TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達及臨床意義

楊聰琴 張玲 陳娟

河南科技大學第五附屬醫院兒科，河南洛陽471000

TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達及臨床意義

楊聰琴 張玲 陳娟

河南科技大學第五附屬醫院兒科，河南洛陽471000

目的探討TNF-a（腫瘤壞死因子-a）和NO（一氧化氮）在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達及臨床意義。方法選擇2009年10月—2011年10月收治的病毒性腦炎患兒86例（觀察組），留取治療前后腦脊液標本2 mL室溫下以2000r/min離心后，取上清液置-20℃冰箱保存。采用雙抗體夾心酶聯免疫吸附試驗（ELISA）測定腦脊液中的TNF-a；通過比色法測定NO2/NO3值表示NO的濃度。與無中樞神經系統病變的患兒40例（對照組）進行比較。結果觀察組急性期患兒腦脊液中TNF-a（1.78±0.44）ug/L，明顯高于對照組的（0.910.±37）ug/L。差異有統計學意義（t=9.8139，P＜0.05），恢復期患兒腦脊液TNF-a水平（0.96±0.32）ug/L，與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）；急性期患兒腦脊液中NO(23.89±6.54)mol/L，明顯高于對照組（7.24±2.31）mol/L，比較差異有統計學意義（t=5.46,P＜0.01）。恢復期患兒腦脊液中NO水平（9.7±3.8）mol/L與對照組比較差異無統計學意義。故觀察組急性期重癥患兒腦脊液中TNF-a和NO水平，明顯高于輕癥及對照組患兒，差異有統計學意義。結論檢測TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的水平，有助于臨床診斷和判斷病情的發展。

小兒病毒性腦炎；腦脊液；表達；腫瘤壞死因子-a；一氧化氮

小兒病毒性腦炎是由各種病毒感染引起的急性中樞神經系統感染性疾病，是腦實質的炎癥，近年來患病率較以往有明顯上升。病毒性腦炎患兒病情危急而嚴重，可能出現驚厥、昏迷、腦水腫等神經系統的癥狀，可并發心力衰竭、呼吸衰竭、肝腎功能損害等嚴重的并發癥。小兒重癥病毒性腦（severe viral encephalitis，SVE）病死率高，存活患兒常留有各種神經系統的后遺癥[1-2]，嚴重影響患兒及其家庭的生活質量，應盡早診斷，積極正確治療。因此，早期診斷，控制疾病進展，減少后遺癥的發生是關鍵。現回顧性分析我院2009年10月—2011年10月收治的病毒性腦炎患兒的臨床資料，研究患兒腦脊液中TNF-a和NO水平，旨在探討TNF-a（腫瘤壞死因子-a）和NO（一氧化氮）在病毒性腦炎患兒腦脊液中的表達及臨床意義，為臨床診斷、治療提供一定的參考信息。

1 資料與方法

1.1 一般資料

病毒性腦炎患兒86例（觀察組），全部病例均為急性或亞急性起病，腰穿檢查腦脊液符合病毒性腦炎的特點，并攝胸片、PPD實驗除外結核感染；做腦CT或MRI檢查排除顱內占位性病變，寄生蟲感染。頭顱CT，腦電圖檢查符合病毒性腦炎的臨床特點。腦炎組分為輕癥組和重癥組。輕癥組40例，男23例，女17例，年齡（5.4±1.1)歲。臨床表現為發熱、頭痛、惡心、嘔吐、嗜睡或精神異，常腦電圖異常，頭顱CT無異常。重癥組，其中男26例，女20例，年齡（5.6±1.1）歲，病程（12.6±3.0）d。臨床表現為發熱、頭痛、惡心、嘔吐、嗜睡或精神異常，部分患兒有高熱持續不退、頻繁抽搐或驚厥持續狀態、昏迷、癱瘓或出現不同程度的腦膜刺激征。其中昏迷（重度）22例，伴有昏迷（輕度）24例。入院后均給予止驚、鎮靜、降顱壓、抗感染、營養神經等綜合治療。對照組40例，男21例，女19例；年齡（5.5±1.0）歲。患者發熱，嘔吐，頭疼，惡心，腦脊液檢查無病毒性腦炎的特點，拍胸片，PPD實驗除外結核感染，腦CT或MRI排除顱內占位性病變，寄生蟲感染。患兒的年齡、性別相比較差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

所有患兒入院24 h內取腦脊液做常規檢查的同時，留取腦脊液標本2 mL室溫下2000 r/min離心后，取上清液置-20℃冰箱保存，檢測腦脊液中TNF-a和NO的濃度。TNF-a檢測方法：用由海南華美公司提供的試劑盒，美國HyperionMR2III型酶標儀作為檢測儀器，由專業人員用雙抗體夾心酶聯免疫吸附實驗（ELISA）進行測量。NO檢測方法：通過比色法測定NO2/NO3值表示NO的濃度，試劑盒用美國CAYMAN,由專業人員嚴格按說明書進行檢測。兩組患兒治療7 d后按上述方法復查腦脊液中TNF-a和NO的水平。

1.3 統計學方法

應用SPSS 13.0軟件進行統計學分析，計量資料以均數±標準差表示，比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統計學意義，P＜0.01有顯著統計學差異。

2 結果

兩組患兒急性期和恢復期腦脊液中TNF-a、NO比較見表1、2。

表1 兩組患兒急性期和恢復期腦脊液中TNF-a、NO比較（±s）

表1 兩組患兒急性期和恢復期腦脊液中TNF-a、NO比較（±s）

注：*P＜0.05重癥組急性期與恢復期患兒腦脊液中TNF-a水平比較，**P＜0.01重癥組急性期與恢復期患兒腦脊液中NO水平比較,明顯高于對照組患兒，差異有統計學意義。

組別T N F -a（u g / L）N O（m o l / L）治療前治療后治療前治療后重癥組（n = 2 2）對照組（n = 4 0）t值1 . 7 8 ± 0 . 4 4*0 . 9 1 ± 0 . 3 7 2 . 9 3 3 0 . 9 6 ± 0 . 3 2 0 . 7 8 ± 0 . 2 3 3 . 1 3 6 2 3 . 8 9 ± 6 . 5 4**7 . 2 4 ± 2 . 3 1 7 . 3 6 4 9 . 7 ± 3 . 8 6 . 1 5 ± 1 . 2 6 3 . 6 6 9

表2 兩組患兒急性期和恢復期腦脊液中TNF-a、NO比較（±s）

表2 兩組患兒急性期和恢復期腦脊液中TNF-a、NO比較（±s）

注：△P＜0.05觀察組急性期與恢復期患兒腦脊液中TNF-a水平比較，△△P＜0.01觀察組急性期與恢復期患兒腦脊液中NO水平比較,明顯高于輕癥組患兒，差異有統計學意義。

組別T N F -a（u g / L）N O（m o l / L）治療前治療后治療前治療后重癥組（n = 2 2）輕癥組（n = 2 4）1 . 7 8 ± 0 . 4 4△1 . 3 5 ± 0 . 6 4 2 . 9 9 7 0 . 9 6 ± 0 . 3 2 0 . 7 9 ± 0 . 2 6 0 . 6 8 1 2 3 . 8 9 ± 6 . 5 4△△1 8 . 7 2 ± 7 . 1 5 7 . 8 8 9 9 . 7 ± 3 . 8 7 . 2 6 ± 2 . 0 1 0 . 6 6 1

3 討論

病毒性腦炎是由各種病毒入侵腦組織引起的急性炎癥反應，可引起相應的細胞功能受損病刺激機體發生免疫反應，而細胞因子TNF-a和NO也參與了病毒與機體的反應。TNF-a是一種由單核巨噬細胞分泌的具有廣泛生物活性的多肽調節因子，是體內重要的炎癥因子，具有雙重作用[3]。由于各種病毒侵入腦組織引起急性炎性反應，會引起相應的細胞功能受損并刺激機體產生免疫反應，而細胞因子TNF-a也參與了病毒和機體的反應[4]。當病毒侵犯機體時，可激活免疫系統，產生各種細胞因子和體液因子，適量的TNF-a對機體抵抗疾病有益，而過量的TNF-a可使組織嚴重損傷，器官衰竭[5]。TNF-a可進一步誘導IL-6、8、10等細胞因子的產生，參與體內急性期反應，引起趨化肽等釋放、發熱，使內皮細胞活化而導致血管通透性增加。Babu等[6]發現日本腦炎患者病死率隨腦脊液中TNF-a水平的增加而增加，腦脊液中高水平的TNF-a與致死性的預后有關。TNF-a可直接破壞血腦脊液屏障使其通透性增加，可直接刺激下丘腦體溫調節中樞引起發熱，作用于神經細胞和神經膠質細胞，使其表面表達更多的細胞因子及受體，加重神經細胞損傷，從而引起炎性反應，感染性休克及惡病質的發生。本研究結果顯示，病毒性腦炎急性期血清TNF含量明顯高于對照組。說明TNF-a水平與病毒感染程度密切相關。過多的TNF-a除引起局部癥狀外，還可引起全身癥狀。因此可以通過檢測TNF-a水平，有助于判斷病毒性腦炎患兒的病情和腦損傷程度，可作為早期診斷參考指標，并檢測病毒性腦炎的病程及可能死亡的病例，早期干預，降低病死率。

內源性NO是在一氧化氮合酶（NOS）催化下由L—精氨酶轉化為L-瓜氨酸和NO，由于NO半衰期短，所以體內NO水平的高低完全依賴NOS。NOS在體內至少有兩種存在形式即結構型鈣依賴性NOS(cNOS)當其受生理刺激后活化釋放少量NO，發揮生理調節作用；而另一種是誘導型鈣非依賴性NOS（iNOS），它廣泛分布在感染，炎癥條件下，內毒素和某些細胞因子誘導下進行釋放和轉錄，合成大量NO而且持續時間較長，引起細胞毒素的作用[7-8]。病毒性腦炎患兒，由于病毒對機體的入侵，可激活以單核巨噬細胞為代表的防御體系，被激活的巨噬細胞通過非依賴性一氧化氮酶（iNOS）產生高水平的NO，病毒性腦炎急性期腦脊液的NO含量明顯高于正常人，且隨著病情的恢復，NO的含量較急性期明顯下降[9]。腦脊液中NO的增高雖可抑制病毒的復制，但過量的NO可導致腦組織的損傷。腦損傷嚴重時，顱內壓增高，NO含量可明顯增高，因此,NO參與病毒性腦炎的發生、發展過程，腦細胞損傷越嚴重，NO含量越高成正相關系。所以，通過檢測腦脊液中NO的變化，判斷分析病情發展，早期干預，降低病死率。

本組資料結果顯示：觀察組急性期患兒腦脊液中TNF-a（1.78± 0.44）ug/L，明顯高于對照組的（0.910.±37）ug/L。差異有統計學意義（t=9.8139，P＜0.05），恢復期患兒腦脊液TNF-a水平（0.96±0.32）ug/L，與對照組比較差異無統計學意義（P＞0.05）；急性期患兒腦脊液中NO(23.89±6.54)mol/L，明顯高于對照組（7.24±2.31）mol/L，比較差異有統計學意義（t=5.46,P＜0.01）。恢復期患兒腦脊液中NO水平（9.7±3.8）mol/L與對照組比較差異無統計學意義。故觀察組急性期重癥患兒腦脊液中TNF-a和NO水平，明顯高于輕癥及對照組患兒，差異有統計學意義。由此可見，檢測TNF-a和NO在病毒性腦炎患兒腦脊液中的水平，有助于臨床診斷和判斷病情的發展。

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R729

A

1672-5654（2014）11（a）-0183-02

2014-08-26）

楊聰琴（1969-），女，漢族，河南洛陽，醫學學士，副主任醫師，研究方向：兒科臨床。