了對樣品檢測的要求。

3.3 波長的選擇 經紫外分析儀測定，荷葉堿在270 nm處有最大吸收，因此本實驗選擇270 nm波長為檢測波長，從而保證了檢測靈敏度。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國醫藥科技出版社，2010.

［2］范繼善.實用食品添加劑［M］.天津：天津科學技術出版社，1993：10.

［3］程青正，彭紅，胡慶梅.正交試驗法優化荷花提取工藝［J］.藥學研究，2013，32（11）：632－633.

［4］涂長春，李曉字，楊軍平，等.荷葉生物總堿對肥胖高脂血癥大鼠減肥作用的實驗研究［J］.江西中醫學院學報，2001，13（3）：120－121.

［5］柴金玲，李偉，谷學新.高效液相色譜法測定荷葉中荷葉堿的含量［J］.藥物分析雜志，2005，25（8）：932－934.

Determ ination of nuciferine in lotus leaf and seed pod by HPLC

YANG Peng
（School of Pharmacy，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China）

ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of nuciferine in lotus leaf and seed pod.M ethodsAn Agilent Eclipse XDB－C18（4.6 mm×250 mm，5μm）was used with acetonitrile－water－triethylamglacial acetic acid（27：70.6：1.6：0.8）mixture as amobile phase，the flow ratewas1.0mL·min－1and the column temperature was25℃，the detection wavelength was270 nm.ResultsThe linear range of nuciferine was3.01～48.16μg·mL－1，r＝0.999 0，the average recovery was 96.97%，RSD＝0.99%（n＝6）.ConclusionThemethod was simple，accurate and better repeatable.It can be used for determining the quantitative of nuciferine.

Lotus leaf；Seed pod；Nuciferine；HPLC；Determination

R927.2

A

2095－5375（2014）04－0208－002

楊鵬，男，研究方向：藥物分析，E－mail：840569168＠qq.com