抗菌肽KS26基因的串聯及在畢赤酵母中的表達

張元新，葛雅琨

(吉林化工學院化工與生物技術學院，吉林吉林132022)

自青霉素誕生以來，抗生素一直是治療人類病原微生物感染疾病的重要武器;但是，隨著抗生素的濫用及致病菌的多藥耐藥性的產生，抗生素逐漸失去往日的作用效果，所以尋找新型的抗菌資源已成為備受關注的焦點［1］.陽離子抗菌肽是由12-50個氨基酸組成的陽離子型的兩親性分子.目前，已作為一種新型抗生素被廣泛研究，它們存在于動物、植物、微生物中，是細菌、植物、低等動物的主要防御機制［2］.在脊椎動物中，也能夠運用特殊的免疫方式，作為一線防御物質，在病原微生物侵入早期抑制其生長［3］.因此，陽離子抗菌肽因其具有的陽離子電荷和兩親構象使其具有良好的抗菌活性，備受科研工作者的重視［4］.

利用固相態化學合成小片段陽離子小分子多肽成本太高［5］.因此，利用畢赤酵母系統進行體外重組表達的方法能夠有效降低成本［6］.該系統具有很多優點［7］:(1)利用受甲醇誘導的醇氧化酶(alcohol oxidaseⅠ，AOX1)啟動子，可嚴格控制外源基因的表達;(2)畢赤酵母生長快速，培養簡單，適合高密度培養，發酵后每升培養液細胞濕重可達450克，有利于提高目的蛋白產量;(3)畢赤酵母作為一種真核細胞生物，可以進行蛋白翻譯后的加工，以使外源蛋白蛋白得到正確的折疊盒修飾;(4)該系統已有20多年的研究開發歷史，有多重受體菌和表達載體可供選擇，可以進行胞內表達和分泌表達.因此，利用畢赤酵母真……