Fascin_1在肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

汪 睿，虞紅珍，王 弦，吳 強(qiáng)

Fascin_1在肺癌中的表達(dá)及其臨床意義

汪 睿1，2，虞紅珍1，王 弦1，吳 強(qiáng)1

目的觀察Fascin_1在人類肺癌及癌旁組織中的表達(dá)及其與肺癌患者臨床病理特征之間的關(guān)系，并研究Fascin _1表達(dá)與肺癌的臨床生物學(xué)行為的關(guān)系。方法采用免疫組化MaxVision兩步法檢測84例肺癌及癌旁組織中Fascin_ 1蛋白的表達(dá)。用Fascin_1在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)作為陽性對照，使用PBS代替一抗作為陰性對照。結(jié)果Fascin _1蛋白在84例肺癌組織及癌旁組織中分別為78例（92.9%）陽性與27例（32.1%）Fascin_1蛋白陽性，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。Fascin_1表達(dá)在不同年齡、臨床分期以及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但是在不同性別、T分期以及病理類型間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度不同的患者的生存時間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而癌旁組織中Fascin_1蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度不同患者的生存時間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)論在肺癌中，F(xiàn)ascin_ 1的表達(dá)同腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，同時癌組織中Fascin_1的不同表達(dá)對患者的生存時間有明顯影響。因此考慮Fascin_1有望成為肺癌潛在生物學(xué)標(biāo)志物。

肺癌；Fascin_1；免疫組織化學(xué)；生存時間

Fascin_1蛋白是一種細(xì)胞骨架蛋白，目前發(fā)現(xiàn)在人類多個上皮性腫瘤中表達(dá)上調(diào)，并且與臨床病理學(xué)和預(yù)后不良相關(guān)。該基因主要是與F-肌動蛋白結(jié)合，并將其組裝成平行排列的肌動蛋白束，是調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動的關(guān)鍵基因之一［1］。該研究采用免疫組化方法MaxVision兩步法檢測人肺癌及癌旁組織中Fascin_1的表達(dá)，分析其與患者臨床病理特征之間的關(guān)系，并研究Fascin_1表達(dá)與肺癌的臨床生物學(xué)行為的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料收集安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科2007年2月～2008年4月病理資料齊全的肺癌手術(shù)石蠟標(biāo)本84例，腫瘤組織切緣周邊經(jīng)病理學(xué)判斷未見癌組織的部分為癌旁組織，作為參考對照。所取標(biāo)本的患者年齡為38～80（60.77±9.44）歲。按WHO（2012年）肺癌中的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分期。TNM分期：Ⅰ期37例、Ⅱ期32例、Ⅲ期15例。2013年3月進(jìn)行生存期隨訪，其中40例患者獲得隨訪，44例失訪。標(biāo)本均使用常規(guī)10%福爾馬林溶液固定，然后石蠟包埋及4 μm厚切片。并采用HE和免疫組化法進(jìn)行染色。

1.2 試劑免疫組化試劑使用免疫組化濃縮型鼠抗人Fascin_1單克隆抗體（SPM133）購自美國Santa Cruz公司；免疫組化檢測試劑盒為即用型快捷免疫組化MaxVision試劑盒和DAB顯色試劑盒均購自福州邁新公司。

1.3 方法免疫組化染色方法參照使用說明書操

作，采用MaxVision兩步法進(jìn)行免疫組化染色，簡要步驟按如下操作：檸檬酸鈉緩沖液高壓抗原修復(fù)，切片中滴加Fascin_1一抗，4℃過夜，去除一抗后滴加二抗，然后試劑盒室溫下孵育20 min，用DAB顯色，蘇木精對比染色。用Fascin_1在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)作為陽性對照，使用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.4 結(jié)果判斷免疫組化以癌及癌旁細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色。免疫組化評定方法參考文獻(xiàn)［2－3］標(biāo)準(zhǔn)。按染色強(qiáng)度記分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；按染色程度記分：無陽性細(xì)胞數(shù)為0分，陽性細(xì)胞數(shù)1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75% 為3分，76%～100%為4分。兩項(xiàng)相加得分（0～7分），≥3分為陽性。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。樣本率的比較使用χ2檢驗(yàn)，生存率用Kaplan-Meier法計(jì)算，生存率的比較使用Log-Rank檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 Fascin_1蛋白在肺癌及癌旁組織中的表達(dá)和分布Fascin_1蛋白在肺癌組織中呈彌漫性分布，癌巢周邊部的癌細(xì)胞染色較強(qiáng)。Fascin_1免疫組化染色主要定位于陽性細(xì)胞胞質(zhì)或胞膜上，呈局灶性或彌漫性黃色顆粒狀。84例肺癌組織中，78例（92.9%）Fascin_1蛋白陽性，見圖1。84例肺癌旁組織中，27例（32.1%）Fascin_1蛋白陽性，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2＝66.06，P＜0.05）。癌旁組織中Fascin_1主要表達(dá)于腺上皮細(xì)胞，呈膜質(zhì)型定位，見圖2。肺癌間質(zhì)中的血管內(nèi)皮細(xì)胞亦可見Fascin_ 1陽性染色。在癌旁組織中，毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞中均呈陽性表達(dá)，而支氣管肺泡上皮細(xì)胞及肺大血管內(nèi)皮細(xì)胞中呈陰性表達(dá)。

圖1 Fascin_1蛋白在肺癌組織中的陽性表達(dá) DAB×400 A：鱗癌；B：腺癌

圖2 Fascin_1蛋白在癌旁組織中的陽性表達(dá) DAB×400 A：支氣管上皮細(xì)胞；B：肺泡上皮細(xì)胞

2.2 肺癌中Fascin_1蛋白的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系為了研究Fascin_1表達(dá)同肺癌臨床病理特征的關(guān)系，將84例患者按照年齡（≤61歲，＞61歲）、性別（男，女）、T分期（T1、T2、T3、T4）、N分期—區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況（N0、N1、N2）、臨床病理類型（腺癌、鱗癌、大細(xì)胞癌、小細(xì)胞癌）以及TNM分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期）進(jìn)行分組，使用χ2檢驗(yàn)方法，比較Fascin_1在不同組之間的表達(dá)差異。結(jié)果表明Fascin_1表達(dá)在不同年齡、臨床分期以及區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但是在不同性別、T分期以及病理類型間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

表1 肺癌中Fascin_1表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系（n）

2.3 肺癌中Fascin_1蛋白陽性表達(dá)與生存時間的關(guān)系40例隨訪患者中，到2013年3月隨訪截止時，病死21例，存活19例，總生存率47.5%，生存時間8～70個月。將Fascin_1蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度與患者生存時間進(jìn)行分析顯示，肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度不同的患者之間中位生存期差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而癌旁組織中Fascin_1蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度不同患者的中位生存期差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），見表2、圖3。多因素Cox回歸分析也顯示肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性表達(dá)強(qiáng)度與患者生存期之間存在關(guān)聯(lián)［風(fēng)險比（HR）＝4.505，95%CI＝1.615～12.569，P＝0.004］。

表2 Fascin_1表達(dá)與中位生存時間之間的關(guān)系

圖3 肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性表達(dá)程度不同的患者之間總生存曲線

3 討論

肺癌發(fā)生轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致肺癌治療失敗、患者死亡的主要原因，因此尋找、研究肺癌轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制或是相關(guān)基因?qū)τ诜伟┑闹委熂邦A(yù)后有著十分重要的臨床意義。

人類Fascin_1基因在1994年被克隆，其染色體定位于7q22，該基因的蛋白質(zhì)編碼產(chǎn)物是分子質(zhì)量為5.5×104ku的細(xì)胞內(nèi)蛋白，其主要作用就是與F-肌動蛋白結(jié)合。Fascin_1蛋白的第39位的絲氨酸是蛋白激酶C的磷酸化位點(diǎn)，磷酸化后的該位點(diǎn)可調(diào)節(jié)Fascin_1蛋白與F－肌動蛋白的結(jié)合活性，抑制Fascin_1肌鈣蛋白的組裝功能并影響到細(xì)胞膜表面?zhèn)巫愫臀⒓男纬桑?］。

有研究［5－6］顯示，F(xiàn)ascin_1蛋白在多種腫瘤，如乳腺癌、鼻咽癌腫瘤細(xì)胞中有著異常高表達(dá)，并且其表達(dá)同腫瘤的轉(zhuǎn)移及侵襲存在密切的相關(guān)性。但是，目前對于Fascin_1在肺癌中表達(dá)研究的報道較少。

本研究觀察了肺癌手術(shù)病理標(biāo)本中Fascin_1表達(dá)，結(jié)果顯示Fascin_1主要定位于肺癌陽性細(xì)胞胞質(zhì)或胞膜上，呈灶性或彌漫性黃色顆粒狀。但是Fascin_1蛋白的表達(dá)與肺癌患者的性別、T分期、腫瘤的病理類型之間無明顯的相關(guān)性。國內(nèi)相關(guān)的報道中于維霞等［7］分析了Fascin_1在51例肺癌中的表達(dá)，其中在肺鱗癌患者中的表達(dá)陽性率為66.7%，而肺腺癌患者中表達(dá)陽性率為43.5%，但是在分化差的肺癌中Fascin_1表達(dá)上調(diào)，而且具有性別差異，其中男性表達(dá)率較高。該結(jié)果與本組研究結(jié)果不一致。

既往高翔等［8］對肺癌的研究結(jié)果中報道肺癌組織表達(dá)的Fascin_1蛋白與正常組織表達(dá)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示Fascin_1蛋白在肺癌組織中與肺癌旁組織中的表達(dá)相比較高。因此考慮高翔等［8］的研究中患者可能發(fā)生了上皮間質(zhì)的轉(zhuǎn)化，具體原因有待于進(jìn)一步研究。另發(fā)現(xiàn)肺癌組織中Fascin_1蛋白陽性患者較陰性患者總生存率及總生存時間下降，提示Fascin_1蛋白的陽性表達(dá)可能預(yù)示著患者的不良預(yù)后及低生存率，這一結(jié)論也與其他學(xué)者的研究［9－11］一致。

國外Pelosi et al［12］研究報道了220例Ⅰ期的非小細(xì)胞肺癌中有關(guān)Fascin_1蛋白的表達(dá)，結(jié)果顯示，98%的肺鱗癌患者為Fascin_1陽性表達(dá)，78%肺腺癌患者為Fascin_1陽性表達(dá)，而在癌栓中普遍表達(dá)。另外在具有對側(cè)惡性胸腔積液或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的腺癌患者中Fascin_1更是呈彌漫性表達(dá)，而對于肺鱗癌患者，癌旁組織同角化珠相比，F(xiàn)ascin_1的免疫反應(yīng)強(qiáng)度較弱，呈弱表達(dá)。從隨訪結(jié)果看，F(xiàn)ascin_1呈彌漫性或強(qiáng)陽性表達(dá)的患者預(yù)后差。該研究首次證明了Fascin_1蛋白在侵襲性的肺癌中表達(dá)上調(diào)，并結(jié)合臨床的角度反映出Fascin_1蛋白作為肺癌患者一個獨(dú)立的預(yù)后因素的可能性。之后，該研究繼續(xù)評估了Fascin_1蛋白在128例經(jīng)手術(shù)切除的肺神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤中的表達(dá)分析以及其與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果顯示，在肺典型類癌和肺非典型類癌當(dāng)中，F(xiàn)ascin_1蛋白的表達(dá)同區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切相關(guān)［13］。本組研究中同樣得出結(jié)果，顯示Fascin_1表達(dá)在區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期不同的患者中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移范圍越廣、臨床分期越晚的患者，標(biāo)本中Fascin_1表達(dá)越高。多因素分析表明，F(xiàn)ascin_1可以作為獨(dú)立的預(yù)測肺癌患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的標(biāo)志物［14］。

因此，根據(jù)本組試驗(yàn)結(jié)合既往相關(guān)研究綜合分析，F(xiàn)ascin_1蛋白對人類肺癌細(xì)胞的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移具有密切相關(guān)性，同時癌組織中Fascin_1的不同表達(dá)對患者的生存時間有明顯影響。因此考慮Fascin_1有望成為肺癌潛在生物學(xué)標(biāo)志物。

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Clinical significance of Fascin_1 expression in lung cancer

Wang Rui1，2，Yu Hongzhen1，Wang Xian1，et al
（1Dept of Pathology，Anhui Medical University，Hefei 230022；2Dept of Oncology，Anhui Chest Hospital，Hefei 230032）

ObjectiveTo observe the relationship of Fascin_1 expression in human lung cancer and para-cancer tissues to clinicopathological characteristics in lung cancer patients，and to investigate the correlations of Fascin_1 expression with the biologic behaviors of lung cancer.MethodsImmunohistochemistry MaxVision method was adopted to detect the protein expression of Fascin_1 in 84 cases of lung cancer and para-cancer tissues.Fascin_1 expression in vascular endothelial cells was used as the positive criteria，while PBS displaced primary antibody as the negative criteria.ResultsThe positive rates of Fascin_1 expression in lung cancer tissues and para-cancer tissues were 92.9%（78／84）and 32.1%（27／84）respectively，with significant difference（P＜0.05）.Fascin_1 expression was correlated with age，clinical stage and regional lymph node metastasis，with significant differnence（P＜0.05）.Whereas it was not correlated with gender，T stage and pathology type，with no statistical difference（P＞0.05）.The overall survival time was significantly different among the different intensities of Fascin_1 expression in lung cancer tissues（P＜0.05），while there was no statistical difference among the different intensities of Fascin_1 expression in para-cancer tissues（P＞0.05）.ConclusionFascin_1 plays an important role in the invasiveness and metastasis of lung cancer.Fascin_1 expression in cancer tissues has an obvious influence on the overall survival time of patients.Fascin_1 might be potential candidate of biological biomarkers for lung cancer.

lung cancer；Fascin_1；immunohistochemistry；survival time

R 73-3

1000－1492（2014）05－0658－04

2014－02－25接收

國家自然科學(xué)基金（編號：81101597、81172533）；安徽高校省級科學(xué)研究（編號：KJ2012z142）；安徽醫(yī)科大學(xué)校基金及追加基金（編號：2012xkj001zj）

1安徽醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室，合肥 230032

2安徽省胸科醫(yī)院腫瘤科，合肥 230022

汪 睿，男，主治醫(yī)師，碩士研究生；

吳 強(qiáng)，男，教授，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：aydjohn ＠yahoo.com