非小細胞肺癌組織中PGSK-3β、TCF-4、NET-1的表達及意義

宋 曙，費嘉鴻，卞偉鋼，林 輝，周 芬

(鹽城市第一人民醫(yī)院，江蘇鹽城224001)

研究證實，Wnt信號通路與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及其分化程度密切相關［1］。糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)對該通路具有負性調節(jié)作用，能抑制細胞增殖，而磷酸化的 GSK-3β(PGSK-3β)能抑制 GSK-3β 的活性，從而促進腫瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉移［2］。在非小細胞肺癌(NSCLC)中，T細胞因子4(TCF-4)的分布與其組織分型有關，且TCF-4 mRNA和蛋白的過表達與其分化程度有關;NET-1作為一個腫瘤增殖相關蛋白，可在多種惡性腫瘤中異常表達。GSK-3β和TCF-4共同作用于Wnt信號通路，其活性與NET-1具有相關性。2004年1月～2006年6月，我們觀察了NSCLC 組織中 PGSK-3β、TCF-4、NET-1的表達，并探討其臨床意義?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇同期我院手術切除的NSCLC組織標本90份(觀察組)，均經術后病理確診。患者術前均未行放、化療及免疫治療?；颊吣?2例、女48例，年齡35～75歲、平均48.5歲;腺癌58例、鱗癌32例;中低分化癌72例，高分化癌18例。

1.2 方法

1.2.1 標本染色及處理 所有標本經10%甲醛固定、石蠟包埋，4 μm連續(xù)切片。切片經二甲苯脫蠟、水化后，進行免疫組化SP法染色，并嚴格參照試劑說明書進行。其中，PGSK-3β羊抗人多克隆抗體原液購自美國Santa Cruz生物有限公司，NET-1兔抗人多克隆抗體由南通大學醫(yī)學院病理教研室陳莉教授惠贈，TCF-4鼠抗人單克隆抗體和SP免疫組化試劑盒、DAB顯色試劑盒購自福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。

1.2.2 結果判斷 PGSK-3β陽性染色多數定位于細胞質內，少數定位于細胞核中;TCF-4陽性染色定位于細胞質或細胞核中，NET-1陽性染色定位于細胞質或細胞膜中。三者均呈棕黃色顆粒。其陽性表達采用半定量積分法判斷，陽性細胞百分比＜5%為0分，6% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分;染色強度呈淡黃色為1分，黃色為2分，棕黃色為3分。陽性細胞百分比和染色強度兩項積分相乘，0分為陰性，≥1～12分為陽性［3］。

1.2.3 統(tǒng)計學方法 采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件，計數資料比較采用χ2檢驗或Fisher檢驗。相關分析采用Spearman等級相關分析。P≤0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 NSCLC不同組織類型、分化程度 PGSK-3β、TCF-4、NET-1的陽性表達比較 見表1、2。

2.2 PGSK-3β、TCF-4、NET-1 在 NSCLC 組織中的相關性分析 PGSK-3β陽性表達與TCF-4、NET-1陽性表達均呈正相關(r分別為0.247 8、0.409 3，P均＜0.05)，TCF-4陽性表達與NET-1陽性表達亦呈正相關(r=0.260 9，P ＜0.05)。

表1 NSCLC不同組織類型PGSK-3β、TCF-4、NET-1陽性表達比較［例(%)］

表2 NSCLC不同分化程度PGSK-3β、TCF-4、NET-1陽性表達比較［例(%)］

3 討論

經典的Wnt信號通路是Wnt蛋白與細胞膜上卷曲蛋白跨膜受體結合，將信號傳到細胞內，激活胞質內的散亂蛋白，抑制GSK-3β表達，進而β-連接素(β-catenin)不能被磷酸化降解，致使β-catenin異常聚集［2］。異常聚集的β-catenin進入核內，與T細胞因子/白細胞移動增強因子結合，啟動下游靶基因的表達。在Wnt信號傳導通路中，GSK-3β是負性調節(jié)因素，β-catenin是正性調節(jié)因素，且GSK-3β是決定β-catenin磷酸化的關鍵激酶。對GSK-3β的抑制能使β-catenin不被磷酸化而降解，從而使β-catenin核聚集，抑制凋亡發(fā)生，促進腫瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展、侵襲與轉移［4，5］。本研究結果顯示，中低分化癌PGSK-3β陽性表達率明顯高于高分化癌。說明PGSK-3β升高可導致癌基因的表達增多，表現(xiàn)為細胞分化變低，腫瘤進展加快。

TCF-4作為轉錄因子，在無Wnt信號刺激時，對Wnt靶基因起抑制作用，可抑制下游基因的表達［6］;當有過量Wnt信號刺激時，TCF-4與β-catenin在細胞核內結合成復合體，特異性結合Wnt靶基因的啟動子而激活其轉錄，對細胞生長發(fā)育起重要作用。在NSCLC中，TCF-4的亞細胞分布與其組織類型有關，且TCF-4 mRNA和蛋白的高表達與其細胞分化程度有關［7］。本研究結果顯示，TCF-4在中低分化癌中的陽性表達率明顯高于高分化癌。說明TCF-4在Wnt信號通路促進細胞惡性轉化的過程中具有重要作用，是判斷腫瘤細胞惡性進程的一個指標。

NET-1是一種腫瘤增殖相關蛋白［8］。已有報道，在多種惡性腫瘤中存在NET-1的異常表達［9］。本研究結果顯示，NET-1在分化程度低的肺癌組織中表達水平顯著升高，與邵偉偉等［10］研究一致。提示NET-1過度表達與細胞增殖有關，可明顯促進肺癌的惡性進展。

本研究還觀察了PGSK-3β、TCF-4、NET-1在不同組織類型肺癌間的表達。結果顯示，肺腺癌中PGSK-3β、TCF-4、NET-1的陽性表達互高于肺鱗癌，但均無統(tǒng)計學差異。說明不同組織類型的NSCLC在Wnt信號通路促肺癌發(fā)生機制上沒有本質差異。

PGSK-3β、TCF-4、NET-1 均是肺癌發(fā)生、發(fā)展的正性調控因子，且與肺癌組織的分化程度密切相關［11］。本研究發(fā)現(xiàn)，PGSK-3β、TCF-4、NET-1 陽性表達均呈正相關。說明NSCLC形成過程中雖然PGSK-3β與TCF-4作用于Wnt信號通路的不同環(huán)節(jié)，卻起到了互相促進的作用;NET-1傳導細胞分裂的信息引起細胞異向分化或去分化，三者在細胞分裂的過程中共同參與了細胞的無限增殖過程。

綜上所述，我們認為PGSK-3β、TCF-4通過Wnt信號通路參與NSCLC的發(fā)生及分化，且與NET-1相互促進。

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