峻下逐水中藥抗白血病作用研究進(jìn)展

張 超

(山東中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，山東 濟(jì)南 250355)

峻下逐水藥大多苦寒有毒，藥力峻猛，服藥后能引起劇烈腹瀉，有的兼能利尿，能使體內(nèi)潴留的水飲通過(guò)二便排出體外，消除腫脹。適用于全身水腫，大腹脹滿，以及停飲等正氣未衰之證。該類藥物副作用大，易傷正氣，臨床應(yīng)用當(dāng)“中病即止”，不可久服，使用時(shí)常配伍補(bǔ)益藥以保護(hù)正氣，體虛者慎用，孕婦忌用。在當(dāng)前中醫(yī)臨床中，該類藥物的臨床實(shí)用價(jià)值已明顯降低，許多功能可用西藥和其他處理措施代替。但是近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外研究人員又分離出一些新的化學(xué)成分，并發(fā)現(xiàn)了一些令人鼓舞的抗癌活性，其中不乏抗白血病作用的報(bào)道。本文對(duì)國(guó)內(nèi)外有關(guān)該類藥物抗白血病作用的文獻(xiàn)進(jìn)行了系統(tǒng)的綜述，為更好的開(kāi)發(fā)利用峻下逐水藥提供科學(xué)依據(jù)。

1 狼毒

狼毒為大戟科植物月腺大戟Euphorbia ebracteolata Hayata或狼毒大戟Euphorbia fischeriana Steud.的干燥根。

1.1 狼毒大戟 L615白血病小鼠T細(xì)胞轉(zhuǎn)化率顯著降低，免疫功能低下，灌胃給予狼毒大戟水浸液后白細(xì)胞的無(wú)序增殖得到抑制，緩解了癥狀，延長(zhǎng)了存活期，且與劑量有關(guān)，推測(cè)狼毒大戟通過(guò)恢復(fù)T細(xì)胞的免疫功能，增強(qiáng)其正常免疫應(yīng)答能力產(chǎn)生抗白血病作用［1，2］。深入研究發(fā)現(xiàn)狼毒大戟水提物可顯著改善患有L615白血病的小鼠肝中谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活力下降的狀況［3］。還可誘導(dǎo)L615白血病小鼠T淋巴細(xì)胞的凋亡［4］，這種作用與抑制腫瘤細(xì)胞c-myc和ras基因表達(dá)有關(guān)［5］。此外，對(duì)L615白血病小鼠進(jìn)行的狼毒大戟毒性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)狼毒大戟低劑量下無(wú)顯著性生殖毒性，可以部分阻止或減緩L615白血病細(xì)胞對(duì)中樞神經(jīng)的浸潤(rùn)作用［6］。

從狼毒大戟中分離得到的二萜化合物17-羥-巖大戟內(nèi)酯B和巖大戟內(nèi)酯B均能顯著抑制K562細(xì)胞的增殖，其中，17-羥-巖大戟內(nèi)酯B對(duì)癌細(xì)胞的增殖抑制濃度與阿霉素相當(dāng)［7］。巖大戟內(nèi)酯 B 的 IC50為12.1 μg·mL-1。有人通過(guò)測(cè)定Caspase-3和Caspase-8的活化程度證實(shí)了17-羥-巖大戟內(nèi)酯B對(duì)人白血病K562細(xì)胞具有很強(qiáng)的誘導(dǎo)凋亡作用，并呈濃度依賴關(guān)系及時(shí)間依賴關(guān)系［8］。而巖大戟內(nèi)酯B對(duì)K562細(xì)胞的誘導(dǎo)凋亡是通過(guò)阻斷G1期細(xì)胞實(shí)現(xiàn)的［9］。

1.2 月腺大戟 月腺大戟水提物灌胃給予腹腔接種P388白血病細(xì)胞的小鼠，觀察細(xì)胞凋亡特征，計(jì)算凋亡率，檢測(cè)bcl-2和bax表達(dá)，結(jié)果高劑量(10g·L-1)組比低劑量(2.5 g·L-1)組誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡明顯，凋亡細(xì)胞胞漿中出現(xiàn)凋亡小體，核質(zhì)松散呈網(wǎng)狀等。月腺大戟高劑量組與陽(yáng)性藥物對(duì)照組細(xì)胞bax表達(dá)旺盛，bcl-2表達(dá)受到明顯抑制，提示高劑量月腺大戟對(duì)白血病淋巴細(xì)胞凋亡有誘導(dǎo)作用［10］。從月腺大戟根的乙醇提取物的氯仿萃取部位亦分離得到巖大戟內(nèi)酯B，研究證實(shí)其對(duì)白血病Jurkat細(xì)胞株表現(xiàn)出一定細(xì)胞毒活性，IC50為 0.0647μmol·L-1，同時(shí)分得的化合物 ent-11β -hydroxyabiera-8(14)，13(15)-dien-16，12β -olide亦表現(xiàn)出顯著地抑制活性，IC50為 0.0179μmol·L-1，以上 2種成分均為松香烷內(nèi)酯型的二萜類化合物，推測(cè)月腺大戟中的二萜類成分與其抗白血病的活性相關(guān)［11］。

2 商陸

商陸為商陸科植物商陸Phytolacca acinosa Roxb.或垂序商陸Phytolacca americana L.的干燥根。

中國(guó)商陸皂苷能誘生γ-干擾素(IFN-γ)、白細(xì)胞介素2(IL-2)和淋巴毒素(LT)，推測(cè)其為一種T淋巴細(xì)胞分裂原，其誘生的混合淋巴因子對(duì)人的Molt-4細(xì)胞(T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞株)和Jurkat細(xì)胞均有不同程度的細(xì)胞毒性作用，而對(duì)正常細(xì)胞-羊膜細(xì)胞(WISH細(xì)胞株)無(wú)毒性作用，可見(jiàn)其誘生因子具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值［12］。美洲商陸別名垂序商陸，在體外亦能誘導(dǎo)正常外傷脾和病人脾細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ。垂序商陸根所含有絲分裂原(PWM)可抑制骨髓瘤細(xì)胞DNA的合成，但不抑制淋巴瘤細(xì)胞的合成。垂序商陸抗病毒蛋白(PAP)與有高度特異性的單克隆抗體(抗人T細(xì)胞單克隆抗體Wu71)連接而制備的免疫毒素，除了能預(yù)防白血病細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)外，還能有效殺傷靶細(xì)胞［13］。從商陸根水提液中分離的一種酸性咋多糖商陸多糖Ⅰ(PAP-Ⅰ)以80～160mg·kg-1劑量相隔4 d腹腔注射給小鼠2次，結(jié)果使腹腔巨噬細(xì)胞(Mф)對(duì)L929和S180腫瘤細(xì)胞的免疫細(xì)胞毒作用增強(qiáng)，使脂多糖輔助誘生TNF和IL-1的能力增加，提示PAP-Ⅰ增強(qiáng)Mф細(xì)胞毒作用與TNF和IL-1的誘生相關(guān)［14］。亦有類似報(bào)道證實(shí)了PAP-Ⅰ連續(xù)腹腔注射7 d使脂多糖輔助誘生TNF，在5～20mg·kg-1呈劑量依賴關(guān)系［15］;PAP-Ⅰ10～20mg·kg-1腹腔注射能顯著促進(jìn)脾臟增生，提高T淋巴細(xì)胞和IL-2的產(chǎn)生能力，可顯著抑制S180的生長(zhǎng)［16］。商陸皂苷H(EH)除了有較高的誘生干擾素效價(jià)外，還可誘導(dǎo)Mф釋放TNF，而且其誘生釋放TNF的動(dòng)力學(xué)模型不同于脂多糖，釋放達(dá)峰時(shí)間可持續(xù)至24 h［17］。劉接卿［18］進(jìn)一步對(duì)商陸總皂苷采用層析分離等手段得到5個(gè)單體化合物，利用MTT法和XTT法初步篩選出對(duì)HL60細(xì)胞的增殖有較強(qiáng)的抑制作用的化合物3-O-β-D-吡喃木糖 -2- 羥基商陸酸 -30- 甲酯，IC50為 25.9 μg·mL-1，構(gòu)效關(guān)系研究表明商陸皂苷中的糖鏈對(duì)細(xì)胞毒作用的影響。

3 千金子

千金子為大戟科植物續(xù)隨子Euphorbia lathyris L.的干燥成熟種子。

黃曉桃等［19］用MTT法體外檢測(cè)證實(shí)了千金子甲醇提取物對(duì)人宮頸癌細(xì)胞(Hela)、人肝癌細(xì)胞(HepG2)、人紅白血病細(xì)胞(K562)、人單核細(xì)胞性白血病細(xì)胞(U937)、人急性淋巴細(xì)胞性白血病細(xì)胞(HL60)的抑制作用，其IC50值分別為15.5、29.6、13.1、10.5、17.5 μg·mL-1，抑制作用與給藥劑量呈正相關(guān)，對(duì)白血病細(xì)胞的抑制作用強(qiáng)于其他腫瘤細(xì)胞;用小鼠移植性腫瘤考察了千金子甲醇提取物在體抗瘤活性，結(jié)果表明其不同劑量(100、150、200mg·kg-1)對(duì)S180的抑瘤強(qiáng)度與5-氟尿嘧啶(25mg·kg-1)相近或稍強(qiáng)。這些作用可能與千金子水提取物在體外對(duì)MMP-16的抑制作用有關(guān)［20］。MMP-16是一種膜型基質(zhì)金屬蛋白酶，在腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移中起關(guān)鍵性作用，千金子水溶液對(duì)MMP-16的抑制效果與其濃度呈正相關(guān)，IC50=0.47 μg·mL-1，也可能與大劑量時(shí)的細(xì)胞毒作用有關(guān)。楊珺等［21］觀察了千金子提取液對(duì)細(xì)胞的毒性作用，結(jié)果提取液在低濃度時(shí)(15.625、7.813mg·L-1)對(duì)細(xì)胞無(wú)毒性作用，在高濃度(125、62.5、31.25mg·L-1)時(shí)細(xì)胞毒性明顯，且濃度越高，細(xì)胞毒性增加越顯著。Appendino G等［22］發(fā)現(xiàn)千金子素L10給予對(duì)柔紅霉素耐藥的白血病腫瘤細(xì)胞K562/R7(P-gP過(guò)度表達(dá))后，細(xì)胞內(nèi)柔紅霉素的相對(duì)濃度增加了1倍，提示千金子素L10對(duì)P-gP具有顯著的抑制作用，該作用稍強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照藥環(huán)胞霉素A，證實(shí)了千金子相關(guān)成分抗腫瘤的多藥耐藥性。

4 巴豆、甘遂、芫花、京大戟

巴豆為大戟科植物巴豆Croton tiglium L.的干燥成熟果實(shí)。早期臨床驗(yàn)證含有巴豆的中藥復(fù)方“抗白丹”單用對(duì)急性白血病有一定效果［23］。徐建國(guó)等［24］、田艷偉［25］分別使用巴豆水提液處理白血病細(xì)胞HL60進(jìn)行誘導(dǎo)分化研究，結(jié)果表明巴豆水提液能抑制HL60細(xì)胞增生，提高HL60NBT還原能力，增強(qiáng)HL60吞嗞能力，因此說(shuō)明巴豆水提液能夠誘導(dǎo)白血病細(xì)胞HL60向正常方向分化。

甘遂為大戟科植物生遂 Euphorbia kansui T.N.Liou ex T.P.Wang的干燥塊根。甘遂提取物對(duì)在體P388白血病細(xì)胞小鼠有抑制作用，從中分離得到的兩個(gè)巨大戟二萜醇型二萜酯甘遂素甲、乙(Kansuiporin A，B)，對(duì)(HL60、K567、H322)等多種癌細(xì)胞表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性［26］。

芫花為瑞香科植物芫花Daphne genkwa Sieb.et Zucc.的干燥花蕾。1981年，Kasai等［27］從芫花中分出抗白血病有效成分芫花烯，在對(duì)小鼠進(jìn)行體內(nèi)抑制P388淋巴細(xì)胞白血病的生物實(shí)驗(yàn)中，低劑量芫花烯即有顯著的抗白血病活性。1982年Hall等［28］研究了芫花烯和芫花酯甲的抗腫瘤活性，二者的抗白血病的主要機(jī)理是影響DNA和蛋白質(zhì)的合成。近年來(lái)關(guān)于芫花中二萜成分的抗腫瘤作用又有新報(bào)道:genkwanines D、genkwanines H、genkwaines J、yuanhuacin、yuanhuadine通過(guò)抑制DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅰ實(shí)現(xiàn)抗腫瘤作用［29］。

京大戟為大戟科植物大戟Euphorbia pekinensis Rupr.的干燥根。以大戟注射液為實(shí)驗(yàn)用藥，對(duì)KY821細(xì)胞株進(jìn)行體外藥物實(shí)驗(yàn)，并應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞的DNA含量，觀察KY821細(xì)胞株的細(xì)胞動(dòng)力學(xué)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)大戟注射液明顯阻斷了S期細(xì)胞，說(shuō)明大戟注射液具有抑制癌細(xì)胞DNA合成作用［30］。

5 小結(jié)

綜合國(guó)內(nèi)外相關(guān)研究，峻下逐水藥抗白血病作用亦表現(xiàn)在3個(gè)方面，但大多數(shù)藥物表現(xiàn)為細(xì)胞毒性作用，要么通過(guò)抑制DNA、RNA合成，要么抑制白血病細(xì)胞分裂增殖。也有部分藥物通過(guò)提高機(jī)體免疫力來(lái)達(dá)到殺滅腫瘤細(xì)胞的目的，如商陸皂苷對(duì)淋巴因子的誘生;還有部分藥物對(duì)白血病細(xì)胞有誘導(dǎo)分化作用，如巴豆對(duì)HL60細(xì)胞的誘導(dǎo)分化。峻下逐水藥對(duì)白血病的作用研究還處于實(shí)驗(yàn)篩選階段，對(duì)其作用機(jī)制缺乏深入系統(tǒng)的研究，與臨床應(yīng)用還有很大的距離。需要從廣度和深度入手，拓展篩選范圍，進(jìn)一步加強(qiáng)機(jī)理探討，以期取得峻下逐水藥抗白血病的突破。

目前，峻下逐水藥用于白血病治療，已有臨床報(bào)道，大多采用復(fù)方，但其機(jī)制在分子水平還沒(méi)有徹底闡明(難度很大)。若能從單味中藥及單一成分著手，篩選出其中的有效成分，那么，將有利于峻下逐水藥的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和推廣應(yīng)用。研究中將體外實(shí)驗(yàn)、動(dòng)物在體實(shí)驗(yàn)和臨床實(shí)驗(yàn)相結(jié)合，闡明單一有效成分的作用機(jī)制及其靶點(diǎn)，既為治療白血病的藥物研究開(kāi)辟新的途徑，又為峻下逐水藥的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

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