蒙藥漏蘆花中黃酮類化合物的研究

吳吉英，白玉霞，斯日棍其其格

內蒙古民族大學蒙醫藥學院，通遼 028300

蒙藥漏蘆花，蒙藥名為洪古日朱勒，為菊科植物祁州漏蘆Rhaponticum uniflorum (L.)DC.的干燥頭狀花序。在蒙醫臨床中有較長的使用歷史，具有殺“粘”，止刺痛，清熱，解毒，解表等功能;用于腸刺痛，瘟熱，發癥，結喉，麻疹，毒熱，心熱，血熱，熾熱，新陳熱，傷熱等病癥［1］。洪古日朱勒主要分布在東北，華北地區及朝鮮，俄羅斯，蒙古國等地［2］，生于草甸、山石縫間，細筋狀的根多分枝，葉片有似瑪瑙鋸齒，鋪撲在地上，花小，無氣味，味苦，堅硬，莖中空具縱棱［3］。采集于夏季初除去總苞皮并儲藏陰涼干燥處［4］。目前國內外專家和學者對漏蘆花化學成分研究報道［5-10］較少，初步確認其中含有黃酮、揮發油、植物甾醇、萜類、單糖等成分。為進一步探明漏蘆花藥效物質基礎，本實驗對其黃酮類化合物進行了研究，分離并鑒定了10個化合物，它們分別為:5，7，3'-三羥基-6，4'-二甲氧基黃酮(1)、5，7，3'-三羥基-4'-甲氧基黃酮(2)、芹菜素(3)、木犀草素(4)、槲皮素(5)、木犀草素-7-O-α-D -葡萄糖苷(6)、槲皮素-3-O-α-D -鼠李糖苷(7)、芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸甲酯苷(8)、蘆丁(9)、芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸苷(10)。

1 儀器與材料

核磁共振譜采用Bruker ARX-600 型核磁共振譜儀測定(德國Bruker 公司)。半制備高效液相色譜儀(LC6-AD 輸液泵，SPD-10Avp 檢測器，SCL-10Avp 工作站)。大孔樹脂(天津市光復精細化工研究所)。氘代試劑為Cambridge Isotope Laboratories，InC。柱色譜試劑均為分析純。

漏蘆花采集于內蒙古錫林郭勒烏珠穆沁旗，由內蒙古民族大學蒙醫藥學院蒙藥生藥學教研室主任布和巴特爾教授鑒定為菊科植物祁州漏蘆Rhaponticum uniflorum (L.)DC.的干燥頭狀花序。漏蘆花Rhaponticum uniflorum (L.)DC.標本保存于內蒙古民族大學蒙醫藥學院蒙藥化學教研室。

2 提取分離

漏蘆花1.4 kg，用80%乙醇31.5 L 回流提取三次，每次3 h，合并提取液，減壓回收乙醇，得總提取物約163.5 g。提取物加水適量，攪拌成混懸液，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取部分26 g，加水溶解，轉移置1000 mL 容量瓶，再用水至刻度，混勻，即得上柱樣品溶液。將處理好的D101樹脂200 g，裝柱，吸取上柱樣品溶液，上柱，以2 mL/min 的流速進行吸附，先用水洗至流出液不顯molish 反應，依次用20%、40%、60%、80%乙醇溶液各2000 mL 洗脫，洗脫液編號為流份A-D，減壓回收至干，分別得到流份A 為3.50 g、流份B為7.82 g、流份C 為8.88 g 和流份D 為2.01 g。流份D500 mg，加色譜甲醇50 mL 溶解，溶液過濾，經反相制備HPLC，甲醇-水(45∶55)洗脫，得化合物1(13 mg)、化合物2(22 mg)和化合物3(16 mg)化合物4(18 mg);流份C 200 mg，加色譜甲醇20 mL 溶解，溶液過濾，經反相制備HPLC，甲醇-水(39∶61)洗脫，得化合物5(35 mg)和化合物10(42 mg);流份B 500 mg，加色譜甲醇50 mL 溶解，溶液過濾，經反相制備HPLC，甲醇-水(31∶69)洗脫，得化合物6(21 mg)、化合物7(16 mg)和化合物8(27 mg)化合物9(12 mg);

3 結構鑒定

化合物1 黃色結晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應陽性，推測為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.52 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.91 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.49 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.51 (1H，s，H-8)，6.93(1H，s，H-3)，13.01 (1H，s，5-OH)，3.89 (3H，s，-OCH3)，3.74 (3H，s，-OCH3)。13C NMR(DMSO-d6)δ:164.5 (C-2)，103.7 (C-3)，180.8 (C-4)，152.4(C-5)，130.8 (C-6)，156.2 (C-7)，91.8 (C-8)，153.6 (C-9)，101.9 (C-10)，121.3 (C-1')，112.3(C-2')，146.3 (C-3')，148.8 (C-4')，115.9 (C-5')，119.8(C-6')。據以上數據并與文獻［11］對照，鑒定該化合物為5，7，3'-三羥基-6'，4'-二甲氧基黃酮。

化合物2 黃色結晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應陽性，推測為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.51 (1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6')，6.95 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，7.50 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.47 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.21 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.87 (1H，s，H-3)，13.04 (1H，s，5-OH)，3.86 (3H，s，-OCH3)。13C NMR(DMSO-d6)δ:163.6 (C-2)，104.0 (C-3)，180.9 (C-4)，155.4 (C-5)，98.8 (C-6)，164.2 (C-7)，93.8 (C-8)，161.6 (C-9)，102.8 (C-10)，119.8(C-1')，112.9 (C-2')，146.5 (C-3')，150.6 (C-4')，111.9 (C-5')，121.5(C-6')。據以上數據并與文獻［11］對照，鑒定該化合物為5，7，3'-三羥基-4'-甲氧基黃酮。

化合物3 黃色結晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應陽性，推測為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.91 (2H，d，J=7.2 Hz，H-2'，6')，6.91 (2H，d，J=7.2 Hz，H-3'，5')，6.49 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.18 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.88 (1H，s，H-3)，12.95 (1H，s，5-OH)，10.65(2H，s，7，4'-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:157.4 (C-2)，103.7 (C-3)，181.8 (C-4)，163.8 (C-5)，98.9(C-6)，164.2 (C-7)，94.0 (C-8)，161.2 (C-9)，102.9 (C-10)，121.2 (C-1')，128.5 (C-2')，116.0(C-3')，161.3 (C-4')，116.0 (C-5')，128.5(C-6')。據以上數據并與文獻［12］對照，鑒定該化合物為芹菜素。

化合物4 黃色結晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應陽性，推測為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.38 (1H，dd，J=7.8，1.8 Hz，H-6')，6.91 (1H，d，J=7.8 Hz，H-5')，7.43 (1H，d，J=1.8 Hz，H-2')，6.48 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.20 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，6.63 (1H，s，H-3)，12.24 (1H，s，5-OH)，10.20 (1H，s，7-OH)，9.65 (2H，s，3'，4'-OH)。據以上數據并與文獻［12］對照，鑒定該化合物為木犀草素。

化合物5 黃色結晶(甲醇)，紫外光下顯黃色熒光，鹽酸-鎂粉反應陽性，推測為黃酮類化合物。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.51 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.79 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.61 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.28 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.07 (1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，12.29 (1H，s，5-OH)。據以上數據并與文獻［12］對照，鑒定該化合物為木犀草素。

化合物6 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應為陽性，Molish 反應為陽性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.47 (1H，dd，J=8.4，2.4 Hz，H-6')，6.89 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.43 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.75 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)，6.41 (1H，d，J=2.4 Hz，H-6)，6.89(1H，s，H-3)，12.98 (1H，s，5-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:164.1 (C-2)，103.1 (C-3)，182.3 (C-4)，163.5 (C-5)，99.4 (C-6)，161.2 (C-7)，94.5 (C-8)，157.6 (C-9)，103.5 (C-10)，121.7 (C-1')，111.7 (C-2')，145.7 (C-3')，150.4 (C-4')，116.1(C-5')，117.6 (C-6')。糖的碳信號δ:98.1 (C-1″)，72.0 (C-2″)，73.7 (C-3″)，70.4 (C-4″)，71.9(C-5″)及60.9 (C-6″)，提示該糖是葡萄糖，并且在1H NMR 譜中給出了端基質子信號δ 5.21 (1H，d，J=3.6 Hz)，顯示為α 糖苷鍵。在NOESY 譜中端基質子信號δ 5.21 (1H，d，J=4.2 Hz)與δ 6.41(1H，d，J=2.4 Hz，H-6)和6.75 (1H，d，J=2.4 Hz，H-8)相關，說明葡萄糖連接在木犀草素的7(位。將核磁數據進行歸屬后與文獻［13］對照基本一致，鑒定為木犀草素-7-O-α-D-葡萄糖苷。

化合物7 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應為陽性，Molish 反應為陽性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.28 (1H，dd，J=8.4，1.8 Hz，H-6')，6.99 (1H，d，J=8.4 Hz，H-5')，7.33 (1H，d，J=2.4 Hz，H-2')，6.41 (1H，d，J=1.8 Hz，H-8)，6.22 (1H，d，J=1.8 Hz，H-6)，12.70 (1H，s，5-OH)。13C NMR(DMSO-d6)δ:157.4(C-2)，134.3 (C-3)，177.8 (C-4)，161.4 (C-5)，98.9 (C-6)，164.5 (C-7)，93.8 (C-8)，156.6 (C-9)，104.2 (C-10)，120.8 (C-1')，115.8 (C-2')，145.3 (C-3')，148.6 (C-4')，115.6 (C-5')，121.2 (C-6')。糖的碳信號δ:101.9 (C-1″)，70.7 (C-2″)，70.5 (C-3″)，71.3 (C-4″)，70.1 (C-5″)及17.6 (C-6″)，提示該糖是吡喃鼠李糖，并且在1H NMR 譜中給出了端基質子信號δ 5.28 (1H，d，J=2.4 Hz)，顯示為α 糖苷鍵。在HMBC 譜中端基質子信號δ 5.28 (1H，d，J=2.4 Hz)與δ 134.3 (C-3)相關，說明吡喃鼠李糖連接在槲皮素的3 位。根據該化合物核磁數據分析鑒定為槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷。

化合物8 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應為陽性，Molish 反應為陽性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.94 (2H，d，J=7.8 Hz，H-2'，6')，6.93 (2H，d，J=7.8 Hz，H-3'，5')，6.85 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.46 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.85 (1H，s，H-3)，12.65 (1H，s，5-OH)，10.48 (1H，s，4'-OH)，5.30 (1H，d，J=3.6 Hz，端基質子信號)。13C NMR(DMSO-d6)δ:161.4(C-2)，103.2 (C-3)，182.1 (C-4)，161.3 (C-5)，99.3 (C-6)，162.5 (C-7)，94.7 (C-8)，157.0 (C-9)，105.6 (C-10)，126.1 (C-1')，128.7 (C-2')，116.1 (C-3')，164.1 (C-4')，116.1 (C-5')，128.7 (C-6')。糖的碳信號δ:99.1 (C-1″)，75.5 (C-2″)，75.2 (C-3″)，75.1 (C-4″)，72.1 (C-5″)，169.2 (C-6″)，52.1 (-CH3)。在HMBC 譜中，δ 3.71 (3H，s)與169 (C-6″)相關，提示該糖是葡萄糖醛酸甲酯，并且在1H NMR 譜中給出了端基質子信號δ 5.30(1H，d，J=3.6 Hz)，顯示為α 糖苷鍵。在HMBC譜中端基質子信號δ 5.30 (1H，d，J=3.6 Hz)與δ162.5 (C-7)相關，說明葡萄糖醛酸甲酯連接在芹菜素的7 位。根據該化合物核磁數據分析鑒定為芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸甲酯苷。

化合物9 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應為陽性，Molish 反應為陽性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:12.65 (1H，s，5-OH)，10.27 (1H，s，7-OH)，5.37 (1H，brs 葡萄糖的端基氫)，5.15 (1H，brs 鼠李糖的端基氫)，6.20 (1H，s，H-6)，6.41 (1H，s，H-8)，6.88 (1H，brs，H-5')，7.54(2H，brs，H-6'，2')。13C NMR(300MHz DMSO-d6)δ:157.7 (C-2)，134.1 (C-3)，177.5 (C-4)，161.3 (C-5)，99.1 (C-6)，161.8 (C-7)，94.2 (C-8)，156.7(C-9)，104.7 (C-10)，121.6 (C-1')，115.8 (C-2')，145.8 (C-3')，149.4 (C-4')，116.5 (C-5')，121.1(C-6')。以上數據與文獻［14］報道一致，且與蘆丁對照品共TLC 鑒別，Rf值相同，故確定該化合物為蘆丁。

化合物10 黃色粉末(甲醇)，鹽酸-鎂粉反應為陽性，Molish 反應為陽性，提示該化合物為一黃酮苷。1H NMR(DMSO-d6)δ:7.93 (2H，d，J=7.8 Hz，H-2'，6')，6.91 (2H，d，J=7.8 Hz，H-3'，5')，6.85 (1H，d，J=1.2 Hz，H-8)，6.45 (1H，d，J=1.2 Hz，H-6)，6.83 (1H，s，H-3)，12.60 (1H，s，5-OH)，10.41 (1H，s，4'-OH)，5.27 (1H，d，J=3.6 Hz，端基質子信號)。13C NMR(DMSO-d6)δ:161.2(C-2)，103.3 (C-3)，181.8 (C-4)，161.1 (C-5)，99.3 (C-6)，162.3 (C-7)，94.5 (C-8)，157.2 (C-9)，105.3 (C-10)，126.0 (C-1')，127.5 (C-2')，116.3 (C-3')，163.9 (C-4')，116.3 (C-5')，127.5 (C-6')。糖的碳信號δ:99.7 (C-1″)，75.1 (C-2″)，74.9 (C-3″)，74.5 (C-4″)，72.0 (C-5″)，171.0 (C-6″)。化合物10 的1H NMR 和13C NMR 與化合物8基本一致，不同點是化合物10 中沒有甲基(δ52.1)的碳信號，并且在1H NMR 譜中給出了端基質子信號δ 5.27 (1H，d，J=3.6 Hz)，顯示為α 糖苷鍵。在HMBC 譜中端基質子信號δ 5.27 (1H，d，J=3.6 Hz)與δ162.3 (C-7)相關，說明葡萄糖醛酸連接在芹菜素的7 位。根據該化合物核磁數據分析鑒定為芹菜素-7-O-α-D-葡萄糖醛酸苷。

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