不同濃度乙醇對活體家兔腹腔神經叢毀損的組織學觀察

目的以不同濃度乙醇對活體家兔進行腹腔神經叢阻滯毀損，并進行組織病理學觀察，為臨床治療提供實驗依據。方法成年新西蘭大白兔48只，按隨機化原則分為手術對照組、50%乙醇組、75%乙醇組和100%乙醇組，各12只。手術對照組給予生理鹽水，乙醇各濃度組任選6只共18只在給藥1周后活檢，其余18只在給藥3個月后活檢。摘取實驗側腹腔神經節和腹腔神經叢標本，采用Thionine硫堇染色法顯示尼氏體，HPIAS-1000病理圖文報告系統對尼氏體定量檢測平均光密度值。結果1周后，對照組神經節中細胞清晰可見，核大而圓。50%乙醇組，少量神經元核仁消失，少量髓鞘消失。75%乙醇組和100%乙醇組大部分神經元核仁消失，而胞質內尼氏小體變細，髓鞘大部分消失。3個月后，不同濃度乙醇組神經節鏡下觀結果與1周相似。圖像分析顯示，與手術對照組比較，乙醇組尼氏體染色平均光密度明顯降低（P＜0.01）；與50%乙醇組比較，75%乙醇組、100%乙醇組1周和3個月尼氏體平均光密度值均明顯下降（P＜0.05）；75%乙醇組與100%乙醇組間差異無統計學意義（P＞0.05）。各濃度乙醇組1周與3個月比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。結論50%、75%和100%乙醇對兔腹腔神經叢均有不同程度的變性作用，75%乙醇是更為適宜的濃度。

家兔；乙醇；腹腔神經叢；毀損；組織學觀察

經皮腹腔神經叢乙醇阻滯（neurolytie celiacplexus block with alcohol，NCPBA）對減輕或消除上腹部疼痛的有效性已被很多國內、外學者所證實，近期療效顯著，但中遠期療效卻不盡相同，對阻滯所用的乙醇濃度也有不同的看法[1-2]。本研究將活體家兔以不同濃度乙醇進行腹腔神經叢阻滯毀損，并進行組織病理學觀察，為臨床治療提供實驗依據。

1 實驗材料

1.1動 物 6月齡健康成年雄性新西蘭大白兔48只，體質量2.0～2.5kg，由浙江中醫藥大學動物實驗中心提供，動物合格證號：SXCK（浙）2009-0042。

1.2實驗藥品 無水乙醇由沈陽試劑一廠提供，75%乙醇和50%乙醇在每次使用前由無水乙醇加無菌蒸餾水后，用乙醇計精確測定其濃度。

2 實驗方法

2.1分 組 隨機分為手術對照組、50%乙醇組、75%乙醇組和100%乙醇組，各12只，其中乙醇治療后各組任選6只共18只在注藥后1周活檢，另各組共18只在注藥后3個月活檢。

2.2造 模 氯胺酮靜脈麻醉后，仰臥位固定于手術臺上，腹部脫毛、消毒，沿腹部行正中切口，逐層暴露直至腹膜后，找到腹腔神經叢（腹主動脈腹腔干分叉處），固定硬膜外導管開口于腹腔神經叢中心，用小兒連續硬膜外穿刺針明視下經背部將硬膜外導管引出，逐層縫合腹壁。手術完畢，兔清醒后籠養，青霉素40萬U，1次/12h，肌肉注射。待傷口Ⅰ期愈合后，視造模成功，各乙醇組按1.8mL/kg注入乙醇（注入乙醇根據人體腹腔神經叢酒精毀損劑量一般為0.5～0.6mL/kg，人和兔等效劑量換算系數1:3，活體兔腹腔神經叢酒精毀損劑量定為1.8mL/kg），注藥后1周和3個月。按上述程序剖腹，取出實驗側腹腔神經節和腹腔神經叢標本。對照組接受生理鹽水，按同樣方法取出標本。

2.3標本制備 常規脫水、透明、浸蠟、包埋及切片（厚約8～10μm）。

2.4尼氏小體顯示 采用Thionine硫堇染色法。每組切片10張，按下列程序進行染色：蒸餾水洗、用2%硫堇水溶液置于50～60℃溫箱內浸染30～60min、蒸餾水稍洗、用95%乙醇液迅速分化、無水乙醇脫水、二甲苯透明、中性樹膠封片,光學顯微鏡觀察結果顯示尼氏小體呈深藍色塊狀或顆粒狀，細胞核呈淡藍色。

2.5圖像分析 采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理圖文報告系統對尼氏體染色結果進行定量檢測，放大400倍，檢測正常手術對照組、不同濃度乙醇組在單位視野中尼氏小體染色的平均光密度，每例標本取3張切片，每張切片隨機選取5個倍鏡視野（× 400），測定每個視野下尼氏體染色平均光密度。以每例標本15個視野的平均光密度的平均值作為該例的測量值。

2.6統計學方法 應用SPSS12.0軟件，采用t檢驗以P＜0.05為差異有統計學意義。

3 實驗結果

光鏡觀察，1周后，對照組神經節中的細胞清晰可見，核大而圓。核仁明顯，胞質中可見粗大尼氏小體，有髓神經纖維清晰可見（插頁圖1）。乙醇組神經節中部分或大部分細胞皺縮，細胞核縮小，染色加深，偏位，同時有較大空泡形成。50%乙醇組見小量神經元的核仁消失，小量髓鞘消失。75%乙醇組、100%乙醇組大部分神經元核仁消失，而胞質內尼氏小體變細，髓鞘大部分消失（插頁圖2～4）。3個月后，三組不同濃度乙醇組神經節鏡下觀與1周相似（插頁圖5～7）。

圖像分析結果顯示，與手術對照組比較，乙醇組尼氏體染色平均光密度明顯降低，差異有統計學意義（P＜0.01）；與50%乙醇組比較，75%乙醇組、100%乙醇組1周、3個月尼氏小體光密度值明顯降低，差異有統計學意義（P均＜0.05）；75%乙醇組與100%乙醇組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。各濃度乙醇組組內1周和3個月比較，差異無統計學意義（P＞0.05），見表1～2。

表1 1周后對照組與乙醇組尼氏小體光密度比較（）

表1 1周后對照組與乙醇組尼氏小體光密度比較（）

注：與對照組比較，*P＜0.01

表2 各濃度乙醇組1周、3個月尼氏小體光密度比較（）

表2 各濃度乙醇組1周、3個月尼氏小體光密度比較（）

注：與50%乙醇組比較，*P＜0.05

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4 討 論

尼氏小體是神經元內一種特殊的結構[3]，由大量平行排列的粗面內質網和雜夾其的核糖核蛋白體構成。尼氏體的主要功能是合成蛋白質，供給神經細胞的活動，神經細胞功能旺盛時，胞體要有相應的體積進行必要的代謝活動，其所需蛋白質越多，尼氏體也越粗大，當神經元受損害時，尼氏小體即漸漸分解以至消散。因此，尼氏小體結構的變化可作為神經元受損的標志。本實驗通過尼氏小體染色方法和檢測尼氏小體平均光密度來觀察尼氏小體的結構變化，以進一步研究乙醇對腹腔神經叢的破壞程度。

乙醇組尼氏體平均光密度較手術對照組明顯降低（P＜0.05），說明乙醇組尼氏體平均光密度的降低是非手術損傷破壞引起。本實驗結果在腹腔神經叢毀損后的第1周、3個月，50%乙醇組與75%乙醇組、100%乙醇組光鏡下觀有較大差別。鄭漢光等[4]在離體試驗光鏡下中觀察到，浸于50%、75%、100%三種不同濃度乙醇1周后組織學變化相似，均見核仁消失，尼氏小體均變細，神經纖維髓鞘全部消失，說明乙醇濃度與最終組織學變化關系不大。這兩個實驗結果不盡相同，我們認為活體動物的腹腔與離體動物實驗環境不同，乙醇本身具有高揮發性，腹腔神經叢周圍有大血管，并且乙醇在注入后被體液所稀釋，濃度和容量可能會降低，并不能完全做到飽和浸潤。據矢吹俊一等報道[5]50%乙醇是能夠破壞腹腔神經叢的最低濃度，我們觀察到75%乙醇組和100%乙醇組尼氏體平均光密度值較50%乙醇組明顯下降（P＜0.05），而75%乙醇組與100%乙醇組之間尼氏體平均光密度值差異無統計學意義（P＞0.05），提示75%乙醇已能達到無水乙醇的毀損效果，50%乙醇還有所欠缺。可能的機制是[6-7]：50%乙醇雖然滲透良好，但其脫水和變性作用弱，毀損不夠徹底；理論上乙醇的濃度越高，毀損作用越強，但無水乙醇因其高濃度可使細胞膜蛋白質凝固，妨礙乙醇的內向滲透，而75%乙醇不僅滲透性良好，而且對神經細胞的脫水及變性作用也強，因而兩者毀損效果相似。各濃度乙醇組組內1周和3個月尼氏體染色平均光密度比較，差異無統計學意義（P＞0.05），說明不同濃度乙醇濃度對神經細胞造成的破壞程度可能不同，但一旦破壞是不可逆的，由此可見，臨床上在腹腔神經叢毀損一段時間后又出現疼痛復發，并非是神經細胞修復，功能恢復所致。可能有以下原因[8]：①隨著病情的進一步惡化，晚期腫瘤除侵犯腹腔神經叢外，也侵犯其他神經傳導途徑。②穿刺位置不精確準確、腹腔神經叢所在區域被腫瘤繞或淋巴結占據，乙醇的彌散不良，毀損不夠徹底，未遭到毀損的腹腔神經功能代償疼痛可復發。

通過本研究我們認為50%乙醇、75%乙醇和100%乙醇對兔腹腔神經叢均有不同程度的變性作用，但以75%乙醇濃度適宜，且遠期效果明確。75%乙醇能在確保阻滯療效前提下，可最大限度減少無水乙醇帶來的不良反應，對臨床有一定的指導意義。

［1］Wong Gy，Schroeder DR，Carns PE，et al.Effect of neurolytic celiac piexus block on pain relief，quality of life，and survival in patients with unresectablie pancreatic cancer：a randomized controlled［J］.JAMA，2004，291（9）：1092-1099.

［2］Noble M，Cress FG.Techniques and result of neurolysis for chronic pancreatitis and pancreatic cancer pain［J］.Curr Gastroenterol Rep，2006，8（2）：99-103.

［3］韓濟生，關新民.醫用神經生物學［M］.武漢：武漢出版社，1996：3.

［4］鄭漢光，汪國香，陶凡.腹腔神經節（叢）乙醇阻滯治療癌性腹痛的臨床和實驗動物組織學的初步觀察［J］.河北醫學，1999，5（1）：12-15.

［5］矢吹俊一，小川筋郎，金山利吉，等.腹腔神經阻滯效果與注入乙醇量及濃度關系［J］.麻醉，1982，33：1077.

［6］李昌熙，方華，嚴相默，等.乙醇腹腔神經叢阻滯治療上腹部癌痛的臨床觀察［J］.臨床麻醉學雜志，2006，22（9）：676 680.

［7］Choy YC，Purenesvan S，Samad S.Chronic pain managementupper visceral malignancies coeliac plexus block with CT scanning a case report［J］.Med J Mtalaysna，1998，53（3）：277-279.

［8］程英，劉瑞.CT引導下腹腔神經叢阻滯術的方法及應用進展［J］.汕頭大學醫學院學報，2001，14（3）：222-224.

不同濃度乙醇對活體家兔腹腔神經叢毀損的組織學觀察

王 振 曲丕盛 陶 凡 鄭漢光 杭州市紅十字會醫院麻醉疼痛科 杭州310003

Histological Changes of Neurolytie Celiac-Plexus Block with Various Concentrations of Alcohol in Rabbits

WANG Zhen，QU Pisheng，TAO Fan，ZHENG Hanguang. Department of Anesthesiology,Zhejiang Hangzhou Red Cross Hospital,Hangzhou(310003),China

ObjectiveTo observe the relationship between histological changes of neurolytie celiac-plexus block and concentrations of alcohol，in order to provide scientific evidence for clinical application.MethodsForty-eight New Zealand rabbits were randomly divided into 4 groups：control group，50%alcohol group，75%alcohol group，and 100%alcohol group（n=12）.Control group was given saline.Eighteen rabbits from alcohol groups（n=6 from each group）were sacrificed one week after administration of alcohol and the rest ones were sacrificed at three month for histological examination.The Nissl body in celiac plexus blocked with alcohol or from the other side without treatment were stained with Thionine.HPIAS-1000 system was used to detect OD values of the Nissl body.ResultsAfter one week，no abnormality in gangliocytes in tissue sections from control groups was seen；few disappearance of nucleus in neurons was seen in 50%alcohol group；and the majority of nucleus in neurons disappeared in 75%alcohol group and 100%alcohol group，with smaller Nissl body and demyelination.After three months，the histological changes of alcohol groups were similar to those at one week.The OD values of the Nissl body in alcohol groups were lower than that in control group（P＜0.01）；the OD values of the Nissl body in 75%alcohol group and 100% alcohol group were lower than that in 50%alcohol group at one week and three months（P＜0.05）.No significant difference in OD values of the Nissl body was noted between 75%alcohol group and 100%alcohol group（P＞0.05）.No significant difference was found between one week and three months in each group（P＞0.05）.ConclusionThe histological changes of neurolytie celiac-plexus block was related to the concentration of alcohol.75%alcohol may be the suitable one for clinical use.

rabbits；alcohol；celiac plexus；block；histological observation

杭州市醫藥衛生科技計劃項目（No.2007B0042）

2013-12-09

2014-02-17