CD4+CD25+Foxp3+細胞在哮喘大鼠發病的作用

張學敏

山西煤炭中心醫院呼吸內科，山西 太原 030006

CD4+CD25+Foxp3+細胞在哮喘大鼠發病的作用

張學敏

山西煤炭中心醫院呼吸內科，山西 太原 030006

目的觀察在哮喘大鼠中CD4+CD25+調節性T細胞Foxp3表達的變化，分析支氣管哮喘的發病機制，并為臨床的治療提供新方向。方法隨機將16只雄性的Wistar大鼠分為正常對照組和哮喘組，每組各8只。哮喘組：用卵白蛋白（OVA）使大鼠致敏，并予以霧化吸入刺激；正常對照組：等量生理鹽水處理。最后一次激發后，采用HE染色評價大鼠肺組織病理形態學改變；免疫組化染色分析Foxp3表達量；ELISA法測定肺泡灌洗液（BALF）IL-4及IFN-γ水平。結果哮喘組BALF中細胞因子IL-4明顯高于鹽水對照組，IFN-γ含量也升高，但IFN-γ/IL-4水平下降，即IFN-γ相對不足；哮喘組肺組織內Foxp3明顯增高，說明體內CD4+CD25+調節性T細胞在哮喘發作時出現異常分布的現象。結論CD4、CD25和Foxp3+三者共同調節性T細胞，與支氣管哮喘的發病機制密切相關，并打破Th1/Th2原有的平衡機制。

Foxp3；T細胞；支氣管哮喘

近幾年，研究表明在維持機體免疫穩態及抑制炎癥方面，T細胞的調節起重要作用，與哮喘氣道炎癥的發生相關密切。

1 材料和方法

1.1 材料

山西醫科大學實驗動物中心提供健康的Wistar大鼠16只，均為雄性。將動物隨機分為正常對照組和哮喘模型組，每組各8只。羅氏公司的卵蛋白卵白蛋白，北京天壇生物制藥研究所的滅活過的百日咳桿菌疫苗，天津三廠的氫氧化鋁粉。

1.2 實驗方法

正常對照組：從第1～14 d內，每隔7 d對大鼠予以腹腔注射1 ml生理鹽水；14 d后，予以霧化治療，每天吸入1次生理鹽水，30 min/次，共7 d。

哮喘組［1］：從第1～14 d內，每隔7 d對大鼠進行腹腔注射1 ml抗原液；14 d后以，每日霧化吸入1次1%OVA生理鹽水液進行激發，30 min/次，連續7 d。

觀察給藥期間兩組大鼠的各種反應，陽性：呼吸急促，躁動不安，腹肌抽搐等；陰性：沒有上述反應，行動如常。

標本采集：取下每只大鼠的左肺，分別給予以下操作：甲醛固定，石蠟包埋、切片，對切片分別進行HE染色和Foxp3試劑免疫組化染色，觀察其Foxp3表達的情況。

灌洗液的采集：夾閉左主支氣管，對每只大鼠的右肺予以3次的冰鹽水灌洗，灌洗量分別以3 ml、3 ml、和4 ml，最后收集灌洗液，進行1500轉的10 min離心，收集上清液并進行ELISA法檢測，測定IFN-γ、IL-4的含量。

1.3 統計學分析

所有研究數據均采用SPSS 13.0統計學軟件進行統計分析，差異顯著，有統計學意義（P＜0.05）。

2 結果與分析

哮喘模型的大鼠的肺組織發生了病理形態的改變。光鏡下觀察兩組大鼠的染色標本發現，在哮喘組大鼠的肺組織內出現較多的支氣管腔粘液。部分支氣管呈花瓣狀。而正常對照組的大鼠肺組織其形態基本正常。

哮喘大鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）Th1/Th2因子含量，見表1。

肺泡灌洗液（BALF）Th1/Th2因子結果顯示：哮喘大鼠肺泡灌洗液中IL-4及IFN-γ均較正常組高（P＜0.001）。但由IFN-γ增高的幅度明顯小于IL-4，即IFN-γ/IL-4比值明顯下降表現為Th2優勢。

哮喘大鼠肺組織Foxp3表達，見表2。

表1 兩組大鼠BALF液Th1/Th2因子含量（）pg/ml

表1 兩組大鼠BALF液Th1/Th2因子含量（）pg/ml

注：與哮喘組比較*P＜0.001；與正常組比較▲P＜0.001

組別 例數 IFN-γ IL-4正常對照組 8 10.84±2.81* 17.67±3.53▲哮喘組 8 14.53±3.35* 71.05±3.91▲

表2 兩組大鼠肺組織Foxp3表達比較（x-±s）

3 討論

作為氣道慢性炎癥中的支氣管哮喘，有多種細胞發生浸潤現象，其發生與多種炎癥因子有關。Th2細胞產生大量IL-4，在支氣管哮喘發生的各環節中均起重要作用。IFN-γ是活化Th1細胞分泌的最主要的細胞因子，具有使致敏小鼠血漿內的IgE水平和氣道高反應性降低，并使BALF中的浸潤細胞數量不斷減少。同時，IFN-γ對IL-4產生拮抗作用，減弱體內IgE的生成。此外，IFNγ對EOS的聚集有強烈的抑制作用，增強EOS的活化能力，并降低分化的GM-CSF水平。本實驗通過測定哮喘BALF中細胞因子IL-4，INF-γ含量變化，表明哮喘組BALF中細胞因子IL-4明顯高于鹽水對照組，IFN-γ含量也升高，但是IFN-γ與IL-4的比值呈下降趨勢，說明IFN-γ是呈相對不足的狀態。

CD4+CD25+T三者接觸抗原并產生刺激，從全身聚集到氣道，導致Th1/Th2失去平衡，最終引發了氣道的慢性非特異性炎癥。羅征秀等［2］報道對比CD4+CD25+T的調控功能發現，Th1比Th2容易被調控，說明CD4+CD25+T可能是通過對氣道的Th1細胞發揮抑制功能，最終促使Th2細胞發生分化過度現象。

綜上，在支氣管哮喘的發病機制中，CD4+CD25+調節性T細胞具有重要地位，CD4+CD25+調節性T細胞可打破h1/ Th2的平衡狀態，使局部的炎癥細胞發生浸潤，最終致使氣道的慢性非特異性炎癥的發生；其與肺組織內TGF-β的高表達密切相關，可使氣道發生重塑，并與哮喘慢性氣道粘膜的改變密不可分。

［1］呂國平，崔德健，郭英江，等．介紹一種建立大鼠哮喘模型的實驗方法［J］．中華結核和呼吸雜志，1995，18（6）：377．

［2］羅征秀，劉恩梅，鄧兵，等．Foxp3表達與CD4+CD25+調節性T細胞在兒童哮喘發病中的作用［J］．中華兒科雜志，2006，44（4）：267-271．

R562.25

B

1674-9316（2014）16-0002-02

10.3969/J.ISSN.1674-9316.2014.16.002