燈盞細辛藥材的薄層色譜鑒別

王彥青

鄭州市第八人民醫院藥劑科,河南鄭州 450000

燈盞細辛是一種傳統的中藥材，為菊科飛蓬屬短葶飛蓬的干燥全草，又名燈盞花，主要分布在我國的云南、廣西、貴州、四川等西南地區，其中有98%左右分布在云南[1]。燈盞花具有消炎止痛、祛風除造詞濕、活血化瘀、驅寒解表、通經活絡的作用，自20世紀70年代開始廣泛的應用于臨床，主要用于冠心病、心絞痛、缺血性心腦血管疾病[2-3]。目前，燈盞花在老年糖尿病、癡呆等疾病的治療方面也得到了一定的肯定。隨著對燈盞細辛有效成分的不斷深入研究，發現除了黃酮類的野黃岑苷具有良好的藥效外，燈盞細辛中的咖啡酸酯類及酚酸類化合物也是不可忽視的活性成分，這些化合物不僅具有良好的抗氧化活性，同時還具有一定的擴張血管和抑制血栓形成的作用，且活性與野黃芩苷相當[4]。因此，全面評價燈盞細辛藥材質量是一項非常有意義的工作[5]，為了有效鑒別燈盞細辛中的多種有效成分，該研究于2012年10月—2013年6月采用薄層色譜法鑒定此藥材的野黃岑苷、3,5-O-二咖啡?？鼘幩?、咖啡酸和1,3-O-二咖啡酰奎寧酸，以為其質量控制及評價提供參考和依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

全自動薄層鋪板器，超級循環水箱，臺式超聲波清洗器，1/10萬分析天平。

1.2 試藥

硅膠G薄層板；聚酰胺薄膜；3，5-O-二咖啡?？鼘幩釋φ掌?、野黃芩苷對照品、1，3-O-二咖啡?？鼘幩釋φ掌?、咖啡酸對照品、燈盞細辛對照藥材，燈盞細辛藥材，其他所用試劑均為分析純。

2 方法

2.1. 對照品溶液的配制

對照品溶液1：稱取3，5- O-二咖啡?？鼘幩釋φ掌? mg，置于10 mL的容量瓶中，加適量甲醇溶解后，繼續加甲醇定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液1，于冰箱中冷藏保存，備用。

對照品溶液2：稱取野黃芩苷對照品、咖啡酸對照品、1，3-O-二咖啡?？鼘幩釋φ掌犯?0 mg，置于5 mL容量瓶中，加適量甲醇溶解后，繼續加甲醇定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液2，于冰箱中冷藏保存，備用。

2.2 供試品溶液的配制

供試品溶液1：取燈盞細辛粉末0.5 g，加甲醇10 mL，加熱回流30 min，濾過，蒸干濾液，將3滴鹽酸加入到殘渣中，再將8 mL乙酸乙酯加入其中，超聲處理5 min，濾過，蒸干濾液，加1 mL甲醇溶解殘渣，即得供試品溶液1。

供試品溶液2：取燈盞細辛粉末1 g，加0.2%的碳酸氫鈉溶液10 m L，浸泡過夜，濾過，用稀硫酸調濾液pH至3.0， 將無水甲醇20 mL加入，加熱回流30 min，濾過，蒸干濾液，加10 mL 水溶解殘渣，用5 mL正丁醇振搖提取，蒸干正丁醇液，加1 mL甲醇溶解殘渣，即得供試品溶液2。

2.3 對照藥材溶液的配制

對照藥材溶液1：取燈盞細辛對照藥材0.5 g，按供試品溶液1的方法制備，即得。

對照藥材溶液2：取燈盞細辛對照藥材1.0 g，按供試品溶液2的方法制備，即得。

2.4 陰性對照品溶液的配制

不加供試品，分別按照供試品溶液1和2的方法制備，得陰性對照品溶液1和2。

2.5 薄層色譜的點樣、展開及處理[6]

鑒別一：分別精密量取上述供試品溶液1以及對照品藥材溶液1各5 μL，對照品溶液1取2 μL，陰性對照品溶液1取5 μL，點在同一硅膠薄層板上，展開劑為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1∶7∶1），展距 8 cm，取出后，晾干。噴上 1% 的 Fecl3乙醇溶液，在日光下檢視，見圖1。

圖1 薄層色譜鑒別

鑒別二：吸取上述對照藥材溶液2、供試品溶液2各2 μL，陰性對照品溶液2取2 μL，對照品溶液2取1 μL，分別點于同一聚酰胺薄膜上，展開劑為冰醋酸，展距8 cm，取出后，晾干。噴上1%的Fecl3乙醇溶液，在日光下檢視，見圖2。

圖2 薄層色譜鑒別二

3 結果

鑒別一：由圖1可以看出，在供試品溶液的薄層色譜圖中，于對照品溶液或對照藥材溶液的色譜圖相應的位置上，均存在相同顏色的斑點，且在相應的位置上陰性對照品溶液無斑點。

鑒別二：由圖2可知，在供試品溶液的薄層色譜圖中，于對照品溶液或對照藥材溶液的色譜圖相應的位置上，均存在相同顏色的斑點，且在相應位置上陰性對照品溶液無斑點。

4 討論

在該研究的薄層色譜鑒別預實驗中，曾將按樣品加三氯甲烷后的溶液、甲醇溶解的溶液以及樣品直接回流獲得的溶液進行索氏提取，加熱回流該3種提取液直至無綠色，然后除去三氯甲烷溶液，揮干溶劑，干燥藥渣，并連同濾紙一起轉移到具塞的錐形瓶中，加入30 mL甲醇并水浴回流1.5 h，過濾后，加2 mL甲醇使殘渣溶解，將獲得的溶液作為供試品溶液進行薄層色譜分析，結果未發現與對照品溶液相對應位置上的斑點。

除此之外，在進行鑒別一時，曾以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（2∶7∶1）為展開劑，但結果發現分離效果不夠明顯，故將展開劑比例調整為甲苯-乙酸乙酯-甲酸（1∶7∶1）；預實驗中，供試品溶液和對照藥材溶液的點樣量分別為10 μL和5 μL，發現點樣量為5 μL時，分離效果好且斑點清晰，因此最終確定供試品及對照藥材溶液的點樣量為5 μL，而3，5-O-二咖啡酰奎寧酸對照品溶液的點樣量在4和2 μL時，發現2 μL更合適，所以最終確定其點樣量為2 μL。

而鑒別二時，供試品溶液、對照藥材溶液和對照品溶液的初始點樣量均為0.5 μL，但結果發現斑點顏色較淺，不易區分。經試驗后，供試品溶液、對照藥材溶液、對照品溶液的點樣量最終分別確定為2 μL、2 μL和1 μL。同時在顯色時，由于對照品溶液2中1，3-O-二咖啡?？鼘幩崾軠囟鹊挠绊戄^大，其在較低溫時不顯色，因此可將其放置烘箱中加熱 1 min 后再進行顯色，且在進行鑒別二的過程中，應注意使展開后的薄層板保持干透。

綜上，該研究通過采用多種提取方法將燈盞細辛的有效成分 提取分離并鑒別，操作可行，重復性好，準確度高，可作為燈盞細辛藥材的定性鑒別方法。

[1] 劉勤, 張紅宇,王璐.燈盞花藥理作用研究進展[J].云南中醫中藥 雜志,2013, 34(2): 61-64.

[2] 劉俊.中藥飲片調劑中審方的作用分析與改進策略[J].中醫臨床研究,2012, 4(2): 44.

[3] 甄君,孔梅,李振東,等.燈盞細辛注射液對急性腦梗死患者血清S100B蛋白表達及神經功能恢復的影響[J].中藥材,2011,34(10):1642-1644.

[4] 鄭林,喬希,黃勇,等.貴州產燈盞細辛藥材超高效液相指紋圖譜研究[J].時珍國醫國藥, 2011, 22(5): 1117-1119.

[5] 梅艷, 馮春, 李俊,等.HPLC 同時測定燈盞細辛合劑中 4 種有效成分的含量[J].中藥材, 2013(4): 665-667.

[6] 于玲,邱鵬.燈盞細辛藥材的薄層色譜鑒別[J].中國藥業, 2011,20(16):75-76.