分散固相萃取凈化-液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定水產(chǎn)苗種中硝基呋喃類代謝物殘留量

嚴(yán)忠雍，張小軍,*，梅光明，李佩佩，龍 舉，祝 銀，王 建

分散固相萃取凈化-液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用測(cè)定水產(chǎn)苗種中硝基呋喃類代謝物殘留量

嚴(yán)忠雍1,2，張小軍1,2,*，梅光明1,2，李佩佩1,2，龍 舉1,2，祝 銀1,2，王 建3

（1.浙江省海洋水產(chǎn)研究所，浙江 舟山 316021；2.浙江省海洋漁業(yè)資源可持續(xù)利用技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 舟山 316021；3.浙江工商大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，浙江 杭州 310035）

建立分散固相萃取凈化-液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)苗種中氨基脲、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮、3-氨基-2-噁唑烷基酮、1-氨基-2-內(nèi)酰脲，4 種硝基呋喃類代謝物殘留量的方法。樣品經(jīng)甲醇-水（8∶1，V/V）溶液洗滌后，鹽酸溶液水解，以2-硝基苯甲醛作為衍生化試劑，乙酸乙酯萃取，濃縮，分散固相萃取凈化，采用液相色譜-質(zhì)譜儀、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描模式檢測(cè)和同位素內(nèi)標(biāo)定量。4 種硝基呋喃類代謝物在0.5～20 μg/L范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)大于0.997，檢出限0.1 μg/kg，回收率90.5%～104.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差1.56%～8.08%。本方法靈敏、高效、簡(jiǎn)單、重復(fù)性好，滿足硝基呋喃類代謝物的檢測(cè)要求。

分散固相萃取；液相色譜-質(zhì)譜；水產(chǎn)苗種；硝基呋喃類代謝物

硝基呋喃類藥物是一類合成的抗菌藥物，主要包括呋喃妥因、呋喃它酮、呋喃唑酮、呋喃西林，作用于微生物酶系統(tǒng)，抑制乙酰輔酶A，干擾微生物糖類的代謝，從而起抑菌作用，廣泛用于家禽、家畜、水產(chǎn)等動(dòng)物傳染病的預(yù)防與治療[1]。由于硝基呋喃類藥物對(duì)人類健康具有潛在危害，是世界各國(guó)普遍禁止使用的藥物[2]。我國(guó)于2002年頒布了禁止使用硝基呋喃類抗生素的禁令[3]。硝基呋喃類抗菌劑原型藥在動(dòng)物體內(nèi)代謝迅速，但是其代謝產(chǎn)物和蛋白質(zhì)結(jié)合后很穩(wěn)定[4]。目前，歐盟國(guó)家要求代謝產(chǎn)物為目標(biāo)分析物，以達(dá)到檢測(cè)硝基呋喃殘留的目的[5]。硝基呋喃類代謝物有1-氨基-2-內(nèi)酰脲（1-aminohydantoin，AHD）、5-甲基嗎啉-3-氨基-2-噁唑烷基酮（5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidone，AMOZ）、3-氨基-2-噁唑烷基酮（3-amino-2-oxazolidone，AOZ）、氨基脲（semicarbazide，SEM）。

目前文獻(xiàn)報(bào)道的硝基呋喃類代謝物殘留的分析方法主要是：高效液相色譜法[6]和液相色譜-質(zhì)譜法[7-11]；硝基呋喃類代謝物檢測(cè)的前處理方法有固相萃取[12-14]及液液萃取[15]。原有的文獻(xiàn)方法能基本滿足水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物的檢測(cè)分析要求，但在檢測(cè)水產(chǎn)苗種時(shí)并不能達(dá)到較好的效果。水產(chǎn)苗種異于水產(chǎn)成品，尤其是蝦蟹類苗種，在其苗種期個(gè)體幼小通常帶殼制樣，水解過(guò)程中消耗大量鹽酸，導(dǎo)致水解不完全，衍生化效率降低；水產(chǎn)苗種樣品通常含水率較多，且樣品基質(zhì)成分復(fù)雜，如果未進(jìn)行合適有效凈化手段，會(huì)造成分析物嚴(yán)重?fù)p失，因此有必要建立一種針對(duì)水產(chǎn)苗種中硝基呋喃類代謝物的分析方法。分散固相萃取法是一種快速、穩(wěn)定的前處理方法，但用于硝基呋喃類代謝物檢測(cè)尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究在前處理階段根據(jù)鹽酸消耗量?jī)?yōu)化鹽酸用量，利用分散固相萃取凈化結(jié)合液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定，建立水產(chǎn)苗種中硝基呋喃類代謝物殘留量分析方法，本方法簡(jiǎn)便、高效、快速、靈敏度高、重復(fù)性好，定量限、回收率與精密度均滿足殘留分析和殘留限量要求，同時(shí)對(duì)其他產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物的檢測(cè)具有參考意義。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

鹽酸、磷酸氫二鉀（均為分析純） 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙酸乙酯、乙酸銨、甲酸、二甲亞砜、甲醇、2-硝基苯甲醛等（均為色譜純），硝基呋喃代謝物標(biāo)準(zhǔn)品及其內(nèi)標(biāo)物：AOZ、SEM-HCl、AHD-HCl、AMOZ、AOZ-D4、SCA-HCl-13C-15N2、AHD-HCl-13C3、AMOZ-D5（純度均≥98%） 美國(guó)Sigma公司；N-丙基乙二胺（N-propylethylendiamine，PSA）、十八烷基鍵合硅膠吸附劑（C18）、弗羅里硅土（Florisil）、中性氧化鋁（Al2O3）、多壁碳納米管（MWCNT） 天津Agela有限公司。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取5.00 mg AOZ、SEM、AHD、AMOZ標(biāo)準(zhǔn)品（SEM、AHD的質(zhì)量均為SEM-HCl，AHDHCl去除鹽酸后換算的質(zhì)量），用甲醇溶解定容于50 mL容量瓶，4 ℃避光保存，保存期限為6 個(gè)月；使用時(shí)逐級(jí)稀釋至100 ng/mL。

1.2 儀器與設(shè)備

ACQUITy超高效液相色譜-質(zhì)譜儀（配電噴霧離子源，Quattro Premier XE） 美國(guó)Waters公司；T18勻漿機(jī)、MS2漩渦混合器 德國(guó)IKA公司；氮?dú)獯蹈蓛x 美國(guó)Organomatio公司；Centrifuge5810高速離心機(jī) 德國(guó)Eppendorf公司；SK25IOHP超聲波清洗器 上海科導(dǎo)超聲儀器有限公司；恒溫振蕩器 常州國(guó)華電器有限公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

準(zhǔn)確稱取2.00 g均質(zhì)水產(chǎn)苗種樣品于50 mL離心管中，加1 mL水和8 mL甲醇，渦旋振蕩2 min，6 000 r/min離心5 min，棄去上清液。加100 ng/mL混合內(nèi)標(biāo)工作液0.1 mL，再加0.2 mol/L鹽酸溶液5 mL（當(dāng)樣品是蝦蟹類苗種時(shí)，改加0.9 mol/L鹽酸溶液5 mL）和0.05 mol/L 2-硝基苯甲醛0.15 mL，渦旋振蕩2 min后，37 ℃恒溫避光振蕩16 h。取出離心管冷卻到室溫，加入適量1 mol/L磷酸氫二鉀溶液，調(diào)節(jié)pH值至7.0～7.5。加入5 mL乙酸乙酯，渦旋振蕩1 min，6 000 r/min離心5 min，轉(zhuǎn)移上清液至15 mL聚四氟乙烯離心管中；下層溶液加入5 mL乙酸乙酯重復(fù)提取一次，合并后的上清液40 ℃ N2吹干。殘?jiān)? mL流動(dòng)相溶解，加100 mg PSA，渦旋1 min，6 000 r/min離心3 min，取上清液經(jīng)0.22 μm有機(jī)濾膜過(guò)濾，轉(zhuǎn)移至進(jìn)樣瓶供液相色譜-質(zhì)譜分析。

1.3.2 色譜條件

色譜柱：ACQUITy UPLC BEH C18柱（2.1 mm× 50 mm，1.7 μm）；柱溫40 ℃；樣品室溫度10 ℃；進(jìn)樣量10 μL；流速0.2 mL/min；流動(dòng)相A為含有體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸的2 mmol/L醋酸銨溶液，B為甲醇，梯度洗脫（線性改變），梯度洗脫設(shè)置詳見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫Table 1 Mobile phase composition for gradient elution

1.3.3 質(zhì)譜條件

離子源：電噴霧離子（electorspray ionization，ESI+）源，正離子掃描；檢測(cè)方式：多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）；毛細(xì)管電壓3.0 kV；離子源溫度120 ℃；脫溶劑氣溫度380 ℃；脫溶劑氣流量600 L/h；錐孔氣流量50 L/h；錐孔電壓和碰撞能量等質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)實(shí)驗(yàn)條件見(jiàn)表2。

表2 硝基呋喃代謝物和相應(yīng)內(nèi)標(biāo)的質(zhì)譜參數(shù)Table 2 ESI-MS-MS conditions for the analysis of 4 nitrofuran metabolites and their corresponding internal standards

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品洗滌

水產(chǎn)苗種樣品含水率較多，且樣品基質(zhì)成分復(fù)雜，若當(dāng)水產(chǎn)成品按農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-1—2006《水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定：液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》[16]前處理，直接影響檢測(cè)結(jié)果。若對(duì)水產(chǎn)苗種先用甲醇-水混合溶液（8∶1，V/V）洗滌處理[17]，可以去除樣品均質(zhì)液中黏液、色素等雜質(zhì)，減少分析干擾，防止被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物丟失。加標(biāo)水平為2.5 μg/kg梭子蟹苗種未洗滌處理的色譜圖及洗滌處理后的色譜圖如圖1、2所示。對(duì)比可知，未進(jìn)行洗滌處理的樣品AHD未出峰，AHD-13C3、AOZ-D4，AOZ峰面積小，響應(yīng)值低；而SEM-13C-15N2未分開(kāi)，峰形雜亂。而經(jīng)洗滌處理的樣品基線較平穩(wěn)，除AHD峰面積較小外，其他目標(biāo)物響應(yīng)值高，峰形完整。

圖1 未洗滌處理的2.5μg/kg梭子蟹苗種MRM圖譜Fig.1 MRM ion chromatograms of crab fingerlings (2.5 μg/kg) without washing

圖2 洗滌處理后的2.5μg/kg梭子蟹苗種MRM圖譜Fig.2 MRM ion chromatograms of crab fingerlings (2.5 μg/kg) with washing

2.2 鹽酸用量?jī)?yōu)化

蝦蟹類苗種由于個(gè)體較小，不易去殼，通常帶殼制樣，而殼的碳酸鈣含量很高，能與鹽酸反應(yīng)，使反應(yīng)體系的酸度發(fā)生變化，導(dǎo)致酸水解不完全，衍生化效率降低。實(shí)驗(yàn)分別取5 mL 0.2、0.4、0.6、0.8 mol/L和1.0 mol/L鹽酸溶液水解加標(biāo)水平為2.5 μg/kg的梭子蟹苗種與梭子蟹肌肉樣品，測(cè)定酸水解16 h后的pH值，比較不同濃度鹽酸水解下的回收率，衡量碳酸鈣與鹽酸反應(yīng)的消耗量，以得到蝦蟹類苗種水解所需鹽酸的最佳值。結(jié)果表明，隨著 鹽酸溶液濃度的增大對(duì)梭子蟹肌肉中的4 種硝基呋喃代謝物并不造成影響，5 mL 0.2 mol/L鹽酸溶液足以完全水解肌肉中的蛋白質(zhì)，且有較好的衍生化效果，無(wú)需過(guò)量提高鹽酸濃度。不同濃度的鹽酸溶液對(duì)梭子蟹苗種中AMOZ和AOZ影響不大，無(wú)明顯變化趨勢(shì)；隨著鹽酸濃度增大，梭子蟹苗種中AHD峰面積逐漸增大后趨于平緩，表明之前蛋白質(zhì)并未充分水解；而梭子蟹苗種中SEM濃度的變化略帶波動(dòng)性，因SEM是甲殼類水產(chǎn)品中的內(nèi)源性物質(zhì)，自然存在于甲殼[18]。表3為酸水解16 h后測(cè)定的pH值，由于在梭子蟹肉中5 mL 0.2 mol/L鹽酸溶液足以完全水解肌肉中的蛋白質(zhì)，表明酸水解后pH 2.2是樣品充分酸水解的標(biāo)示；而當(dāng)樣品是梭子蟹苗種時(shí)，酸水解后pH 2.2對(duì)應(yīng)的鹽酸濃度約為0.9 mol/L。最終確定5 mL 0.9 mol/L鹽酸作為蝦蟹類苗種酸水解所需的鹽酸量，其水解后測(cè)定色譜圖見(jiàn)圖3。

表3 樣品在不同濃度鹽酸水解16 h后測(cè)定的pH值Table 3 pH values of samples after 16 h of hydrolysis with different concentrations of hydrochloric acid

圖3 100 mg PSA凈化后2.5μg/kg的梭子蟹苗種MRM圖Fig.3 MRM ion chromatograms of 2.5 μg/kg crab fingerlings purified with 100 mg of PSA

2.3 吸附劑的選擇和優(yōu)化

水產(chǎn)苗種樣品脂類、色素等雜質(zhì)較多，濃縮溶解后，溶液呈混濁狀，需凈化處理后上樣。實(shí)驗(yàn)分別稱取一 定量的PSA、C18、Florisil、Al2O3、MWCNT凈化加標(biāo)水平為2.5 μg/kg的梭子蟹苗種樣品，考察不同吸附劑的凈化效果，比較各藥物的回收率，結(jié)果如圖4所示。MWCNT具有巨大的比表面積和結(jié)構(gòu)特異性，能有效去除色素類等干擾物[19]，但對(duì)AMOZ、SEM、AHD及AOZ的吸附作用也很強(qiáng)；Florisil作為強(qiáng)極性吸附劑，無(wú)法有效去除脂類雜質(zhì)，且對(duì)AMOZ具較強(qiáng)的吸附性。而PSA、C18、Al2O3對(duì)AMOZ、SEM、AHD和AOZ都有較高的回收率，為得到更好的凈化效果和回收率，對(duì)這3 種吸附劑用量進(jìn)行優(yōu)化。分別稱取25、50、75、100 mg和125 mg的PSA、C18、Al2O3凈化加標(biāo)水平為2.5 μg/kg的梭子蟹苗種樣品，觀察凈化液的顏色，透明度，并計(jì)算信噪比（以AMOZ為例），如圖5所示。Al2O3和C18雖有較好的回收率，能去除脂類雜質(zhì)[20]，但凈化效果不明顯，即使加大吸附劑用量，也未得到良好的改善，凈化液仍是混濁狀。PSA作為弱陰離子交換劑，能去除脂肪酸、甾醇類、有機(jī)碳水化合物、色素等雜質(zhì)[21]，凈化效果好，凈化液呈無(wú)色透明狀，且有較高的回收率。當(dāng)PSA用量小于100 mg時(shí)，凈化效果隨用量增大而明顯增大；而超過(guò)100 mg后，趨于平緩。最終選擇100 mg的PSA作為吸附劑，降低樣品基質(zhì)中色素、碳水化合物、脂類等物質(zhì)，也獲得凈化效果和回收率之間較好的平衡。

圖4 吸附劑對(duì)2.5μg/kg梭子蟹苗種中4種硝基呋喃代謝物回收率的影響Fig.4 Influence of different sorbents on the recoveries of 4 nitrofuran metabolites in 2.5 μg/kg crab fingerlings

圖5 吸附劑用量對(duì)2.5μg/kg梭子蟹苗種中AMOZ響應(yīng)值的影響Fig.5 Influence of different sorbent dosages on the SNR of AMOZ in 2.5 μg/kg crab fingerlings

2.4 線性范圍及檢出限

用硝基呋喃4 種代謝物標(biāo)準(zhǔn)使用液配制質(zhì)量濃度分別為0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液，內(nèi)標(biāo)添加質(zhì)量濃度均為5.00 μg/kg，進(jìn)樣后制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，硝基呋喃4 種代謝物的線性方程及相關(guān)系數(shù)如表4所示。結(jié)果表明，硝基呋喃4 種代謝物在0.5～20.0 μg/L內(nèi)線性良好，方法的檢出限理論上為被測(cè)物質(zhì)豐度較弱子離子的信噪比（RSN）不小于3，將加標(biāo)質(zhì)量濃度逐級(jí)稀釋添加于空白樣品中測(cè)定信噪比，最終確定該方法的4 種硝基呋喃類代謝物檢出限均為0.1 μg/kg，定量限均為0.3 μg/kg。

表4 4 種硝基呋喃代謝物的線性方程與相關(guān)系數(shù)Table 4 Linear equations and correlation coefficients of 4 nitrofuran metabolliitteess

2.5 回收率及精密度

準(zhǔn)確稱取2.00 g陰性烏鱧苗種樣品，添加水平為0.5、1.0、5.0 μg/kg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個(gè)添加水平平行測(cè)定6 次，計(jì)算其回收率和精密度，見(jiàn)表5。結(jié)果表明，方法在0.5～5.0 μg/kg添加水平之間的回收率為90.5%～104.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.56%～8.08%。完全符合硝基呋喃類代謝物的檢測(cè)要求。2.6 實(shí)際樣品測(cè)定

表5 4 種硝基呋喃代謝物的平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）Table 5 Average recoveries and relative standard deviations for 4 nitrofuran metabolitess (n=6)

在實(shí)際測(cè)定的34 個(gè)苗種樣品（采自不同養(yǎng)殖場(chǎng)）中包括12 個(gè)烏鱧苗種、12 個(gè)南美白對(duì)蝦苗種和10 個(gè)梭子蟹苗種，檢出8 個(gè)陽(yáng)性樣品。其中陽(yáng)性烏鱧苗種1 個(gè)，SEM含量1.12 μg/kg；陽(yáng)性對(duì)蝦苗種1 個(gè)，AOZ含量2.05 μg/kg；陽(yáng)性梭子蟹苗種6 個(gè)，SEM含量1.24、1.32、1.12、1.40、1.06μg/kg和1.17 μg/kg。由于SEM是甲殼類水產(chǎn)品中的內(nèi)源性物質(zhì)，呋喃西林并不是甲殼類水產(chǎn)品中SEM的唯一來(lái)源，故6 個(gè)陽(yáng)性梭子蟹苗種不能直接作為是否進(jìn)行投藥依據(jù)；而陽(yáng)性烏鱧苗種和陽(yáng)性對(duì)蝦苗種表明部分水產(chǎn)苗種在生長(zhǎng)期就已開(kāi)始投放硝基呋喃類藥物。因此，有必要在水產(chǎn)苗種階段控制硝基呋喃類藥物，為水產(chǎn)品質(zhì)量安全提供重要保障。

3 結(jié) 論

有關(guān)硝基呋喃類代謝物殘留量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道很多，但大多數(shù)研究對(duì)象為水產(chǎn)成品，針對(duì)水產(chǎn)苗種的研究較少，而原有的文獻(xiàn)方法用于水產(chǎn)苗種檢測(cè)并未有較好的效果。為滿足水產(chǎn)苗種中硝基呋喃類代謝物檢測(cè)的需要，根據(jù)水產(chǎn)苗種的差異性和特殊性，建立了分散固相萃取凈化-液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)苗種中硝基呋喃類代謝物的分析方法，前處理優(yōu)化鹽酸用量，采用PSA作為吸附劑凈化分析物，方法重復(fù)性好，靈敏度高，滿足硝基呋喃類代謝物的檢測(cè)要求。

參考文獻(xiàn)：

[1] 葛寶坤, 王云鳳, 常春艷, 等. 測(cè)定雞肉、水產(chǎn)品中四種硝基呋喃類藥物殘留量的固相萃取-液相色譜法[J]. 分析測(cè)試學(xué)報(bào), 2003, 22(5): 91-93.

[2] 孫濤, 胡開(kāi)峰, 喬昆云, 等. 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中硝基呋喃代謝物殘留[J]. 分析儀器, 2010, 29(5): 27-31.

[3] 彭濤, 儲(chǔ)曉剛, 楊強(qiáng), 等. 高效液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定奶粉中硝基呋喃代謝物[J]. 分析化學(xué), 2005, 33(8): 1073- 1076.

[4] 張秀妍, 馬琳, 王慧龍. 海參和海參苗種中硝基呋喃類代謝物殘留的液質(zhì)聯(lián)用檢測(cè)法[J]. 口岸衛(wèi)生控制, 2012, 17(6): 24-28.

[5] 林黎明, 林回春, 劉心同, 等. 固相萃取高效液相色譜-質(zhì)譜法測(cè)定動(dòng)物組織中硝基呋喃代謝產(chǎn)物[J]. 分析化學(xué), 2005, 33(5): 707-710.

[6] 王媛, 蔡友瓊, 賈東芬, 等. 高效液相色譜法檢測(cè)水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量[J]. 分析測(cè)試實(shí)驗(yàn)室, 2009(12): 86-90.

[7] 丁磊, 蔣俊樹(shù), 顧亮, 等. 高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法快速測(cè)定水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物研究[J]. 現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技, 2010(11): 336-339.

[8] ALEXANDER L, PETER Z, WOLFGANG L. Determination of the metabolites of nitrofuran antibiotics in animal tissue by highperformance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography A, 2001, 939(1): 49-58.

[9] 楊琳, 傅紅, 劉強(qiáng), 等. 水產(chǎn)品及其苗種中硝基呋喃代謝物的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定[J]. 食品科學(xué), 2010, 31(12): 206-211.

[10] 錢卓真, 位紹紅, 余穎, 等. 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定鮑魚(yú)中硝基呋喃類代謝物殘留量[J]. 福建水產(chǎn), 2010, 6(2): 43-49.

[11] JANE K F, JOSE L D, MAURO S, et al. Determination of nitrofuran metabolites in poultry muscle and eggs by liquid chromatographytandem mass spectrometry[J]. Journal of Chromatography B, 2005, 824(1): 30-35.

[12] 孫言春, 張潔, 許憲祝, 等. 固相萃取液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留研究[J]. 中國(guó)漁業(yè)質(zhì)量與標(biāo)準(zhǔn), 2011, 2(1): 54-59.

[13] Commission Decision 93/256 /EEC. Analysis with dialysis and on-line HPLC for determining residues of nitromidazoles and nitrofurans in poultry (chickens, ducks, and turkeys) meat[S].

[14] 陳劍剛, 白艷玲, 梁素丹, 等. 固相萃取-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物[J]. 中國(guó)食品衛(wèi)生雜志, 2013, 25(4): 338-343.

[15] 祝偉霞, 袁萍, 楊冀州, 等. 固相支撐液液萃取-平行蒸發(fā)前處理技術(shù)測(cè)定動(dòng)物源性食品中四種硝基呋喃類代謝物[J]. 食品科技, 2011, 36(2): 300-303

[16] 農(nóng)業(yè)部783號(hào)公告-1—2006水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

[17] 農(nóng)業(yè)部781號(hào)公告-4—2006動(dòng)物源食品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法[S].

[18] 于慧娟, 李冰, 蔡友瓊, 等. 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定甲殼類水產(chǎn)品中氨基脲的含量[J]. 分析化學(xué), 2012, 40(10): 1530-1535.

[19] 應(yīng)永飛, 朱聰英, 陳慧華, 等. 多壁碳納米管分散固相萃取結(jié)合LCMS/MS測(cè)定飼料中11種β-受體激動(dòng)劑[J]. 中國(guó)畜牧雜志, 2013, 49(9): 68-73.

[20] 張毅, 岳振峰, 藍(lán)芳, 等. 分散固相萃取凈化與液相色譜/串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定牛奶中8 類禁用藥物殘留[J]. 分析化學(xué), 2012, 40(5): 724-729.

[21] 陳紅平, 劉新, 王川丕, 等. 分散固相萃取-超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶葉中赤霉酸和α-萘乙酸[J]. 分析化學(xué), 2012, 40(7): 1059-1064.

Determination of Nitrofuran Metabolite Residues in Aquatic Fingerlings by High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry with Dispersive Solid Phase Ex traction

YAN Zhong-yong1,2, ZHANG Xiao-jun1,2,*, MEI Guang-ming1,2, LI Pei-pei1,2, LONG Ju1,2, ZHU Yin1,2, WANG Jian3
(1. Marine Fisheries Research lnstitute of Zhejiang Province, Zhoushan 316021, China; 2. Key Laboratory of Sustainable Utilization of Technology Research for Fishery Resourceof Zhejiang Province, Zhoushan 316021, China; 3. College of Food Science and Biotechnology, Zhejiang Gongshang University, Hangzhou 310035, China)

A method has been developed for the determination of four metabolites of nitrofuran, i.e. semicarbazide (SEM), 3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidineone (AMOZ), 3-amino-2-oxazolidinone (AOZ) and 1-aminohydantoin hydrochloride (AHD) in aquatic fi ngerlings, by high performance liquid chromatography-mass spectrometry with dispersive solid phase extraction. Samples were washed with a mixture of methanol-water (8:1, V/V), subjected to HCl acidolysis and derivatized using 2-nitrobenzaldehyde. The derivative was extracted with ethyl acetate, then concentrated and cleaned up by dispersive solid phase extraction. The analysis was carried out in the multi-reaction monitoring (MRM) mode and internal standard isotope dilution method was used for quantifi cation. Good linearity was obtained in the correlations between the peak areas and concentrations of the four metabolites of nitrofuran antibiotics over the concentration range from 0.5 to 20.0 μg/L, with correlation coeffi cients above 0.997. The limits of detection (LODs) for the four compounds were all 0.1 μg/kg. The range of average recoveries was between 90.5% and 104.5%, with relative standard deviations (RSDs) between 1.56% and 8.08%. The effi cient and simple method could be used to identify and quantify the metabolites of nitrofuran antibiotics in aquatic fi ngerlings with satisfactory sensitivity and repeatability.

dispersive solid phase extraction; high performance liquid chromatography-mass spectrometry; aquatic fi ngerlings; nitrofuran metabolites

TS201.6

A

1002-6630（2014）16-0153-07

10.7506/spkx1002-6630-201416030

2013-10-22

浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（LQ13C200004）；浙江省科技計(jì)劃項(xiàng)目（2013C37072）

嚴(yán)忠雍（1990—），男，助理工程師，學(xué)士，研究方向?yàn)闈O業(yè)環(huán)境監(jiān)測(cè)和水產(chǎn)品質(zhì)量安全。

E-mail：yzy123123123@126.com

*通信作者：張小軍（1982—），男，工程師，博士，研究方向?yàn)樗a(chǎn)品質(zhì)量安全和標(biāo)準(zhǔn)化。E-mail：xiaojun3627@163.com