枇杷葉黃酮類化學成分研究

呂 寒， 于 盱， 陳 劍， 李維林

（ 江蘇省·中國科學院植物研究所， 江蘇 南京 210014）

枇杷葉黃酮類化學成分研究

呂 寒， 于 盱， 陳 劍， 李維林*

（ 江蘇省·中國科學院植物研究所， 江蘇 南京 210014）

目的 研究中藥枇杷葉中黃酮類化學成分。 方法 采用反復硅膠、 反相硅膠、 凝膠 LH-20 柱以及制備薄層等方法分離枇杷葉黃酮提取物中的化學成分，運用化學和有機波譜分析方法確定化合物結構。結果 從枇杷葉中分離得到9 個黃酮類化合物， 經鑒定分別為山柰酚 (1)， 槲皮素 (2)， 3，5，7-三羥基黃酮 (高良姜素)(3)， 橙皮苷 (4)， 金絲桃苷 (5)， 山柰酚-3，7-二葡萄糖苷 (6)， 異槲皮苷 (7)， 槲皮苷 (8)， 蘆丁 (9)。 結論 化合物 3、 4 和 6 為首次從該植物及該屬植物中分離得到。

枇杷葉；化學成分；黃酮

枇杷葉為薔薇科枇杷屬植物枇杷 Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.的干燥葉， 是一味常用中藥，具有清肺止咳、降逆止嘔的作用，用于治療肺熱咳嗽、氣逆喘氣、胃熱嘔逆、煩熱口渴等癥狀［1］。 目前已經從枇杷葉中分離出三萜酸、 黃酮類、 多酚、 倍半萜及其苷類等成分［2］。近年來研究發現黃酮類化合物具有良好的抗氧化、降血脂、抗炎、 增強免疫 等作用［3］。 為進一步研究枇杷葉的黃酮類化合物，本實驗對枇杷葉黃酮類成分進行了分離。

1 儀器與材料

熔點用顯微熔點測定儀 (北京泰克儀器有限公司) 測定 (溫度未校正)； 核磁共振譜用 Bruker AV-300 型核磁共振儀測定； 質譜用 Agilent1100 測定。 Büchi中壓柱； 柱層析用硅膠及薄層色譜用硅膠為硅膠 G(青島海洋化工廠)，RP-18(40 ～63 μm)(Merck 等)， Sephadex LH-20(Pharmacia等)， 聚酰胺 (100 ～200 目)(青島海洋化學廠)。柱層析溶劑由上海化學試劑廠生產，均為分析純。藥材采集自江蘇蘇州，經江蘇省中國科學院植物研究所李維林研究員鑒定， 為枇杷 Eriobotrya japonica (Thunb.)Lindl.的干燥葉， 留樣于江蘇省中國科學院植物研究所標本館。

2 提取與分離

取干燥枇杷葉3 kg， 粉碎， 80%乙醇回流提取3次， 60 ℃減壓濃縮， 濃縮液離心， 上清液上D101 樹 脂，以 水，10% 乙 醇， 50% 乙 醇 洗 脫。50%乙醇洗脫部分，減壓濃縮， 濃縮液經硅膠柱層析， 以乙酸乙酯-甲醇梯度洗脫分段。 然后采用硅膠柱層析，其中乙酸乙酯洗脫部位，結合三氯甲烷-乙酸乙酯薄層制備， 得到化合物 1(10 mg)， 2 (8 mg)， 乙酸乙酯-甲醇 (10 ∶1) 部位經三氯甲烷-乙酸乙酯反復洗脫得到化合物 3(10 mg)， 乙酸乙酯-甲醇 (10 ∶3) 部位采用三氯甲烷-甲醇反復洗脫得到化合物 4(30 mg)， 乙酸乙酯-甲醇(10 ∶4 ～10 ∶7) 部分， 經過三氯甲烷-甲醇洗脫，RP-18 柱層析結合 sephadex LH-20 反復洗脫得到化合物5(25 mg)、 6(10 mg)、 7(28 mg)、 8(23 mg)， 乙酸乙酯-甲醇 (10 ∶8) 部位經過 sephadex LH-20 反復洗脫得到化合物 9(10 mg)。

3 結構鑒定

化合物1: 黃色粉末， 易溶于甲醇。 鹽酸鎂粉反應呈陽性， 三氯化鋁反應呈黃綠色熒光。 mp 278 ～279 ℃， EI-MS(m/z)286(M+)。 薄層色譜分析與山柰酚對照品 Rf值一致， 鑒定該化合物為山柰酚 (kaempferol)［4-5］。

化合物2: 黃色粉末， 易溶于甲醇。 鹽酸鎂粉反應呈陽性， 三氯化鋁反應呈黃綠色熒光。 mp＞300 ℃， EI-MS(m/z)302(M+)。 薄層色譜分析與槲皮素對照品 Rf值一致， 鑒定該化合物為槲皮素 (quercetin)［4-5］。

化合物3: 黃色粉末， 溶于甲醇。鹽酸鎂粉反應呈陽性， 三氯化鋁反應呈黃色熒光， mp 214 ～216 ℃， EI-MS(m/z)270(M+)，1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz， TMS) δ:9.94(1H， s， 3-OH)，10.31(1H， s， 7-OH)， 12.47(1H， s， 5-OH)，8.04(2H，d， J=8.5Hz，H-2'， 6')， 7.50(3H，m， H-3'， 4'， 5')，6.18(1H， d， J=2.0 Hz，H-6)， 6.43(1H， d， J=2.0 Hz， H-8)。13C-NMR (DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ:144.9(C-2)，135.5(C-3) ， 175.8(C-4)， 160.6(C-5)， 98.1 (C-6)， 163.8(C-7)， 93.4(C-8) ， 156.1(C-9)，102.9(C-10)，131.6(C-1')， 128.2(C-2'， 6')，127.9(C-3'， 5')，129.9(C-4')。 對照 文 獻 ［6-7］， 鑒定該化合物為 3，5，7-三羥基黃酮 (高良姜素， galangin)。

化合物 4: 黃色粉末，易溶于甲醇，mp 258 ～260 ℃，三氯化鋁反應呈黃色熒光， Molish 反應呈陽性。 ESI-MS:610(M+)。1H-NMR(DMSO-d6，300 MHz， TMS) δ:1.08(3H， d， J=5.67 Hz， 鼠李 糖-CH3)， 2.77(1H， m， H-3)， 3.15-3.62 (10H， m，糖質子)，3.79(3H，s， J=12.15 Hz， -OCH3)， 4.56(1H， brs， 鼠 李 糖 端 基 H)， 4.96 (1H， d， J=6.9 Hz， 葡萄糖端基 H， β構型)，5.49(1H， d， J=10.1 Hz，H-2)， 6.12(2H，d，J=3.96 Hz， H-6， 8)，6.92(3H，m，H-2'， 5'，6')， 9.03(1H， s， 3'-OH) ， 12.01(1H， s， 5-OH)。13C-NMR(DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ: 55.8(-OCH3)， 78.3(C-2)，42.1(C-3)，196.8 (C-4)， 163.0(C-5)，96.4(C-6)，165.2(C-7)， 95.6(C-8)， 162.4(C-9)， 103.4(C-10)，131.0(C-1')， 114.2(C-2')， 146.6(C-3')，148.0(C-4')， 112.4(C-5')， 117.8(C-6')；糖碳信號:3-O-glu 99.6(C-1″)，73.0(C-2″)，75.6 (C-3″)， 70.8(C-4″)， 76.3(C-5″)， 66.1(C-6″)， 6-O-rhaδ100.6(C-1?)， 70.3(C-2?) ， 70.8 (C-3?)， 69.7(C-4?)， 68.3(C-5?)， 17.8(C-6?)。 對照文獻 ［8-9］，鑒定該化合物為 5，4'-二羥基-3'-甲氧基-二氫黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖-(6→1)-α-L-鼠李糖苷 (橙皮苷， hesperidin)。

化合物 5: 黃色粉末，易溶于甲醇，mp 231 ～232 ℃，鹽酸鎂粉反應呈陽性， 三氯化鋁反應呈黃色 熒 光， Molish 反 應 呈 陽 性。 ESI-MS:464 (M+) 。1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz， TMS) δ: 3.01 ～3.64(6H， m， 葡萄糖質子)， 5.36(1H，d，J=8.0 Hz， 葡萄糖端基 H，β構型)， 6.17(1H，s， H-6)， 6.37(1H， s， H-8)， 6.80(1H， d， J= 8.0 Hz， H-5')， 7.52(1H， s， H-2')， 7.67(1H，d，J=8.3 Hz， H-6')。13C-NMR(DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ:156.0(C-2)， 133.4(C-3)，177.2(C-4)， 161.1(C-5)， 98.9(C-6)， 164.9 (C-7)， 93.6(C-8) ， 156.3(C-9)， 103.5(C-10)，120.9(C-1')， 115.1(C-2')，144.8(C-3')， 148.6(C-4')， 115.8(C-5')，121.9(C-6')； 糖 碳 信 號:102.0(C-1″)， 71.2(C-2″)，73.2(C-3″)， 67.8(C-4″)， 75.8(C-5″)， 60.1 (C-6″)。 對照文獻 ［9-11］， 鑒定該化合物為槲皮素-3-O-β-半乳糖苷 (金絲桃苷， hyperoside)。

化合物6:黃色粉末， 鹽酸鎂粉反應呈陽性，三氯化鋁反應呈黃綠色熒光。 ESI-MS(m/z)610 (M+)， mp 222 ～223 ℃。1H-NMR(DMSO-d6， 400 MHz， TMS) δ:12.46(5-OH)， 8.03(2H，dd，J=8.5 Hz， H-6'， 2')， 6.89(2H， d， J=9.0 Hz，H-3'， 5')， 6.38(1H， s， H-8) ， 6.15(1H， s， H-6)， 5.70(1H， d， J=7 Hz， H-1″)，4.61(1H，d，J=7.7 Hz， H-1?)， 3.07 ～3.83(12H，m， 糖質子)。13C-NMR(DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ: 156.4(C-2) ， 132.8(C-3)， 177.2(C-4)，161.2(C-5)， 98.0(C-6)， 162.1(C-7)， 93.7 (C-8)， 155.3(C-9)， 104.1(C-10)，120.9(C-1')， 115.3(C-2'， 6')， 130.9(C-3'， 5')，159.9(C-4')， 7-O-glc 103.5(C-1″)， 74.4(C-2″)， 76.6(C-3″)， 69.7(C-4″)，77.4(C-5″)，60.8(C-6″)，3-O-glu 99.0(C-1?)， 74.4(C-2?)， 76.5(C-3?)， 69.5(C-4?)， 77.0(C-5?)，60.5(C-6?)。 對 照文獻［12-13］， 鑒 定該化合物為山柰酚-3，7-二葡萄糖苷 (kaempferol-3，7-diglucoside)。

化合物 7: 黃色粉末， 易溶于甲醇， mp 234 ～235 ℃， 鹽酸鎂粉反應呈陽性， 三氯化鋁反應呈黃色 熒 光， Molish 反 應 呈 陽 性。 ESI-MS:464 (M+)。1H-NMR(DMSO-d6， 300 MHz， TMS) δ: 3.07 ～3.57(6H， m， 葡萄糖質子)， 5.69(1H，d， J=7.0 Hz， 葡萄糖端基 H， β構型)， 6.17 (1H， d，J=1.7 Hz， H-6)， 6.37(1H，d， J=1.7 Hz，H-8)，6.86(1H， d，J=8.5 Hz， H-5')， 7.67 (1H， d， J=2.0 Hz， H-2')， 7.54(1H， dd， J= 8.3， 2.0 Hz， H-6')。13C-NMR(DMSO-d6， 125 MHz， TMS) δ:156.3(C-2)， 133.0(C-3)，177.4(C-4)，161.2(C-5)， 98.8(C-6)， 164.7 (C-7)， 93.5(C-8)， 155.6(C-9)， 104.2(C-10)， 121.1(C-1')， 115.4(C-2')， 144.9(C-3')，148.6(C-4')，115.6(C-5')， 121.8(C-6')； 糖碳信號:103.7(C-1″)， 74.4(C-2″)，76.8(C-3″)， 69.6(C-4″)， 77.5(C-5″) ， 60.7(C-6″)。對照文獻 ［14］， 鑒定該化合物為槲皮素-3-O-β-葡萄糖苷 (異槲皮苷， isoquercetin)。

化合物 8: 黃色粉末， mp 183 ～185℃， 鹽酸-鎂粉 反 應 陽 性， Molish 反 應 陽 性。 ESI-MS:448 (M+)。1H-NMR(300 MHz， DMSO) δ:0.81 (3H， d， J=5.7 Hz， 鼠李糖-CH3)，3.20 ～3.97 (4H， m， 糖質子)，5.25(1H， d， J=1.3 Hz，H-1〞)， 6.20(1H， d， V=2.0 Hz， H-6)， 6.39 (1H， d， J=2.0 Hz， H-8) ， 6.86(1H， d， J=8.3 Hz，H-5')， 7.25(1H，dd， J=8.3，2.0 Hz， H-6')， 7.29(1H， d， J=2.0 Hz， H-2')，9.32 (1H， s， 3'-OH)， 9.69(1H， s， 4'-OH) ， 10.85 (1H， s， 7-OH)， 12.65(1H， s， 5-OH)。13C-NMR (125 MHz， DMSO) δ:156.4(C-2)， 134.2(C-3)， 177.7(C-4)， 161.2(C-5)，98.6(C-6)，164.1(C-7) ， 93.7(C-8)， 155.4(C-9)， 104.0 (C-10)， 121.1(C-1')， 115.4(C-2')， 145.1 (C-3')， 148.4(C-4')， 115.6(C-5')， 120.7 (C-6')； 糖碳信號:101.8(C-1?)，70.2(C-2?)，70.7(C-3?)， 71.1(C-4?) ， 68.3(C-5?)， 17.4 (C-6?)。 對照文獻 ［14-15 ］， 鑒定該化合物為槲皮素-3-O-α-L-鼠李糖苷 (槲皮苷，quercetrin)。

化合物 9: 黃色粉末，mp 176 ～177 ℃，易溶于甲醇，鹽酸鎂粉反應呈陽性，三氯化鋁反應呈黃色熒光， Molish 反應呈陽性。 薄層色譜分析與蘆丁對照品 Rf值一致， 與對照品混合熔點不下降， 鑒定為蘆丁 (rutin)。［S］.北京: 中國醫藥科技出版社， 2010.

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Studies on the flavonoids from leaf of Eriobotrya japonica(Thunb.)Lind l.

LüHan， YU Xu， CHEN Jian， LIWei-lin*
(Institute of Botany， Jiangsu Province and the Chinese Academy of Sciences， Nanjing 210014， China)

AIM To investigate the flavonoids from loquat leaf(Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.). M ETHODS Compounds from Loquat leaf were isolated by a combination of silica gel， ODS， sephadex LH-20 column chromatographies and preparative TLC.Their structureswere identified by chemical and spectralmethods. RESULTS Nine flavonoidswere isolated and identified as kaempferol(1) ， quercetin(2) ， galangin(3) ，hesperidin(4) ， hyperoside(5) ， kaempferol-3 ，7-diglucoside(6) ， isoquercetin(7) ， quercetrin(8) ， rutin(9) from loquat leaf.CONCLUSION Compounds 3、 4 and 6 are obtained from this plant and Eriobotrya genus for the first time.

leaf of Eriobotrya japonica(Thunb.)Lindl.； chemical constituent；flavonoid

R284.1

:A

:1001-1528(2014)02-0329-04

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.025

2013-03-27

國家自然科學基金項目 (21102058)； 江蘇省科技基礎設施建設計劃-科技公共服務平臺項目 (BM2011117)

呂 寒 (1980—)， 女， 碩士， 助理研究員， 研究方向: 植物化學。 Tel:(025)84347081

*通信作者: 李維林 Tel:(025)84347002， E-mail:lwlcnbg@mail.cnbg.net