玉郎傘提取物抗炎作用研究

曾 嶸，黃建春，陳春霞，付書婕，黃仁彬*

1廣西醫科大學藥學院;2 廣西江濱醫院，南寧 530021

玉郎傘是一種尚未開發利用的民間草藥，為蝶形花科植物疏葉崖豆［Millettia pulchra Kurz var.laxior (Dunn)Z.Wei］的塊根，用于治療高血壓、跌打損傷、消化不良、病后虛弱等。研究表明本品具有保護心肌、保肝及抗自由基、調節免疫等作用［1-3］。本實驗主要研究玉郎傘水提物及從玉郎傘中分離提取三種有效成份——黃酮、皂苷、多糖的抗炎作用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

JA1003 型上皿電子天平(上海天平儀器廠);DH-X 型電熱恒溫干燥箱(上海躍進醫療器械一廠)。地塞米松磷酸鈉注射液(天津藥業集團新鄭股份有限公司);角叉菜膠(sigma 公司);巴豆油(本實驗室自制);玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖均由本課題研究小組自行提取，另文報道，并取得專利一項［4］。

1.2 動物

小鼠，20～25 g，雌雄兼用，由本校動物實驗中心提供。飼養條件2 級，室溫保持在22～24 ℃，相對濕度50%，光照時間7:00～17:00。試驗動物生產許可證:SCXK 桂2003-0003。

2 實驗方法

2.1 小鼠足跖腫脹法

參照文獻方法［5］，取小鼠100 只，隨機分成10組，每組10 只，雌雄各半，分別為空白組(生理鹽水，10 mL/kg);陽性組(地塞米松，5 mg/kg);玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖(以上四種藥物大劑量均為30 g 生藥/kg，小劑量均為15 g 生藥/kg)。分組后即開始灌胃給藥，每天給藥一次，連續7 d，末次給藥后1 h 每只小鼠以0.5%角叉菜膠液(用生理鹽水配制)0.1 mL 皮下注射于左后足趾部致炎。致炎5 h 后處死小鼠，剪取后雙足等同部位，稱重，以左右足重量之差為腫脹度(mg)，并計算用藥組腫脹抑制率，評價藥物對角叉菜膠所致足腫脹的影響。

2.2 小鼠耳片腫脹法

參照文獻方法［6］，取小鼠100 只，隨機分為10組，每組10 只，雌雄各半，分組及給藥劑量同上。每天灌胃給藥1 次，連續7 d，末次給藥后1 h，用混合致炎液(內含2%巴豆油、20%無水乙醇、5%蒸餾水、73%乙醚)涂于小鼠左耳前后兩面，每鼠50 μL，5 h 后將小鼠頸椎脫臼致死，延耳廓基線剪下兩耳，用9 mm 直徑打孔器分別在同一部位打下圓耳片，稱重。以耳片腫脹度(兩耳片重量之差)作為炎癥指標，計算用藥組腫脹抑制率，來評價藥物對巴豆油所致耳廓炎癥的影響。

2.3 對小鼠棉球肉芽腫形成的影響［6］

取小鼠100 只，雌雄各半。20%烏拉坦腹腔注射麻醉(0.05 mL/10g 體重)，在無菌條件下作胸部切口，將5 mg 的滅菌棉球植入右側腋窩部皮下。術后選合格小鼠隨機分為10 組，分組同上。術后第2 d，各組分別給藥(i.g.)，劑量同上，每天一次，連續7 d。于第8 d 處死小鼠，剝離并取出棉球肉芽腫組織，放入90 ℃烘箱內干燥1 h 后取出精確稱重，減去原棉球重量即為肉芽腫凈重(mg)。以mg/10 g體重表示肉芽腫重量。

2.4 統計方法

3 實驗結果

3.1 玉郎傘水提物及各成份對小鼠足跖腫脹的抑制作用

實驗結果如表1、圖1 所示，除黃酮、多糖低劑量組外，其余各組與空白組比較，小鼠足跖腫脹度均明顯降低。說明YLS 水提物及三種成份對角交菜膠所致小鼠足跖腫脹有較好的抑制作用。

表1 玉郎傘水提物及各成份對小鼠足跖腫脹的抑制作用(，n=10)Table 1 The inhibitory effects of YLS water extract and three purified components on hind paw edema in mice(，n=10)

注:與空白組對照，* P＜0.05，＊＊P＜0.01。Note:Compare with blank，* P＜0.05，＊＊P＜0.01.

圖1 玉郎傘水提物及各成份對小鼠足跖腫脹的抑制作用Fig.1 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on hind paw edema in mice

3.2 玉郎傘水提物及各成份對耳片腫脹的抑制作用

實驗結果如表2、圖2 所示，除皂苷、多糖低劑量組外，其余各組與空白組比較，小鼠耳片腫脹度均明顯降低。說明YLS 水提物及三種成份對巴豆油所致小鼠耳片腫脹有較好的抑制作用。

表2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠耳片腫脹的抑制作用(，n=10)Table 2 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on ear swelling in mice(，n=10)

表2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠耳片腫脹的抑制作用(，n=10)Table 2 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on ear swelling in mice(，n=10)

注:與空白組對照，* P＜0.05，＊＊P＜0.01。Note:Compare with blank，* P＜0.05，＊＊P＜0.01.

圖2 玉郎傘水提物及各成份對小鼠耳片腫脹的抑制作用Fig.2 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on ear swelling in mice

3.3 玉郎傘各成份對小鼠棉球肉芽腫形成的抑制作用

實驗結果如表3、圖3 所示，除水提物、皂苷低劑量組外，其余各組與空白組比較，小鼠棉球肉芽腫腫脹度均明顯降低。說明YLS 水提物及三種成份對小鼠棉球肉芽腫的形成有較好的抑制作用。

4 討論

炎癥是機體組織受損傷時所發生的一系列保護性應答，以局部血管為中心，典型特征是紅、腫、熱、痛和功能障礙，可參與清除異物和修補組織等。巴豆油致小鼠耳片腫脹及角叉菜膠誘發小鼠足爪腫脹是常用的急性炎癥模型。主要表現為局部的充血、水腫及滲出等病理反應過程，是應用最多的研究藥物抗炎作用的方法之一。研究結果表明，除了YLS皂苷低劑量組及多糖低劑量組外，其余各組藥物均可顯著抑制小鼠耳片腫脹及足爪腫脹，表明玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖具有較強的抑制急性炎癥的作用。小鼠棉球肉芽腫模型是一亞急性(慢性)炎癥模型，是發展局部異物持續刺激的遲緩性變態反應，有異物的病灶內表現為肉芽腫的形成。實驗結果表明，除玉郎傘水提物低劑量組及皂苷低劑量組外，其余各組藥物均能顯著抑制小鼠棉球肉芽腫的生長，說明玉郎傘水提物、黃酮、皂苷、多糖對慢性炎癥也有較強的抑制作用。

表3 玉郎傘各成份對小鼠棉球肉芽腫形成的抑制作用(，n=10)Table 3 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on cotton granuloma in mice

表3 玉郎傘各成份對小鼠棉球肉芽腫形成的抑制作用(，n=10)Table 3 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on cotton granuloma in mice

注:與空白組對照，* P＜0.05，＊＊P＜0.01。Note:Compare with blank，* P＜0.05，＊＊P＜0.01.

圖3 玉郎傘各成份對小鼠棉球肉芽腫形成的抑制作用Fig.3 The inhibitory effects of TYLS and three purified components on cotton granuloma in mice

1 Li JL(李健玲)，Chen ZN(陳兆霓)，Lv JH(呂紀華)，et al.Effect of saponin of Yulangsan on myocardial ischemia reperfusion injury in isolated rat hearts.Chin J Exp Tradit Med Form(中國實驗方劑學雜志)，2012，18:250-253.

2 Duan XQ (段小群)，Jiao Y(焦陽)，Huang RB(黃仁彬)，et al.Effects of Yulangsan polysaccharide on proliferation and collagen I production of hepatic stellate cells.Chin J Mod Med(中國現代醫學雜志)，2008，18:423-425.

3 Cai WE(蔡文娥)，Zhang XD(張緒東)，Huang RB(黃仁彬)，et al.Study on immunological effect of Yulangsan polysaccharides.Lishizhen Med Mater Med Res (時珍國醫國藥)，2011，22:1681-1683.

4 Huang RB.Preparation and application of Yulangsan extracts(玉郎傘提取物的制備及應用).CN200710034771.2，2007-04-16.

5 Chen Q.Research Methods in Pharmacology of Chinese Materia Medica，Vol 3(中藥藥理研究方法學，3 卷)Beijing:People's Publishing House，2011.353.

6 Wolfgang HV.Drug Discovery and Evalution-Pharmacological Assays(藥理學實驗指南-新藥發現和藥理學評價).Beijing:Science Publishing House，2001.535，583.