干化學酶法檢測陰道分泌物診斷陰道炎的價值

夏 東，王成浩，蘇 倩

(安徽醫科大學第二附屬醫院，合肥230601)

陰道分泌物檢查是檢測女性泌尿生殖道健康水平的一個重要項目，目前主要采用常規鏡檢法，但該法存在明顯的影響因素，如檢測人員經驗、陰道分泌物涂片質量等，都會影響檢驗結果的準確性。近年來，基于干化學酶法的研究成果——陰道炎五聯檢，結合pH，可間接反映陰道分泌物中乳酸桿菌、白細胞、厭氧菌、念珠菌和滴蟲等的狀況。但該法能否作為各種陰道炎(如細菌性、念珠菌性和滴蟲性)的診斷依據，還有待進一步論證。為此，我們對干化學酶法陰道炎五聯檢與常規鏡檢法檢測陰道分泌物的結果進行比較。現報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料 選擇2013年7～9月在我院行陰道分泌物檢查者978例，年齡17～55歲。用無菌拭子收集的患者陰道后穹窿分泌物。主要儀器及試劑:奧林帕斯顯微鏡、聯檢分析儀woMOI(安圖實驗儀器公司)、SHW-200恒溫干浴器(恒豐儀器制造有限公司)、生理鹽水、10%氫氧化鉀及陰道炎五聯檢試劑盒(鄭州安圖生物工程有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 鏡檢方法 以常規鏡檢法作為金標準。陰道分泌物涂濕片，顯微鏡下觀察清潔度、乳酸桿菌、白細胞、線索細胞、滴蟲、念珠菌，并通過革蘭染色進行確認。結果按以下標準進行判讀:乳酸桿菌，革蘭陽性長桿菌＜6個/HP為陰性，革蘭陽性長桿菌≥6個/HP為陽性;白細胞，≥15個/HP為陽性，＜15個/HP為陰性;細菌性陰道炎(BV)，每視野線索細胞＜20%為陰性，≥20%為陽性;念珠菌，隨機鏡檢10個高倍鏡視野，未見念珠菌孢子或菌絲為陰性，有念珠菌孢子及或菌絲為陽性;滴蟲，隨機鏡檢10個高倍鏡視野，未見滴蟲為陰性，有滴蟲為陽性［1］。

清潔度分級以常規鏡檢為標準，分級標準:Ⅰ級:桿菌多，球菌陰性，上皮細胞滿視野，白細胞0～5個/HP;Ⅱ級:桿菌中量，球菌少量，上皮細胞占1/2視野，白細胞6～15個/HP;Ⅲ級:桿菌少，球菌多，上皮細胞少量，白細胞16～30個/HP;Ⅳ級:桿菌陰性，球菌大量，上皮細胞陰性，白細胞 ＞30個/HP［2］。Ⅰ ～Ⅱ級判定為正常，Ⅲ ～Ⅳ級判定為異常。常規鏡檢檢出滴蟲和真菌認為是滴蟲性陰道炎或真菌性陰道炎。

1.2.2 陰道分泌物五聯檢方法 嚴格按照說明書進行操作。具體步驟:取一加樣試管滴稀釋液6～8滴，將取有分泌物的棉拭子置于該試管內，充分刷洗后，用手指擠壓試管壁，使棉拭子吸收的液體充分回流試管。取出連卡檢，用吸管在每孔內加1滴樣本液，在唾液酸苷酶反應孔滴加顯色液，37℃溫箱15 min，在乙酰氨基葡萄糖苷酶孔加終止液，上機檢測自動判讀結果。正常:所有指標均陰性;BV:唾液酸苷酶陽性和(或)脯氨酸氨基肽酶陽性，乙酰氨基葡萄糖苷酶陰性;念珠菌性陰道病:pH≤4.6，乙酰氨基葡萄糖苷酶陽性;滴蟲性陰道病:pH≥4.8，乙酰氨基葡萄糖苷酶陽性。細菌性、念珠菌或滴蟲性以外的陰道炎:過氧化氫陽性，白細胞酯酶陽性。

1.2.3 統計學方法 采用SPSS19.0統計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩種方法清潔度檢測結果比較 相對于顯微鏡法，干化學酶法對Ⅰ～Ⅱ級和Ⅲ～Ⅳ級標本的分級正確率分別為 63.1% 和 59.7%(χ2=5.83，P ＜0.05)。見表1。

表1 兩種方法清潔度分級符合情況(例)

2.2 干化學酶法對乳酸桿菌的檢出效果評估 相對于顯微鏡法，干化學酶法對乳酸桿菌檢出符合率為99.3%(χ2=3.60，P ＞0.05)。見表 2。

表2 兩種方法對乳酸桿菌檢出情況(例)

2.3 干化學酶法對真菌的檢出效果評估 相對于顯微鏡法，干化學酶法對念珠菌的檢出符合率為96.3%(χ2=0.45，P ＞0.05)。見表3。

表3 兩種方法對念珠菌檢測出情況(例)

2.4 干化學酶法對滴蟲的檢出效果評估 相對于顯微鏡法，干化學酶法對滴蟲檢出符合率為97.1%(χ2=25.14，P ＜0.05)。見表4。

表4 兩種方法對滴蟲性陰道炎檢出情況(例)

2.5 干化學酶法對BV的檢出效果評估 相對于顯微鏡法，干化學酶法對BV檢出符合率為99.8%(χ2=4.00，P ＜0.05)。見表5。

3 討論

陰道炎是婦科常見病，通常由細菌、真菌等引起。目前，陰道分泌物常規、基于過氧化氫、唾液酸苷酶和白細胞酯酶的檢測試劑盒等都是輔助診斷陰道炎的常用方法［3，4］，但這些方法都存在明顯的影響因素，會影響檢驗結果的準確性。因此，尋求檢出準確率和檢出率高的方法，對臨床診斷與治療有重要意義。

表5 兩種方法對BV檢出情況(例)

基于干化學酶法的陰道炎五聯檢，結合pH，將細菌性、念珠菌性、滴蟲性以及其他不明原因的陰道炎加以區分，已有文獻［5］報道。陰道分泌物清潔度分為四級，Ⅰ ～Ⅱ級為正常，Ⅲ ～Ⅳ級為異常［6］。在常規鏡檢中，清潔度判定標準主要依據白細胞、陰道桿菌、上皮細胞及雜菌的多寡。干化學酶法則單純依據白細胞酯酶。故標本性狀會嚴重干擾干化學酶法的準確性，如生理期標本，許多Ⅲ～Ⅳ級標本，會由于標本性狀的干擾，被干化學酶法誤判為Ⅰ～Ⅱ級。因此，對于清潔度的分級，最好結合常規鏡檢。

過氧化氫是陰道微生態菌群中有益菌，對有害菌(如陰道加特納氏菌、支原體和念珠菌等)有抑制、殺滅作用;并且過氧化氫濃度與乳酸桿菌的數量呈正相關。本研究表明，干化學酶法對乳酸桿菌檢出符合率為99.3%，與常規鏡檢相當。

目前實驗室最常分離到的致病真菌是白色念珠菌。常規鏡檢法檢測念珠菌，鏡下不易觀察到念珠菌孢子及菌絲，極易漏檢及誤檢。乙酰氨基葡萄糖苷酶和脯氨酸氨基肽酶均為白色念珠菌的特異性酶。故干化學酶法的陰道炎五聯檢，通過檢測兩種酶的活性來判定念珠菌感染，可以降低念珠菌漏檢率。

滴蟲培養是公認的診斷滴蟲性陰道炎的金標準，但臨床上檢測滴蟲基本上是靠常規鏡檢。顯微鏡鏡檢對鏡檢人員經驗性要求高，且氣溫低可影響滴蟲的活動性而導致漏檢。研究表明，滴蟲具有乙酰氨基葡萄糖苷酶特異性酶，故可以通過檢測乙酰氨基葡萄糖苷酶來判定滴蟲感染。陰道炎五聯檢通過pH值和氨基葡萄糖苷酶活性的聯合檢測，排除了白帶標本溫度和離體時間影響，彌補懸滴法在溫度低和離體時間長時滴蟲檢出率下降的缺陷，為臨床診斷滴蟲性陰道炎提供了更可靠的數據。

BV是育齡婦女最常見的下生殖道感染性疾病，占陰道感染的40% ～60%［7］。陰道加特納菌是引起BV的主要病原菌。濕片法找線索細胞診斷BV，其準確性已得到證實［8］，但易受各種因素干擾。陰道炎五聯檢的診斷依靠對致病菌特異性代謝酶類的生化檢測，通過測定過氧化氫濃度、唾液酸苷酶活性和脯氨酸氨基肽酶活性等指標來診斷 BV［5，9］，結果更準確可靠、穩定性更好。但是考慮到線索細胞是判斷BV的必要條件，通過線索細胞診斷BV的陽性預期值為85%～90%，故陰道炎五聯檢可作為常規鏡檢方法的補充。

綜上所述，干化學酶法檢測陰道分泌物五項指標具有較高的靈敏度，是一種較好的陰道分泌物常規檢查方法。

［1］吳國友，洪曉平，馬小紅，等.陰道炎五聯檢對婦科病篩查的臨床應用研究［J］.中國衛生檢驗雜志，2011，21(4):952-954.

［2］熊立凡，劉成玉.臨床檢驗基礎［M］.4版.北京:人民衛生出版社，2008:249.

［3］樓洪萍，趙曉飛，李偉.唾液酸苷酶法在細菌性陰道病診斷中的臨床應用評價［J］.中國衛生檢驗雜志，2011，21(6):1476-1478.

［4］楊林.陰道分泌物常規檢測與BV試驗聯合運用的分析［J］.臨床和試驗醫學雜志，2012，11(17):1420-1421.

［5］Myziuk L，Romanowski B，Johnson SC.BVBlue test for diagnosis of bacterial vaginosis［J］.J Clin Microbiol，2003，41(5):1925-1928.

［6］葉應嫵，王毓三，申子瑜.全國臨床檢驗操作規程［M］.3版.南京:東南大學出版社，2006:324.

［7］趙永青，張冬梅.細菌性陰道炎與盆腔感染關系的探討［J］.武警醫學，1998，9(1):54-55.

［8］李莪，翁犁駒.細菌性陰道?。跩］.中華婦產科雜志，1995，30(1):59.

［9］唐振華，陸庭嫣，潘衛民，等.快速脯氨酸氨基肽酶檢測在細菌性陰道病診斷中的應用價值［J］.上海醫學檢驗雜志，2003，18(5):297-298.