盆架樹中單萜吲哚生物堿成分的分離與結(jié)構(gòu)鑒定

郭 峰，郁建平，張 于，苑春茂，何紅平

1貴州大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，貴陽550025;2中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室，云南昆明650201

盆架樹(Winchia calophylla A．DC．)是夾竹桃科盆架樹屬植物，該屬植物兩種，分布于中國、印度、緬甸和印度尼西亞等地。我國產(chǎn)一種，分布于云南和海南［1］。據(jù)文獻報道，盆架樹中的生物堿以單萜吲哚生物堿為主，另見報道有三萜和單萜及其苷類等［2-4］。單萜吲哚生物堿具有良好的生理活性，例如有抗腫瘤活性的長春堿、具有腦保護作用的長春胺、降壓良藥利血平以及抗抑郁制劑依波加因等［5］。為了尋找結(jié)構(gòu)新穎和活性較好的單萜吲哚生物堿，本研究對采自云南西雙版納的盆架樹小枝的甲醇提取物的氯仿萃取部分的化學(xué)成分進行了初步的研究，通過核磁共振和質(zhì)譜等波譜解析手段以及參考相關(guān)文獻，報道從中分離鑒定的4個單萜吲哚生物堿。

1 材料與儀器

1．1 材料

盆架樹小枝于2012年8月采自云南省西雙版納，經(jīng)中科院西雙版納植物園張順成老師鑒定為夾竹桃科盆架樹屬植物盆架樹(Winchia calophylla)，樣品標本(H20120802)存放于中國科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國家重點實驗室。

1．2 儀器

Bruker AM-400、DRX-500和 Avance III-600核磁共振儀，以 TMS作為內(nèi)標;ESI質(zhì)譜由 Waters 2695HPLC-Thermofinnigan LCQ Advantage離子阱質(zhì)譜儀測定;高效液相為Agilent 1100和1200，色譜柱為Eclipse XDB-C18;Sephadex LH-20為Pharmacia公司的產(chǎn)品;反相填充材料Lichroprep RP-18 gel(20～45μm)為德國默克公司的產(chǎn)品;柱色譜和薄層色譜硅膠均為GF254型青島海洋化工廠的產(chǎn)品。顯色劑為配制好的碘化鉍鉀溶液。

2 提取與分離

盆架樹小枝(13 Kg)粉碎后，經(jīng)甲醇回流提取3次，提取時間分別為4，3，3 h，減壓蒸餾回收甲醇得到浸膏，將浸膏加水稀釋后用鹽酸調(diào)pH值2-3，石油醚和乙酸乙酯分別萃取3次，再用氫氧化鈉調(diào)pH值9-10，氯仿萃取3次，得總堿約200 g。總堿部分(200 g)經(jīng)硅膠柱層析、反相RP-18柱層析、Sephadex LH-20以及HPLC等各種分離純化手段得到化合物 1(29．6 mg)，2(4．6 mg)，3(23．4 mg)和 4(26.5 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1 淡黃色油狀液體，分子式為C20H24N2O3;ESI+-MS m/z341［M+H］+;1H NMR(400 MHz，CDCl3)δ(ppm):8.61(1H，br s，NH)，7.16(1H，d，J=7.4 Hz，H-9)，7.12(1H，td，J=7.4，1.0 Hz，H-11)，6.90(1H，t，J=7.4 Hz，H-10)，6.82(1H，br d，J=7.4 Hz，H-12)，3.86(1H，s，H-3)，3.85(3H，s，OMe)，3.29(1H，d，J=2.0 Hz，H-15)，3.24(1H，dq，J=9.2，6.2 Hz，H-19)，3.05(1H，m，H-5a)，2.78 ～2.89(3H，m，H-5b，6a，21a)，2.00(1H，dt，J=13.0，2.6 Hz，H-14a)，1.90(1H，br t，J=12.6 Hz，H-21b)，1.81(1H，m，H-6b)，1.73(1H，m，H-20)，1.38(1H，dt，J=13.0，2.6 Hz，H-14b)，1.13(3H，d，J=6.2 Hz，H-18)。13C NMR(100 MHz，CDCl3)δ(ppm):172.3(C-17)，168.9(C-2)，143.7(C-13)，135.6(C-8)，127.6(C-11)，121.4(C-9)，119.8(C-10)，109.6(C-12)，96.8(C-16)，68.4(C-19)，60.9(C-3)，57.1(C-7)，54.1(C-5)，51.9(OMe-17)，48.1(C-21)，45.8(C-20)，43.5(C-6)，31.0(C-14)，28.8(C-15)，19.8(C-18)，以上數(shù)據(jù)與文獻［6-7］的波譜數(shù)據(jù)基本一致，可鑒定化合物1為echitamidine。

化合物2 淡黃色固體，分子式為C23H28N2O5;ESI+-MS m/z413［M+H］+;1H NMR(600 MHz，CDCl3)δ(ppm):7.66(1H，d，J=7.6 Hz，H-9)，7.02(1H，t，J=7.6 Hz，H-11)，6.73(1H，t，J=7.6 Hz，H-10)，6.53(1H，d，J=7.6 Hz，H-12)，5.57(1H，q，J=6.9 Hz，H-19)，4.77(1H，d，J=12.3 Hz，H-17a)，4.58(1H，d，J=15.5 Hz，H-21a)，4.38(1H，dd，J=10.1，4.9 Hz，H-3)，3.83(1H，d，J=5.4 Hz，H-15)，3.78(3H，s，OMe)，3.61(1H，d，J=12.3 Hz，H-17b)，3.39(1H，m，H-5a)，3.27(1H，d，J=15.5 Hz，H-21b)，3.00(1H，dd，J=11.5，8.3 Hz，H-5b)，2.50(1H，ddd，J=15.6，10.1，5.4 Hz，H-14a)，2.36(1H，dt，J=13.8，8.3 Hz，H-6a)，2.13(1H，dt，J=13.8，8.3 Hz，H-6b)，2.03(3H，s，OAc-Me)，1.79(3H，dd，J=6.9，1.5 Hz，H-18)，1.69(1H，dd，J=15.6，4.9 Hz，H-14b)。13C NMR(150 MHz，CDCl3)δ(ppm):172.9(C-22)，170.3(OAc-17)，148.0(C-13)，134.3(C-20)，129.8(C-8)，129.5(C-11)，128.0(C-9)，126.9(C-19)，120.0(C-10)，111.2(C-12)，97.6(C-2)，67.7(C-3)，66.7(C-17)，60.1(C-7)，56.4(C-21)，54.0(C-16)，53.0(C-5)，52.5(COOMe-22)，44.7(C-6)，36.2(C-15)，31.6(C-14)，21.0(OAc-17)，15.2(C-18)，以上數(shù)據(jù)與文獻［7-8］的波譜數(shù)據(jù)基本一致，可鑒定化合物2為17-O-acetyl-Nb-demethylechitamine。

化合物3 白色針狀晶體，分子式為C21H26N2O4;ESI+-MS m/z371［M+H］+;1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ(ppm):7.69(1H，d，J=7.8 Hz，H-9)，6.95(1H，t，J=7.8 Hz，H-11)，6.61(1H，t，J=7.8 Hz，H-10)，6.48(1H，d，J=7.8 Hz，H-12)，5.41(1H，q，J=6.9 Hz，H-19)，4.19 ～ 4.26(2H，m，H-3，21a)，4.10(1H，d，J=11.8 Hz，H-17a)，3.85(1H，d，J=5.0 Hz，H-15)，3.77(3H，s，OCH3)，3.30(1H，d，J=11.8 Hz，H-17b)，2.98(1H，d，J=16.0 Hz，H-21b)，2.73(1H，dd，J=11.8，8.4 Hz，H-5a)，2.58(1H，ddd，J=15.2，11.0，5.0 Hz，H-14a)，2.09(1H，m，H-6a)，1.92(1H，dd，J=13.3，7.8 Hz，H-6b)，1.78(3H，dd，J=6.9，1.8 Hz，H-18)，1.51(1H，dd，J=15.2，5.0 Hz，H-14b)。13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ(ppm):176.2(C-22)，150.6(C-13)，141.0(C-20)，132.4(C-8)，129.1(C-9)，128.5(C-11)，123.9(C-19)，119.0(C-10)，110.4(C-12)，96.3(C-2)，70.0(C-3)，67.1(C-17)，62.4(C-16)，58.2(C-21)，57.8(C-7)，55.0(C-5)，52.0(OCH3-22)，47.6(C-6)，36.4(C-15)，33.6(C-14)，15.3(C-18)，以上數(shù)據(jù)與文獻［9］的波譜數(shù)據(jù)基本一致，可鑒定化合物3為Nb-demethylechitamine。

化合物4 白色針狀晶體，分子式為C21H26N2O5;ESI+-MS m/z387［M+H］+;1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ(ppm):7.72(1H，d，J=7.2 Hz，H-9)，7.07(1H，t，J=7.2 Hz，H-11)，6.71(1H，t，J=7.2 Hz，H-10)，6.70(1H，d，J=7.2 Hz，H-12)，5.79(1H，q，J=6.9 Hz，H-19)，4.76(1H，d，J=15.0 Hz，H-21a)，4.51(1H，dd，J=11.0，5.5 Hz，H-3)，4.13(1H，d，J=15.0 Hz，H-21b)，4.04(1H，d，J=4.6 Hz，H-15)，3.95(1H，d，J=11.9 Hz，H-17a)，3.82(3H，s，OCH3)，3.40(1H，dd，J=12.4，8.0 Hz，H-5a)，3.26(3H，d，J=11.9 Hz，H-17b)，2.72(1H，ddd，J=15.2，11.0，5.5 Hz，H-14a)，2.31(1H，dt，J=14.2，8.0Hz，H-6a)，2.04(1H，dd，J=14.2，8.0 Hz，H-6b)，1.85(3H，dd，J=6.9，2.0 Hz，H-18)，1.71(1H，dd，J=15.2，4.6 Hz，H-14b)。13C NMR(100 MHz，CD3OD)δ(ppm):174.8(C-22)，149.3(C-13)，134.0(C-8)，131.4(C-20)，130.1(C-11)，129.4(C-9)，127.9(C-19)，120.1(C-10)，110.7(C-12)，99.7(C-2)，74.4(C-21)，71.5(C-3)，67.1(C-5)，66.6(C-17)，59.6(C-16)，56.9(C-7)，52.4(OCH3-22)，41.3(C-6)，36.6(C-15)，33.1(C-14)，15.3(C-18)，以上數(shù)據(jù)與文獻［9］的波譜數(shù)據(jù)基本一致，可鑒定化合物4為Nb-demethylechitamine N-oxide。

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