HPLC法測定卡托普利片含量的測量不確定度評定

秦 立，肖 英，范亞剛（.云南省食品藥品檢驗所，昆明 6500；.山東省食品藥品檢驗所，濟南 500）

HPLC法測定卡托普利片含量的測量不確定度評定

秦 立1＊，肖 英2，范亞剛1（1.云南省食品藥品檢驗所，昆明 650011；2.山東省食品藥品檢驗所，濟南 250101）

目的：評定高效液相色譜（HPLC）法測定卡托普利片含量的測量不確定度。方法：建立HPLC法測定卡托普利片的含量的數(shù)學(xué)模型，分析測量不確定度的影響因素并對各因素進行評估，給出擴展測量不確定度報告。結(jié)果：HPLC法測定卡托普利片含量的擴展測量不確定度為1.2%，測量結(jié)果表示為（100.3±1.2）%，k＝2。結(jié)論：明確產(chǎn)生不確定度的主要來源，可為有效地控制該含量測定方法的準確性提供可靠的理論依據(jù)。

卡托普利片；高效液相色譜法；含量測定；測量不確定度

測量不確定度是與測量結(jié)果相關(guān)聯(lián)的一個參數(shù)，用以表征合理地賦予被測量之值的分散性[1]。它與測量誤差有著本質(zhì)的區(qū)別。測量不確定度對測量、試驗結(jié)果的可信性、可比性和可接受性都有非常重要的意義。在相同的條件下進行測量時，合理賦予被測量的任何值，均具有相同的測量不確定度，即測量不確定度僅與測量方法有關(guān)[2]。

卡托普利片是《中國藥典》2010年版（二部）收載品種[3]，為競爭性血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑，適用于治療慢性心功能不全和高血壓。卡托普利片的含量測定方法為高效液相色譜（HPLC）外標法。筆者根據(jù)《測量不確定度評定與表示》及有關(guān)規(guī)定[4-5]并參考有關(guān)文獻[6-9]，對HPLC法測定卡托普利片含量的測量不確定度進行評估，分析影響不確定度的各因素，為客觀評價卡托普利片的含量測定結(jié)果提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

2695型HPLC儀，包括Waters 2996二極管陣列檢測器及Waters Empower工作站（美國Waters公司）；BP-211D電子天平（德國賽多利斯公司，d＝0.01mg）；DELTA320酸度計（瑞士梅特勒-托利多公司）；100m l量瓶均檢定為A級。

卡托普利對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100318-201103，質(zhì)量分數(shù)：99.5%）；卡托普利片（云南龍恩制藥有限公司，批號：20130301）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 試驗方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動相：0.01mol/L磷酸二氫鈉溶液-甲醇-乙腈（75∶25∶5，V/V/V，用磷酸調(diào)節(jié)pH至3.0）；流速：1.0m l/min；檢測波長：215 nm；柱溫：40℃；進樣量：20μl。

2.2 溶液的制備

取樣品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量（約相當于卡托普利10mg），置于100m l量瓶中，加流動相適量溶解并定容，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。另取卡托普利對照品適量，精密稱定，置于100m l量瓶中，加流動相適量溶解并定容，作為對照品溶液。

2.3 樣品測定

精密量取供試品溶液和對照品溶液各20μl，注入HPLC儀，記錄色譜，按外標法以峰面積計算含量。

3 測量不確定度評定

化學(xué)分析中的測量不確定度評定主要分為以下步驟[2，4]：被測量的技術(shù)規(guī)定；識別測量不確定度的來源；測量不確定度分量的量化；計算合成標準測量不確定度；擴展測量不確定度的給出；報告測量不確定度。

3.1 數(shù)學(xué)模型

根據(jù)測定原理和過程，樣品的標示百分含量計算公式為：

式中：X為供試品中卡托普利的標示百分含量；AX為供試品的峰面積；AR為對照品的峰面積；WX為供試品的稱取量；WR為對照品的稱取量；VX為供試品溶液的配制體積；VR為對照品溶液的配制體積；PR為對照品的純度；W為平均片質(zhì)量；標示量為25mg/片。

3.2 識別測量不確定度的來源

有關(guān)測量不確定度的來源見圖1。

圖1 測量不確定度分量因果圖Fig 1 Cause-effect diagram of uncertainty components

3.3 測量不確定度分量的量化分析

3.3.6 供試品溶液稀釋的相對標準不確定度ure（lVX） 測量不確定度的分析同“3.3.3”項。相對標準不確定度ur（elVX）＝6.80× 10－4。 3.3.7 供試品色譜峰面積的相對標準不確定度ure（lAX） 因檢測次數(shù)較少，故采用極差法[3]計算供試品色譜峰面積引入的不確定度。當n＝2時，極差系數(shù)C＝1.13。精密稱取2份卡托普利片供試品，分別配制成供試品溶液，每份溶液重復(fù)進樣2次，結(jié)果詳見表1。

表1 供試品峰面積測定結(jié)果（n＝2）Tab 1 Result of the peak area for test sam ple（n＝2）

3.4 計算合成相對標準不確定度uc，rel

測量不確定度各分量的分析結(jié)果見表2和圖2。

表2 各分量相對標準不確定度一覽Tab 2 Relative standard uncertainty of each component

圖2 測量不確定度的分量大小Fig 2 Value of uncertainty components

3.5 給出擴展不確定度U

測量結(jié)果符合正態(tài)分布，取置信概率為95%，包含因子k＝2，則：U＝kuc（X）＝2×0.6%＝1.2%。

3.6 測量不確定度報告

HPLC法測定卡托普利片的含量結(jié)果表示為X＝（100.3± 1.2）%，k＝2。

4 討論

由上述測量不確定度的分析評定結(jié)果可知，HPLC法測定卡托普利片含量的不確定度主要來自于對照品的稱取量，其次是藥片的質(zhì)量差異、液相色譜峰面積、供試品的稱取量以及稀釋過程。提示在檢驗過程中應(yīng)選用精度符合要求的分析天平稱量，使用經(jīng)校正合格的容量儀器進行稀釋；應(yīng)定期做好HPLC儀的計量檢定和期間核查工作，使HPLC儀的技術(shù)性能處于良好工作狀態(tài)，以確保測定結(jié)果準確可靠；對于含量測定結(jié)果處于合格邊緣的產(chǎn)品應(yīng)謹慎對待藥片質(zhì)量差異對結(jié)果的影響。

[1] 全國法制計量管理計量技術(shù)委員會.測量不確定度評定與表示：JJF1059.1-2012[S].北京：中國質(zhì)檢出版社，2013.

[2] 倪育才.實用測量不確定度評定[M].北京：中國計量出版社，2004：9.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：525.

[4] 全國法制計量管理計量技術(shù)委員會.化學(xué)分析測量不確定度評定：JJF1135-2005[S].北京：中國計量出版社，2005.

[5] 中國合格評定國家認可委員會.化學(xué)分析中不確定度的評估指南：CNAS-GL06[S].北京：中國計量出版社，2006.

[6] 謝瓊玉.HPLC法測定賴諾普利片含量及含量均勻度的不確定度評定[J].中國藥房，2013，24（40）：3 827.

[7]翁雪萍，黃丹瑩.HPLC法測定保健食品中蘆薈苷含量不確定度的評定[J].藥物分析雜志，2011，31（6）：1 193.

[8] Quintela M，Báguena J，GotorG，etal.Estimation of the uncertainty associated w ith the results based on the validation of chromatographic analysis procedures：application to the determ ination of chlorides by high performance liquid chromatography and of fatty acids by high resolution gas chromatography[J].J Chromatogr A，2012，1 223： 107.

[9] Konieczka P，Namie?nik J.Estimating uncertainty in analytical procedures based on chromatographic techniques [J].JChromatogrA，2010，1 217（6）：882.

[10]全國流量容量計量技術(shù)委員會.常用玻璃量器檢定規(guī)程：JJG196-2006[S].北京：中國計量出版社，2006.

Evaluation of Uncertainty for the Content Determ ination of Captopril Tablets by HPLC

QIN Li1，XIAO Ying2，F(xiàn)AN Ya-gang1（1.Yunnan Institute for Food and Drug Control，Kunm ing 650011，China；2.Shandong Institute for Food and Drug Control，Jinan 250101，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the uncertainty evaluation for the determination of Captopril tablets by HPLC.METHODS：Mathematicalmodelwas established for HPLC for the content determination of Captopril tablets to identify influential factors of uncertainty，evaluate the uncertainty factors and report expanded measurement uncertainty.RESULTS：The expanded uncertainty for the content determination of Captopril tablets as 1.2%，and the result of content determination was（100.3± 1.2）%（k＝2）.CONCLUSIONS：Main source of uncertainty should be clear and definite，which can provide theory evidence for accuracy control of themeasurementmethod.

Captopril tablets；HPLC；Content determ ination；Uncertainty

R917

A

1001-0408（2014）12-1140-04

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2014.12.29

＊副主任藥師，碩士。研究方向：藥品質(zhì)量分析。電話：0871-63130536。E-mail：qinli2112@gmail.com

2013-10-21

2014-01-24）