應(yīng)用組織特異性分子的保守序列鑒定人源細(xì)胞的組織來(lái)源

孫 昊，劉玉琴，卞曉翠，楊振麗，趙曉梅

（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)學(xué)院病理學(xué)系細(xì)胞資源中心，北京 100005）

體外培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)細(xì)胞資源是目前醫(yī)學(xué)與生命科學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用最廣泛、最重要的實(shí)驗(yàn)工具之一，使用背景清楚的細(xì)胞是實(shí)驗(yàn)可靠的關(guān)鍵。尤其是人類細(xì)胞用于發(fā)病機(jī)制研究及藥物研發(fā)，要求往往更為嚴(yán)格。被交叉污染細(xì)胞的使用，雖然很早已被認(rèn)識(shí)，但近年來(lái)隨著實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的更廣泛應(yīng)用，其擴(kuò)大的趨勢(shì)與實(shí)驗(yàn)要求的提高形成了巨大反差。本實(shí)驗(yàn)室早先已對(duì)于實(shí)驗(yàn)細(xì)胞的種屬鑒定［1］和細(xì)菌、支原體污染鑒定做了深入研究，STR檢測(cè)分析用于識(shí)別人類細(xì)胞的個(gè)體起源。本實(shí)驗(yàn)建立同一個(gè)體不同組織起源的鑒定新方法。眾所周知，細(xì)胞可以通過(guò)形態(tài)和生長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)細(xì)胞的組織來(lái)源進(jìn)行初步分析，但要準(zhǔn)確分析，很多實(shí)驗(yàn)室和保藏中心往往采用抗原抗體爬片、Western blot和基因芯片大通量測(cè)序等方法，其比較耗時(shí)耗力，成本也高，且常常參比標(biāo)準(zhǔn)不明顯，易受外在條件干擾。本研究通過(guò)反轉(zhuǎn)錄PCR對(duì)17個(gè)分子進(jìn)行組織特異性驗(yàn)證，篩選出可用于鑒定常見(jiàn)細(xì)胞組織起源的指標(biāo)，并對(duì)部分庫(kù)藏細(xì)胞進(jìn)行了驗(yàn)證。

1 材料與方法

1.1 細(xì)胞培養(yǎng)

本實(shí)驗(yàn)中所有細(xì)胞及培養(yǎng)基都由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所細(xì)胞中心提供（表1），所有細(xì)胞的培養(yǎng)方法按常規(guī)進(jìn)行。

1.2 哺乳動(dòng)物細(xì)胞mRNA的提取純化和cDNA的合成

應(yīng)用Trizol（Takara公司）試劑進(jìn)行細(xì)胞mRNA的提取，氯仿/無(wú)水乙醇純化，操作步驟按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行?！?br>