改良終點法和原終點法在臨床生化檢驗中的作用

黃文立 王新華 黃莉娟

嘉祥縣人民醫院檢驗科，山東濟寧272400

改良終點法和原終點法在臨床生化檢驗中的作用

黃文立 王新華 黃莉娟

嘉祥縣人民醫院檢驗科，山東濟寧272400

目的對臨床生化檢驗中改良終點法和原終點法的作用進行對比分析。方法臨床對兩種檢驗方法進行使用，對比分析改良終點法和原終點法之間的相關性以及線性濃度。結果在檢測結果差異對比中，兩種方法差異不明顯，不具有統計學意義（P＞0.05）；改良終點在正常濃度下的批內CV和總CV測定要高于原終點法，在異常情況下低于原終點法，兩者之間差異顯著，具有統計學意義（P＜0.05）；改良終點法在高濃度測量下其線性濃度測定范圍要大于原終點法，兩者之間差異顯著，具有統計學意義（P＜0.05）。結論在生化高濃度檢驗中，改良終點法應用優勢明顯高于原終點法，因此可以對改良終點法進行推廣使用。

改良終點法；原終點法；生化檢驗

終點法在臨床生化檢驗中的應用越來越廣泛，在臨床生化檢驗中，最為常用的實驗為總蛋白、葡萄糖氧化酶法等。一般終點法在臨床中是通過手工操作完成。本次在研究中嚴格依照其檢測原理，對終點法的應用進行了一定的改良，也就是對其混合樣品和試劑量減半，同時也要確保樣品和試劑的比例與之前保持一致。將相同量的水在終點前加入其中并將其均勻稀釋，之后測定其吸光度[1-2]。再把水在第二試劑中加入中，能夠將單試劑終點法以及雙試劑終點法在全自動生化分析儀上進行轉換；注水第三試劑中，也能夠相互轉換雙試劑終點法以及三試劑終點法[3-4]。本文補充時間，包括起止年月依據NCCLS制定的評價方案，比較分析了2013年1月—2014年1月標本檢驗改良終點法和原終點法的相關性，并評價了二者的精密度及線性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器和試劑

所用儀器為迪瑞CS-6400全自動生化分析儀，在測定時保證儀器的工作狀態良好；所用試劑為英國朗道標準血清，全部都是血清標本，并且確保這些標本沒有出現脂濁和溶血等情況，其檢測工作全部都在1 h完成；選擇的是迪瑞液體單試劑型（氧化酶法）葡萄糖測定試劑盒；其中所選用的葡萄糖標準液，其規格精確為[2.00 g/dl(111.00 mmol/L)]。

1.2 檢驗方法

1.2.1 相關性檢驗采用RANDOX標準血清進行定標，每次測定之后必須進行室內質控。其中原重點法的測光點為33、線性范圍為0～16 mmol/L、樣品量為4 μL、反應方向為上升、波長為510 nm、試劑量R1為300 μl以及單點定標為1-point；改良終點法的測光點為33、線性范圍為0～20 mmol/L、樣品量為2 μL、反應方向為上升、波長為510nm、試劑量R1為150 μL以及單點定標為1-point。將10份臨床標本依照NCCLS制定評價方法進行收集，將其葡萄糖濃度分成三個類型，分別是高、中、低，測定依照從小到大的順序對其分別實施改良終點法以及原終點法，之后測定依照從大到小順序對其采用改良終點法以及原終點法進行，對兩次測定結果均值取出。選取200份標本，以連續實施10 d測量，其結果可以采用配對χ2檢驗和直線回歸分析得出。兩種測定方法的具體參數設計如表1所示。

1.2.2 精密度檢測按照美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）制定評價方案進行精密度測算，選取出兩份質控血清，分別為正常濃度和異常濃度，將兩者嚴格依照說明書進行復溶，之后分裝在塑料管中，每一管為250μL，將管口封閉放置在-20℃環境中進行冷凍封存，在對其進行使用前以及使用后，均要將其分別進行融化到室溫，每份濃度的質控血清在使用過程中均需要雙份測定，并且還要定時定點進行試驗，2批/d，上午一次，下午一次，對其實施連續20 d的測定，并且還要進行室內質控，對其批內的不精密度計算出來，之后對其總不精密度內進行計算。

1.2.3 線性評價評價兩種方法測定的線性范圍時嚴格依據NCCLS制定的評價方案。將111 mmol/L葡萄糖標準液加入血清基質中，將5號高值標本（H）和1號低值標本（L）配置出來，二者的濃度分別為29.96 mmol/L和3.59 mmol/L，將二者混合均勻，2號、3號和4號的比例分別為3L：1H、2L：2H、1L：3H。2～4號標本的濃度為低值標本和高值標本之和與二者體積之比。

表1 改良終點法與原終點法的程序參數設置（葡萄糖測定）

表2 改良終點法與原終點法測定的精密度結果比較

1.3 統計學處理方法

統計學處理具體說明統計軟件名稱和版本、所用檢驗方法、數據表示方法。

由專人在計算機中輸入經整理校對的數據，運用統計學軟件SPSS 21.0將數據庫建立起來，計數資料采用%表示，用χ2檢驗，檢驗水準α=0.05。當P＜0.05表示兩組數據差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 相關性比較

本次試驗回歸方程

兩種測定結果差異比較不明顯（P＞0.05），其回歸方程是：r= 0.9992（n=100），y=1.0112x-0.0381。

2.2 精密度

在正常濃度下，和原終點法相比，改良終點法的批內CV以及總CV測定值要明顯偏高（P＜0.05）；在異常濃度下，和原終點法相比，改良終點法的批內CV以及總CV測定值要明顯偏低（P＜0.05）。具體見表2。

2.3 線性結果

改良終點法與原終點法的線性回歸方程分別為y=1.070 5x-0.218 3，r=0.998 2和y=1.440 4x-2.939 7，r=0.979 1，低、中濃度下兩種方法具有良好的線性關系，高濃度下改良終點法的線性濃度測定范圍明顯比原終點法寬（P＜0.05）。具體見表3。

表3 改良終點法與原終點法線性范圍測定結果比較（mmol/L）

3 討論

本研究在血清葡萄糖的測定中，分別運用改良終點法和原終點法，在評價兩種測定方法的精密度、線性等的過程中嚴格依據NCCLS標準化文件中的方案，結果顯示，兩種測定結果差異比較不明顯（P＞0.05）；在正常濃度下，和原終點法相比，改良終點法的批內CV以及總CV測定值要明顯偏高（P＜0.05），異常濃度下改良終點法測定的批內CV和總CV均明顯比原終點法低（P＜0.05）；改良終點法與原終點法的線性回歸方程分別為y=1.070 5x-0.218 3，r=0.998 2和y=1.440 4x-2.939 7，r=0.979 1，低、中濃度下兩種方法具有良好的線性關系，高濃度下改良終點法的線性濃度測定范圍明顯比原終點法寬（P＜0.05），說明在高值標本的測定中，改良終點法的精密度比原終點法好，且其測定線性范圍也比原終點法寬。由于檢測項目、品牌儀器、廠家試劑等直接而深刻地影響著測定的靈敏度及線性，因此臨床應該嚴格依據試驗有效設定程序的參數，為了從試驗中得到更為準確的精密度和線性，為臨床提供良好的診斷及治療依據，在合適的情況下可以將樣品和試劑的比例及反應稀釋度適當改變[5-9]。

隨著全自動生化分析儀在臨床應用中廣泛性的提高，臨床生化檢驗的智能化和微量化特點也越來越明顯，目前廣大檢驗工作者的一個工作和研究重點就是在改良其臨床檢驗方法中，需要加大對先進檢測設備的應用，以此最大化的對其試劑成本進行降低[10-13]。本次研究在臨床檢驗中對原終點法進行了一定的改良，其臨床分析結果還比較讓人滿意，一般情況下可以對比高濃度標本進行稀釋，其原因則是其具有較寬的測定線性范圍，并且還在試驗中對其試劑量減去一般，從而有效的實現了降低實際成本的要求[14-15]。其中黃健等[16]等也采用改良終點法和原終點法在臨床中一個用，其得出結果為改良法比原發測定高濃度標本時具有更高精確度，改良法測定線性范圍更寬，并且能夠對其試劑成本節約。與本次研究結果一致，說明本次研究具有研究價值。

總之，在生化高濃度檢驗中，改良終點法應用優勢明顯高于原終點法，因此可以對改良終點法進行推廣使用。

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Effects of modified end-point method and the primary end-point method in clinical biochemical laboratory

HUANG Wenli WANG Xinhua HUANG Lijuan
Department of the Jiaxiang County People's Hospital，Jiaxiang 272400，China

ObjectiveTo compare and analysis the effect of improved end-point method and the primary end point method in clinical biochemistry.MethodsThe two test methods were used,the correlation and linear concentration between the modified endpoint method and the primary end point method were compared and analysised.ResultsThe differences of detection result between the two groups were not significantly,(P＞0.05).Number of CV and total CV determination of the Improved terminal in the normal concentration were significantly higher than that of the primary end point method,and significantly lower than that of the primary end point method in exceptional circumstances,(P＜0.05).Determination of the linear concentration range of the improved terminal methodin the high concentration measurement were significantly biger than that of the primary end point method,(P＜0.05).Conclusion The advantage of improved endpoint method is higher than that of original endpoint method in the high concentration in the biochemical test,which can be used to improve the end-point method.

Improved endpoint method;Primary end point method;Biochemical tests

R446.1

A

1672-5654（2014）09（b）-0011-02

2014-07-20）

黃文立(1967-),男,漢族,山東巨野,中級職稱,本科,研究方向：檢驗專業。