寒地草莓幾種脫毒技術比較研究

龍照春，郭春華，高慶玉，安勝，孫曉春

(1.齊齊哈爾市園藝研究所，黑龍江齊齊哈爾161005；2.東北農業大學)

草莓是寒地特色果樹之一，它種植投資少見效快，是農村農業產業結構調整中具有前景的項目。但由于草莓很容易感染多種病毒病，感染了病毒病的草莓果子一年比一年小、畸形，品質差，葉子皺，生長緩慢，產量越來越低，并逐年加重，草莓的經濟效益大幅度下降，嚴重地阻礙了草莓生產的發展，然而對病毒病目前還沒有藥劑可以防治，只有通過培育無病毒苗木用于栽培生產，因此研究脫毒技術具有重要意義。

1 試驗材料

試驗品種為感病嚴重的圓球品種，材料來源為東北農業大學園藝試驗站果園。

2 試驗方法

2.1 莖尖培養

6～7月份在田間隨機選取草莓莖尖，首先用自來水沖洗3～4遍。再用蒸餾水沖洗2～3遍，然后用70%酒精浸泡30s，0.1%的升汞浸泡8min左右，再用無菌水沖洗2遍，即可接種到生長培養基MS+1mg/L BA+0.2mg/L IAA上，培養2～4周，轉移到分化培養基MS+2mg/L BA+0.1mg/L IAA上，分化一定數量以后即可移到生根培養基MS+ 0.2mg/L IBA上進行生根。

(1)不同取材長度的處理。將田間隨機取回的草莓莖尖，經過殺菌處理以后，分別切取0.3、0.5、1、2、3mm 5個長度，接種到生長培養基上。

(2)不同取材次數的處理。將1、2、3mm長的莖尖接種以后，待長成試管苗時，再分別切取1、2、3mm長的莖尖，重復接種2～3次，比較不同取材次數對脫毒效果的影響。

(3)藥劑處理。將草莓莖尖切取1mm長，接種在添加不同濃度鹽酸四環素的生長培養基中。所用四環素為醫用鹽酸四環素，每升培養基分別添加0.5、1、2g藥劑。

2.2 花藥培養

5月末6月初，當田間生長的圓球草莓花蕾直徑達到4～6mm時，隨機取回，然后用自來水沖洗2～3次，用70%酒精浸泡30～50s，用升汞浸泡8～9min，然后用無菌水充分沖洗，用鑷子取出花藥接種在添加不同激素濃度的培養基上進行愈傷組織誘導，4周左右，將產生的愈傷組織轉移到添加不同激素濃度的LS培養基上進行莖葉分化，整個培養溫度為25～28℃，光照時間為8h，光強為2000 lx，分化出莖葉以后，再轉移到MS+2mg/L BA+0.1mg/L IAA的分化培養中繼續分化，達到一定數量以后轉移到生根培養基MS +0.2mg/L IAA上進行生根。

2.3 幼葉培養

將田間沒有展開的圓球幼葉，隨機取下后放入盛水的燒杯中，然后用自來水沖洗2～3次，再用蒸餾水沖洗2～3次，用70%酒精沖洗一次，用20倍漂白殺菌7～8min，用無菌水充分沖洗，然后用刀片切成3mm的方塊，接種到添加不同激素濃度的LS培養基上進行愈傷組織的誘導和莖葉分化，比較不同激素濃度對愈傷組織的誘導及莖葉分化的影響。

2.4 莖尖愈傷組織的誘導及分化培養

將莖尖切取0.5mm左右的長度接種在MS+2mg/L BA+0.5mg/L IAA的培養基上，4～6天在基部便產生大量的愈傷組織，再把愈傷組織切下來，重新接種到MS+2mg/L BA+0.5mg/L IAA的培養基上，即可分化出大量植株，最后轉移到生根培養基MS +0.2mg/L IBA上進行生根。

2.5 加熱處理

將圓球的莖尖切取3mm長接種到生長培養基上，培養成試管苗以后，再放在JT75-2型隔水式恒溫培養箱中，溫度分別為35±1℃和38±1℃，光照用日光臺燈，每天光照10h，光強為1000 lx，分別處理2～4周，每一處理取出后再分成兩組，一組直接轉移到生長培養基中，另一組再切取1mm長的莖尖接種到生長培養基上，成苗以后進行脫毒效果的比較。

2.6 試管苗的移栽與管理

2月份，當試管苗在生根培養基中生出大量白色新根時，栽植在溫室的播種箱中，箱的下部放上肥沃的土壤，上覆1cm左右的細沙，15～20℃的溫度下生長30～40天，即可移栽在花盆中，4月份，當苗在花盆中長到具有5～6片成熟葉片時，進行嫁接鑒定，檢驗脫毒效果。

3 結論

經過幾種脫毒方法的比較，結論為草莓脫毒最好的方法為花藥培養，因為花藥培養可以100%脫毒，所以可以省去病毒鑒定的工序。其培養基為，愈傷組織誘導：LS+2mg/L BA+0.5mg/L NAA，誘導率可達92.8%，不定芽的誘導LS+2mg/L BA+0.3mg/L NAA，分化率10%，生根培養：MS+0.2mg/L IBA，生根率100%。

通過莖尖培養可以脫掉病毒，獲得無毒植株，但不是一般的莖尖培養都能脫毒，只有接種的莖尖小于0.5mm時，才能達到20%以上的脫毒效果。而且接種的莖尖牙越小脫毒效果越好，重復切取莖尖的次數越多，脫毒效果越好，莖尖培養與藥劑處理相結合對脫毒有一定效果，每升培養基添加0.5～2g鹽酸四環素均可達到20%的脫毒效果，莖尖培養與熱處理相結合比單獨莖尖培養脫毒效果好，單獨接種3mm長的莖尖沒有脫毒效果，但如果用38±1℃的溫度處理2周，即有20%脫毒，處理3周脫毒率可達60%，而且用38±1℃處理2周，再切取1mm長的莖尖接種脫毒率可達40%，而用35±1℃的溫度處理3～4周均沒有脫毒效果。因此，如果采用莖尖培養脫毒我們認為應切取0.3～0.5mm長的草莓莖尖接種，或者是用較大的材料接種培養成試管苗，再用38±1℃的溫度處理2周，然后再切取1mm長的莖尖培養，兩者均能達到一定的脫毒效果，但必須經過病毒鑒定后，獲得無毒母株，才能用于生產。幼葉培養和莖尖愈傷組織途徑脫毒效果均為20%，與0.5mm長的莖尖培養效果差不多。