T-SPOT．TB試驗在結核性腦膜炎診斷中的價值

王永生 周 航 劉 藺 陳易芳 王俊力

成都三六三醫院呼吸科，四川 成都 610041

基金項目：四川省衛生廳科研課題（100358）

基礎醫學

T-SPOT．TB試驗在結核性腦膜炎診斷中的價值

王永生 周 航 劉 藺 陳易芳 王俊力

成都三六三醫院呼吸科，四川 成都 610041

基金項目：四川省衛生廳科研課題（100358）

目的探討T-SPOT．TB（結核感染T細胞斑點實驗）試驗在結核性腦膜炎診斷中的價值。方法對我院26例臨床和影像學可疑結核性腦膜炎的患者的腦脊液實施結核感染T細胞斑點實驗，對照組為23例無結核原發病灶的腦膜炎患者的腦脊液實施結核感染T細胞斑點實驗。結果26例臨床和影像學可疑結核性腦膜炎患者中，23例結核感染T細胞斑點實驗陽性（占88．5%），對照組24例中結核感染T細胞斑點實驗陽性有4人（占16．7%）。利用結核感染T細胞斑點實驗檢測以此診斷結核性腦膜炎的敏感度為88．5%（95%可信區間CI 49．9～91．3）特異度為83．3%（95%可信區間CI 69．3～97．8），陽性預測值為82．5%（95%可信區間CI

T-SPOT；TB試劑盒；診斷；腦膜炎；腦脊液；結核病

結核性腦膜炎的診斷長久以來主要依靠臨床表現和積液性質，易導致誤診和漏診，進而影響患者的治療和預后。因此如何快速、準確的診斷結核性腦膜炎是亟待解決的臨床難題。

T-SPOT．TB試驗（結核感染T細胞斑點實驗）是通過檢測受結核菌特異性抗原刺激后釋放干擾素的外周血特異性T細胞來確定結核感染的方法。近年研究表明，通過T-SPOT．TB的方法來診斷活動性肺結核分枝桿菌感染的敏感度較高［1］，而在我國，對于該方法在肺外結核以及結核性腦膜炎診斷敏感度的文章報道很少。此研究使用結核感染T細胞斑點實驗對我科收治的高度懷疑結核性腦膜炎患者的腦脊液進行檢測，來評價此方法在診斷結核性腦膜炎中的應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對臨床上以發熱、頭痛、腦膜刺激征（+）為主要表現的患者，且MRI診斷為腦積水、肉芽增生或基底節區滲出性改變或腦脊液檢查表現為（腦脊液的白蛋白升高，糖下降，單核細胞及其比例升高）且臨床高度懷疑結腦的26例患者分為實驗組，予以T-SPOT．TB試驗，根據其結果，對臨床上考慮為結腦的患者予以診斷性抗癆治療。根據最終治療和隨訪結果，實驗組中有23例診斷為結核性腦膜炎，其中腦脊液中結核桿菌培養陽性或經過病理學活檢證明伴有肺部及另外部位有結核感染患者14例；無結核細菌學感染及病理性活檢證據，但通過診斷性抗癆最后得到痊愈的患者9例；隨訪后非結核性中樞神經系統感染患者2例。把患有非結核引起的感染性腦膜炎患者24名分為對照組，其中化膿性腦膜炎13例，病毒性腦膜炎8例，化腦合并真菌性腦膜炎2例，隱球菌性腦膜炎1例。

1.2 方法

1.2.1 腦脊液的 T-SPOT.TB試驗 采集患者腦脊液約20 ml，肝素抗凝后，離心分離出單核細胞液。然后洗板2次，取一塊預包被有γ-干擾素的單克隆抗體的96孔板，在4個孔內分別接種分離出單核細胞的混懸液。陰性對照只包含細胞懸液，陽性對照則加入5UL植物血凝素（PHA），實驗孔分別加入抗原ESAT-6（A）和CFP-10（B），放在5% CO2孵箱中37℃培養16～24 h后，最后加入顯色劑顯色，靜置7 min。用肉眼觀察結果并用吸水紙終止反應。斑點形成細胞的數日來描述并記錄斑點的各種參數。

1.2.2 結果判定 當測試孔A或B達到以下標準則判定為陽性結果：測試孔斑點數減去陰性對照孔斑點數大于

5，并且測試孔斑點數必須≥2倍的陰性對照孔斑點數。另外，每個病人必須對陽性對照有滿意的反應，即斑點數大于20或者充盈整個微孔。如果對一種或者兩種抗原反應陽性，也可認定為陽性。該試劑盒由英國牛津公司提供。

1.2.3 評價方法 采用敏感度、特異度、陽性預測值、陰性預測值、可信區間等作為該試驗的評價指標和方法。

1.3 統計學方法

本實驗采用SPSS 16.0數據包進行分析，計數資料之間的比較采用卡方檢驗，計量資料之間的比較采用t檢驗，組內比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

在實驗組可疑結核性腦膜炎26例患者中，23例T-SPOT．TB試驗陽性（88.5%）。對照組中24例T SPOT．TB試驗陰性20人（83.3%）結果如表1所示。T SPOT．TB試驗診斷結核性腦膜炎的敏感度為88.5%（95%可信區間CI 49.9～91.3）特異度為83.3%（95%可信區間CI 69.3～97.8），陽性預測值為83.5%（95%可信區間CI 72.6～97.9），陰性預測值為94.7%（95%可信區間CI 48.3～97.1）。如表2所示。

表1 T SPOT.TB對結核性腦膜炎的診斷試驗結果（n）

表2 T SPOT.TB診斷結核腦膜炎試驗的評價結果（%）

3 討論

通過檢測IFN-γ的產生，來快速診斷結核分支桿菌感染。該方法是使用編碼結核分支桿菌基因組的差異-1（RD-1）區域的ESAT-6和CFP-10的多肽，RD-1區域在卡介苗疫苗的所有菌株和絕大多數非結核分枝桿菌是不存在。這些試驗檢測活動性結核的敏感性為76%～100%，特異性是88%以上［2］。目前，國內外多項臨床研究證實了全血或血清的T-SPOT．TB檢測在活動性肺結核以及肺外結核的敏感度、特異度明顯高于TST，痰培養，痰TB DNA，血TB-AB.等方法［3］。特別是在合并免疫抑制及結核潛伏感染的診斷中，具有快速，敏感性及特異性較高的優點，在臨床上對疑似結核病的患者進行T-SPOT．TB試驗對鑒別診斷具有重要價值。

結核性腦膜炎屬于肺外結核的一種類型，肺外結核的現代診斷方法以微生物法和免疫法為主，國外的一些研究資料表明結核病中25%～30%屬于肺外結核，肺外結核感染的死亡率占總結核死亡率的14.1%～17.6%。但是，關于T-SPOT．TB試驗在診斷肺外結核病中的應用價值的報道較少，英國某傳染病醫院對64位采用過T-SPOT．TB試驗診斷活動性肺外結核的患者進行回顧性研究，與培養法相比，其敏感度為94%，特異度為85%。

在本項試驗中，T-SPOT．TB用于診斷結核性腦膜炎的敏感度為88.5%，特異度為83.3%，同國內外文獻報道相一致。根據研究，本實驗具有重要的臨床意義，和以往結核性腦膜炎的診斷方法相比較，本項試驗方法的敏感度要高，特異度也更好。另外與其他一些新的結核感染檢測方法相比，T-SPOT．TB試驗也有較為明顯的優勢，比如實驗中采用比較多的檢測結核分枝桿菌的QPCR方法，現在臨床上的大規模研究表明其真實的敏感度僅為45%。本研究的陽性預測值為83.5%，陰性預測值為94.7%，對于鑒別容易與結核性腦膜炎混淆的一些疾病，比如化膿性腦膜炎、霉菌性腦膜炎、病毒性腦膜炎等，該實驗均有鑒別診斷的作用，且體現了很好的臨床應用價值。但是，本試驗的不足之處在于研究例數較少，未在對明確排除結核感染的患者中進行T-SPOT．TB實驗的特異性進行評價，如果該項檢測方法能夠聯合QPCR的方法檢測在結核性腦膜炎的診斷作用可能其診斷的敏感性和特異性會更高，也為下一步的診斷提供新的方向。

現在國外的一些最新的研究成果證實，為了區分活動性及穩定期結核感染，對病變部位的漿膜腔積液進行離心分離出單核細胞液，將其予以T-SPOT．TB試驗，該方法的敏感度和特異度較高。相關文章報道，對17例印度結腦患者腦脊液單個核細胞進行T-SPOT．TB試驗，診斷活動性結核性腦膜炎其敏感度和特異度分別達到90%和100%。T-SPOT．TB試驗在心包積液，胸腔積液，腹

腔積液，肺泡灌洗液等也有成功的病例報道。

T-SPOT.TB試驗以腦脊液作為檢測標本，腦脊液的獲取較簡便，并且能快速得出結果，常規為第二天。該方法的臨床應用不僅可對結核感染的患者進行早診斷、早治療，且還可以盡量避免一些因誤診，漏診導致的一些耐藥性的產生，在很大程度上節省了醫療費用，并且還可以通過測定效應T淋巴細胞來協助判定人體是否完全清除了病原體，用來作為判定治療療效的一項指標之一。在臨床應用過程中該項試驗亦具有一定的局限性，由于T-SPOT.TB試驗試劑盒價格較為昂貴，操作較繁瑣，且需要專人培訓及操作，因此目前在我國尚未進行大規模開展，需要更多更大樣本臨床試驗進一步證實。

［1］Pai M，Riley LW，Colford JM Jr.Interferon-gamma assays in the immunodiagnosis of tuberculosis:a systematic review. Lancet Infect Dis 2004，4（12）：761-776.

［2］Alfred A Lardizabal，Lee B Reichman. Interferon-Gamma release assay for detection of tuberculosis infection.US Respiratory Disease，2006，54（6）：59-61.

［3］Mori T，et al.Specific detection of tuberculosis infection:an interferon gamma-based assay using new antigens.Am J Respir Crit Care Med 2004，170（1）：59-64.

Clinical Study of the Detection of T-SPOT.TB in Diagnosis of Tuberculosis Meningitis

WANG Yongsheng ZHOU Hang LIU Lin CHEN Yifang WANG Junli Department of respiratory，Avic 363 Hospital，Chengdu Sichuan 610041，China

ObjectiveTo analysis the value of T-SPOT．TB detection in the diagnosis of tuberculous meningitis．MethodsCerebrospinal fluid of 26 cases who clinical and radiographic suspected tuberculous meningitis was tested with T-SPOT．TB test．Cerebrospinal fluid of 24 cases of meningitis with no tuberculous was tested with T-SPOT．TB test as the control group．ResultsThe T-SPOT．TB test was positive in 24 cases of the experimental group（92．3%），however，in control group only 3 was positive（12．5%）．Using T-SPOT．TB test to diagnose tuberculous meningitis，the sensitivity was 92．3%（95% confidence interval CI 52．5～ 94．2），the specificity was 87．5%（95% CI 70．3～97．8），the positive predictive value was 83．5%（95% CI 72．6～97．9），and the negative predictive value was 94．7%（95% CI 48．3～ 97．1）．ConclusionT-SPOT．TB ELISPOT is a method with high sensitivity and specificity to the detection of tuberculosis infection，which is useful to quick and accurate diagnose tuberculous meningitis．

T-SPOT．TB kit，ELISPOT，Diagnosis，Meningitis，Cerebrospinal fluid，Tuberculosis

R521

B

1674-9316（2014）23-0068-04

10．3969/J．ISSN．1674-9316．2014．23．041

72．6～97．9），陰性預測值為91．7%（95%可信區間CI 48．3～97．1）。結論結核感染T細胞斑點實驗是一種具有較高敏感性和特異性的檢測結核感染的技術，這對快速而準確地診斷結核性腦膜炎是有用的。