酶法乳糜定性試驗的快速檢測與臨床應用

朱學濤

(連云港市第一人民醫院檢驗科，江蘇連云港222002)

酶法乳糜定性試驗的快速檢測與臨床應用

朱學濤

(連云港市第一人民醫院檢驗科，江蘇連云港222002)

目的用酶法實現乳糜定性試驗的快速檢測和臨床應用。方法以尿液、胸腔積液及腹腔積液作為標本，用臨床生化酶法測三酰甘油，和樣品在濾紙片上化學反應，并與陰性空白進行對照比較判別結果。同時用傳統的乙醚抽提后經蘇丹Ⅲ染色法進行乳糜定性試驗。結果乳糜試驗陽性標本在白色濾紙片上呈現出紅色，與陰性空白比較判斷對比結果。32例胸腔積液及22例腹腔積液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗陰陽性結果完全一致；624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結果選用Kappa一致度系數κ評價，κ=0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結果間具有很高的一致性。結論酶法乳糜定性試驗與傳統的乙醚抽提后經蘇丹Ⅲ染色法進行乳糜定性試驗結果間具有很高的一致性，并且具有快速簡便、特異性強等優點，適用于臨床上的尿液、胸腔積液及腹腔積液等樣本的檢測，便于在社區基層醫院和診所開展應用。

酶法；乳糜定性試驗；乙醚；三酰甘油

乳糜液是經腸道吸收的脂肪皂化后形成，是乳糜微粒與蛋白質混合而成的乳化狀態的渾濁液體，臨床上由于各種原因致淋巴引流不暢而未能進入血液循環，以至逆流至泌尿系淋巴管中時，可致淋巴管內壓力升高，曲張破裂，乳糜液流入尿中使尿液形成不同程度的乳白色。另外我國的肝硬化發病率較高，臨床上由于肝硬化合并的腹水多為單純漏出液，乳糜腹水僅占0.5%～1.3%[1]，如何快速準確地從大量的樣本中檢測出乳糜陽性的樣本，這就成為一個很現實的問題。淋巴管核素顯像用于乳糜性胸腹水、乳糜性尿液定性診斷的價值雖然很大，但成本高，副作用大是其弊端。傳統的乙醚抽提后經蘇丹Ⅲ染色法進行乳糜定性試驗過程乙醚易污染環境，整個試驗操作繁瑣，樣本從送檢到回報結果往往需要較長時間。為了滿足臨床的需要，使乳糜定性試驗操作更簡便，結果更準確，作者根據現在臨床生化酶法測三酰甘油(TG)特異性強，樣本用量少，試劑易得等優點，建立了酶法乳糜尿定性試驗的快速檢測的方法，在臨床上取得了滿意效果。

1 材料與方法

1.1 標本來源收集3年來本院住院及門診的新鮮標本678例，包括尿液624例，胸腔積液32例，腹腔積液22例。

1.2 實驗材料TG檢測試劑盒(酶法)為寧波美康生物科技有限公司提供。濾紙片可用裁剪普通濾紙在玻片上使用。

1.3 方法TG測定參考中華醫學會檢驗分會建議的常規方法[2]及TG測定的標準化程序進行檢測[3]，檢測過程中所用濾紙和玻片應防止甘油或氧化還原物質的污染，不能有油污。恒溫水浴箱溫度控制在37℃，10min后從水浴箱內取出觀察結果,1h后不可進行結果的判讀。TG檢測試劑盒在有效期內使用，注意及時更換。具體操作：首先將兩片濾紙片分開放在清潔干燥的玻片上，滴加3～5滴(150～250μl)三酰甘油試劑R1于濾紙片上，之后滴加兩滴(100μl)尿液，30s后滴加三酰甘油R2兩滴(100μl)，同時使用蒸餾水做陰性空白對照，37℃水浴箱內取出10min后觀察結果，觀察濾紙片是否變為紅色，紅色為陽性。傳統的乙醚抽提乳糜尿定性試驗按照全國臨床檢驗操作規程操作[4]，取待測樣本5～10ml，加乙醚2～3ml，充分混合振搖后，使脂肪溶于乙醚，靜置數分鐘后，2000r/min離心5min，吸取乙醚與尿液交界層涂片，加蘇丹Ⅲ溶液染色，鏡檢觀察是否有橘紅色脂肪球。結果報告“陰性”或“陽性”。

2 結果

32例胸腔積液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗6例均為陽性，26例均為陰性；22例腹腔積液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗2例均為陽性，20例均為陰性；尿液624例，酶法乳糜定性試驗122例陽性，乙醚抽提染色乳糜定性試驗120例陽性，結果詳見表1。624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結果選用Kappa一致度系數κ評價，κ=0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結果間具有很高的一致性。

表1 624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結果

3 討論

傳統的乳糜定性試驗操作繁瑣，脂肪抽提不易控制，特別是在測定脂肪含量較低的樣本時，若抽提不徹底，蘇丹Ⅲ染色后鏡檢很容易導致假陰性；而檢測過程中所用容器受到其他油類污染時，可導致假陽性。32例胸腔積液及22例腹腔積液，酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗陰陽性結果完全一致；624例尿液酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結果選用Kappa一致度系數κ評價，κ= 0.9953，表明酶法和乙醚抽提染色乳糜定性試驗結果間具有很高的一致性。624例尿液樣本酶法乳糜定性試驗122例陽性，乙醚抽提染色乳糜定性試驗120例陽性，其中的2例主要由于輸液等原因造成尿液稀釋使尿液中脂肪含量降低，導致未能檢測出。酶法檢測TG特異性強，靈敏度高，對TG以外的其他油類雜質不發生反應，試劑易得，所用濾紙應防止甘油或氧化還原物質的污染，水浴箱內取出后應立即觀察結果，生成的紅色醌亞胺類化合物在數小時后才可被還原。酶法乳糜定性試驗的快速檢測方法解決了在生化反應試管中觀察不明顯，并且使用試劑量大等問題，陽性樣本在白色濾紙片上呈現生成的紅色醌亞胺類化合物，色差明顯，結果易于判別。

由于醫學模式和人們對健康理念的改變，自我保護意識的增強，人們對醫療、保健意識的了解及關心程度不斷提高，需要經常了解身體及疾病進展情況，這些需求促使臨床檢驗儀器、試劑向攜帶便捷，操作方便，結果即時的方向發展，實驗技術向小型化、簡單化、“床邊”化發展[5]。POCT在臨床上的大量應用，是當今醫院在病人護理和成本管理方面的一種富有成效的方法，在各臨床科室和中心實驗室得到廣泛的應用[6]。該方法為乳糜定性快速檢測提供一種手段，還為床旁檢驗(POCT)的發展提供參考，被測成分直接與載體上的試劑進行呈色反應，實現即時即地檢驗，甚至自我檢驗。

文獻報道制備不同乳糜指數標準管快速進行血漿乳糜程度的判定[7]。定量檢測腹水只有TG＞1.25mmol/L時才能診斷為乳糜性腹水[8]。那么酶法乳糜定性試驗的快速檢測，可以根據濾紙片顏色的深淺判斷TG的含量，TG含量又能反映乳糜微粒的多少，從而粗略判定疾病損傷程度。根據酶法檢測不同的濃度TG呈現顏色深淺不同，制作成顏色深淺不一的色卡對照標準條，并在顏色深淺不一的色卡標注TG的濃度，這樣就可以實現乳糜試驗的定量，尚有待進一步研究。

酶法乳糜定性試驗檢測方法快速簡便，高效率低成本，特異性強，試劑易得，樣本用量少等優點，適用于臨床上的尿液、胸腔積液及腹腔積液等樣本的檢測，便于在社區基層醫院和診所開展應用。

[1]王海濱,葉玲英,陳岳祥,等.肝硬化乳糜性腹水治療[J].中華消化雜志,2008,28(2):431-432.

[2]鄢盛愷.關于臨床血脂測定的建議[J].中華檢驗醫學雜志,2003,26 (3):182-184.

[3]鄢盛愷.應更加關注三酰甘油的臨床檢測與應用[J].現代檢驗醫學雜志,2011,26(3):1-4.

[4]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2006：286.

[5]叢玉隆,朱士俊.檢驗醫學面臨的挑戰與學科建設和管理[J].中華檢驗醫學雜志,2002,25(2):116-118.

[6]萬本愿,姜青龍.POCT的臨床應用及存在問題[J].實驗與檢驗醫學,2011,29(4):387-390.

[7]詹泰然,周淑琴.血液成分制備時血漿乳糜程度判定[J].實驗與檢驗醫學,2008,26(1):67.

[8]徐凱峰,胡曉文,田欣倫,等.乳糜性胸腔積液123例臨床分析[J].中華醫學雜志,2011,91(7):466-468.

R446.12+2,R446.19

A

1674-1129(2014)05-0538-02

10.3969/j.issn.1674-1129.2014.05.017

2014-06-17；

2014-07-14)

朱學濤，男，1976年生，本科學歷，主管檢驗師，學士學位，主要從事臨床檢驗，研究方向為血液體液學實驗診斷。