牡丹籽餅粕中芍藥苷類(lèi)成分及其大孔吸附樹(shù)脂純化研究

秦愛(ài)霞 ，紀(jì)殊晶，毛文岳，高 哲，康小虎，賈亞楠，陳 燦，崔 同*

1河北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科技學(xué)院，保定 071000;2菏澤堯舜牡丹生物科技有限公司，菏澤 274000

牡丹籽為毛茛科芍藥屬灌木牡丹(Paeonia sufruticosaAndr.)的種子，中國(guó)民間有用牡丹籽美白皮膚，緩解腰腿疼痛，治療口腔潰瘍等的記載［1］。研究表明牡丹籽中有很多活性成分，如芍藥苷(圖1)、芍藥內(nèi)酯苷、6'-O-β-D-葡萄糖芍藥內(nèi)酯苷、βgentiobiosylpaeoniflorin［1-3］等。這些芍藥苷類(lèi)成分具有抗氧化、抗癌［4］、抗炎、抗過(guò)敏、抗凝血、免疫調(diào)節(jié)［5］、保護(hù)慢性動(dòng)脈腦缺血［6］、改善記憶［7］、減緩輻射誘導(dǎo)的胸腺細(xì)胞［8］和肺細(xì)胞損傷［9］等很多作用，可用于開(kāi)發(fā)新型藥物制劑。目前芍藥苷多以白芍和赤芍等為原料提取［10-12］，這種途徑受種植周期和資源所限生產(chǎn)成本較高。

近年來(lái)富含亞麻酸和亞油酸的牡丹籽油已被批準(zhǔn)為新食品資源［13，14］，而且高產(chǎn)籽用牡丹品種已大面積推廣種植［15］，工業(yè)規(guī)模的超臨界萃取油脂加工也已經(jīng)投產(chǎn)。而以牡丹籽粕為原料提取藥用成分芍藥苷的相關(guān)研究卻尚未見(jiàn)報(bào)道。

大孔樹(shù)脂吸附法具有選擇性強(qiáng)、吸附容量大、吸附速度快、解吸容易、成本低等優(yōu)點(diǎn)［16］，在芍藥藥用成分提取分離中曾被采用［11，12］。本研究擬針對(duì)牡丹籽餅粕的特點(diǎn)，對(duì)其中芍藥苷類(lèi)成分進(jìn)行定性定量分析，并通過(guò)篩選樹(shù)脂、考察靜態(tài)、動(dòng)態(tài)吸附與解吸性能，建立一套適宜牡丹籽粕中芍藥苷類(lèi)成分提取純化的新方法，為牡丹籽天然產(chǎn)物資源綜合開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)根據(jù)。

圖1 芍藥苷的分子結(jié)構(gòu)Fig.1 The structure of paeoniflorin

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

牡丹籽粕由山東菏澤堯舜牡丹生物科技有限公司提供;大孔吸附樹(shù)脂HPD-100、HPD-200A、HPD-600A、D-101、D101A、HPD-750、HPD-826 以及HPD-500 型，由滄州寶恩化工有限公司提供，ADS-7、ADS-17 和AB-8 型由天津南開(kāi)合成科技有限公司提供;氘代二甲基亞砜、四甲基硅，北京博雅大北科技開(kāi)發(fā)公司;高效液相色譜(HPLC)流動(dòng)相用甲醇為色譜純;水為三蒸水;其余試劑為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

分析型HPLC，Agilent 1200 型(安捷倫公司，美國(guó)加州帕羅阿托市)。配用CO-3010 柱恒溫控制箱(天津美瑞泰克科技有限公司)。制備型HPLC，LC3000 型(北京創(chuàng)新通恒科技有限公司)，配Sino-Chrom ODS-BP C18(300 mm × 20.0 mm id，10 μm)色譜柱。LC-MS 系統(tǒng)，由Agilent 1200 型LC、Agilent 6310 型MS 檢測(cè)器、ESI 電離源(Agilent 公司)組成。核磁共振儀，Avance III 600 MHz 型，Bruker 公司生產(chǎn)。AB10X-B 恒流泵，常州飛爾林流體有限公司;玻璃中壓層析柱(10 mm × 300 mm)，上海楚定分析儀器有限公司。

1.3 對(duì)照品的制備

稱取過(guò)40 目篩的牡丹籽粕1 kg，以料液比1:10 加入70%(v/v)乙醇溶液，室溫下浸泡8 h，抽濾，殘?jiān)瓷鲜鰲l件重復(fù)提取兩次，合并濾液，在55 ℃水浴下真空濃縮，得牡丹籽粕乙醇提取液備用。將濃縮液調(diào)整至8.0 mg/mL，用HPD-200A 大孔吸附樹(shù)脂純化，收集乙醇洗脫液經(jīng)濃縮、過(guò)0.45 μm 濾膜后，用制備HPLC 制備純化，色譜條件:流動(dòng)相為甲醇:水=40 ∶60(v/v，含0.05%甲酸)，流速:10 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm，柱溫:室溫(25 ℃)，分別收集各色譜峰，再分別重復(fù)進(jìn)樣純化，用分析型HPLC 以峰面積百分比法檢測(cè)餾分的純度均在95%以上，將收集液減壓濃縮，凍干，制得純化合物用作對(duì)照品。

1.4 對(duì)照品的LC-MS 分析

LC 分析條件:色譜柱為Hypersil BDS C18(100 mm × 2.1 mm id，3 μm);柱溫30 ℃;流動(dòng)相為40%甲醇(v/v，含0.05%甲酸)，流速0.6 mL/min;二極管陣列檢測(cè)器;檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm;進(jìn)樣量5 μL。

MS 分析條件:ESI 離子源，陰離子檢測(cè)模式，噴霧器壓力:40 psi;干燥氣體溫度:350 ℃，流速:12 L/min;離子阱質(zhì)量分析器掃描范圍:m/z=50～1000。

1.5 對(duì)照品的1H NMR 分析

稱取制備的對(duì)照品各5 mg，分別用氘代二甲基亞砜溶解，以四甲基硅為基準(zhǔn)試劑進(jìn)行1H NMR 分析。

1.6 HPLC 定量方法

精密稱取對(duì)照品(見(jiàn)1.3)，用40%甲醇配制成2.0 mg/mL 儲(chǔ)備液，取儲(chǔ)備液適當(dāng)稀釋進(jìn)樣，峰面積外標(biāo)法定量。色譜條件:色譜柱:Kromasil C18(200 mm × 4.6 mm id，5 μm);流動(dòng)相:40%甲醇水溶液(v/v);柱溫:30 ℃;檢測(cè)波長(zhǎng):230 nm;流速:0.8 mL/min;進(jìn)樣量:5 μL。

1.7 靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線

準(zhǔn)確稱取預(yù)處理［16］的樹(shù)脂2.00 g(濕重)于100 mL 具塞磨口三角瓶中，加入30 mL 樣液(按1.3所述方法制得的乙醇提取液)，室溫下以100 rpm 頻率振搖吸附，每隔30 min 取上清液，采用1.6 所述方法測(cè)定其中芍藥苷的含量，繪制樹(shù)脂的吸附量隨時(shí)間變化的曲線。

1.8 大孔樹(shù)脂純化芍藥苷的條件優(yōu)化

1.8.1 動(dòng)態(tài)吸附條件的優(yōu)化

稱取適量經(jīng)預(yù)處理的大孔吸附樹(shù)脂濕法裝柱(10 mm × 200 mm)，用去離子水平衡樹(shù)脂柱，上樣，分管收集流出液，每1/2 柱床體積(BV)為1 管，用1.6 所述方法測(cè)定芍藥苷含量。當(dāng)流出液中芍藥苷濃度達(dá)上樣濃度的10%時(shí)，即認(rèn)為已達(dá)到吸附泄漏點(diǎn)，停止上樣。通過(guò)計(jì)算吸附量考察樣品溶液濃度、上樣速度對(duì)吸附效果的影響。

1.8.2 洗脫條件的優(yōu)化

采用不同濃度的乙醇溶液在恒溫振蕩器中對(duì)吸附飽和的樹(shù)脂進(jìn)行解吸，并用1.6 所述方法測(cè)定溶液中芍藥苷含量計(jì)算解吸率，確定最佳洗脫液濃度并考察洗脫液用量對(duì)洗脫效果的影響。

1.9 樹(shù)脂重復(fù)使用周期的考察

按照最優(yōu)的吸附和洗脫條件，取芍藥苷粗提液在同一根樹(shù)脂柱上反復(fù)進(jìn)行活化、吸附、洗脫，重復(fù)操作10 次，分別測(cè)定吸附液和解吸液中芍藥苷濃度，計(jì)算吸附率和解吸率。收集洗脫液，濃縮，干燥，分別計(jì)算芍藥苷的純度，評(píng)價(jià)樹(shù)脂重復(fù)使用的吸附能力和效果。

2 結(jié)果與討論

2.1 化合物1、2、3 和4 的結(jié)構(gòu)分析

采用1.3 所述的提取和純化方法，收集12、14、17 和21 min 左右的色譜餾分，精制后制得1、2、3 和4 號(hào)化合物(色譜圖見(jiàn)圖2)。采用1.4 方法對(duì)四種化合物進(jìn)行LC-MS 分析得到化合物的紫外吸收光譜和離子質(zhì)荷比數(shù)據(jù)，采用1.5 方法進(jìn)行1H NMR分析得到化合物的化學(xué)位移、偶合常數(shù)等信息，結(jié)果如下:

化合物1 UV nm λmax232，274 (MeOH);(-)ESI-MSm/z687 ［M+HCOO］-，641 ［M-H］-;1H NMR (DMSO-d6，600 MHz):δ 1.82 (1H，d，J=15.0 Hz，H-3α)，2.36 (1H，dd，J=15.0，6.4 Hz，H-3β)，4.19 (1H，d，J=7.8 Hz，H-4)，2.76 (1H，m，H-5)，2.09 (1H，d，J=10.9 Hz，H-7α)，2.67(1H，t，J=9.3，9.3 Hz，H-7β)，4.62 (1H，d，J=12.0 Hz，H-8α)，4.56 (1H，s，H-8β)，1.38 (3H，s，H-10)，4.43 (1H，d，J=7.7 Hz，H-1')，3.00～3.08(1H，m，H-2'，4'，5')，3.28 (1H，t，J=8.8，8.8 Hz，H-3')，4.53 (1H，dd，J=4.4，10.5 Hz H-6'α)，3.68 (1H，dd，J=4.7，11.3 Hz，H-6'β)，8.02 (2H，d，J=7.3 Hz，H-2'')，7.56 (2H，t，J=7.7，7.7 Hz，H-3'')，7.68 (1H，t，J=7.4，7.4 Hz，H-4'')，7.56 (2H，t，J=7.7，7.7 Hz，H-5'')，8.02 (2H，d，J=7.3 Hz，H-6'')，5.10 (1H，d，J=5.2 Hz，H-1''')，3.43 (1H，m，H-2''')，3.08～3.15 (2H，m，H-3'''，4''')，3.43 (1H，m，H-5''')，5.13 (1H，d，J=4.7 Hz，H-6'''α)，4.62 (1H，s，H-6'''β)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］報(bào)道的結(jié)果吻合，鑒定為化合物1 為6'-O-β-D-葡萄糖芍藥內(nèi)酯苷。

化合物2 UV nm λmax232，274 (MeOH);(-)ESI-MSm/z525［M+HCOO］-，479［M-H］-;1H NMR (DMSO-d6，600 MHz):δ 1.85 (1H，d，J=15.0 Hz，H-3α)，2.30 (1H，dd，J=6.6，15.1 Hz，H-3β)，4.12 (1H，t，J=5.5，5.5 Hz，H-4)，2.78(1H，m，H-5)，1.91 (1H，d，J=10.8 Hz，H-7α)，2.68 (1H，dd，J=7.9，10.7 Hz，H-7β)，4.56 (1H，d，J=7.2 Hz，H-8α)，4.64 (1H，m，H-8β)，1.34(3H，m，H-10)，4.41 (1H，t，J=7.7 Hz，H-1')，3.01～3.06 (1H，m，H-2'，3'，4'，5')，3.65 (1H，d，J=11.3 Hz，H-6'α)，3.39 (1H，s，H-6'β)，8.02(2H，d，J=7.2 Hz，H-2'')，7.55 (2H，dd，J=8.3，15.9 Hz，H-3'')，7.68 (1H，t，J=7.4，7.4 Hz，H-4'')，7.55 (2H，dd，J=8.3，15.9 Hz，H-5'')，8.02 (2H，d，J=7.2 Hz，H-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［17］結(jié)果吻合，鑒定為化合物芍藥內(nèi)酯苷。

化合物3 UV nm λmax232，274 (MeOH);(-)ESI-MSm/z687 ［M+HCOO］-，641 ［M-H］-;1H NMR (DMSO-d6，600 MHz):δ 1.64 (1H，d，J=12.2 Hz，H-3α)，2.07 (1H，d，J=12.2 Hz，H-3β)，2.43 (1H，d，J=6.4 Hz，H-5)，1.93 (1H，d，J=10.6 Hz，H-7α)，2.39 (1H，m，H-7β)，4.67 (1H，d，J=12.2 Hz，H-8α)，4.62 (1H，d，J=12.2 Hz，H-8β)，5.33 (1H，s，H-9)，1.28 (1H，s，H-10)，4.42(1H，d，J=7.7 Hz，H-1')，3.04 (1H，m，H-2')，3.17 (1H，m，H-3')，3.11(1H，m，H-4')，2.97 (1H，m，H-5')，3.98 (1H，d，J=10.9 Hz，H-6'α)，3.44(1H，s，H-6'β)，7.99 (2H，t，J=8.0，8.0 Hz，H-2'')，7.56 (2H，t，J=7.8，7.8 Hz，H-3'')，7.69(1H，t，J=7.4，7.4 Hz，H-4'')，7.56 (2H，t，J=7.8，7.8 Hz，H-5'')，7.99 (2H，t，J=8.0，8.0 Hz，H-6'')，4.22 (1H，d，J=7.8 Hz，H-1''')，3.04(1H，m，H-2''')，3.17 (1H，m，H-3''')，3.11 (1H，m，H-4''')，3.33 (1H，m，H-5''')，3.68 (1H，d，J=11.5 Hz，H-6'''α)，3.48 (1H，d，J=7.7，11.6 Hz，H-6'''β)。與文獻(xiàn)［18］吻合，鑒定該化合物為β-gentiobiosylpaeoniflorin。

化合物4 UV nm λmax231，274 (MeOH);(-)ESI-MSm/z525 ［M+HCOO］-，479 ［M-H］-;1H NMR (DMSO-d6，600 MHz):δ 1.82 (1H，d，J=10.7 Hz，H-3α)，2.06(1H，t，J=10.4，10.7 Hz，H-3β)，2.44 (1H，t，J=10.1，10.1 Hz，H-5)，1.65(1H，d，J=12.1 Hz，H-7α)，2.38 (1H，dd，J=6.8，10.6 Hz，H-7β)，4.65 (2H，m，H-8)，5.35 (1H，d，J=23.6 Hz，H-9)，1.24 (3H，m，H-10)，4.39(1H，d，J=7.7 Hz，H-1')，2.93～3.15 (1H，m，H-2'，3'，4'，5')，3.39 (1H，d，J=6.2 Hz，H-6'α)，3.65 (1H，d，J=10.8 Hz，H-6'β)，7.99 (2H，t，J=7.8，7.8 Hz，H-2'')，7.55 (2H，dd，J=8.6，16.3 Hz，H-3'')，7.69 (1H，t，J=7.4，7.4 Hz，H-4'')，7.55 (2H，dd，J=8.6，16.3 Hz，H-5'')，7.99 (2H，t，J=7.8，7.8 Hz，H-6'')。1H NMR 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［19］報(bào)道的芍藥苷數(shù)據(jù)吻合，鑒定該化合物結(jié)構(gòu)為芍藥苷。

圖2 純化的6'-O-β-D-葡萄糖芍藥內(nèi)酯苷(1)、芍藥苷內(nèi)酯(2)、β-gentiobiosylpaeoniflorin(3)及芍藥苷(4)的HPLC 色譜圖Fig.2 HPLC chromatograms of purified 6'-O-β-D-glucopyranosylalbiflorin (1)，albiflorin (2)，β-gentiobiosylpaeoniflorin (3)and paeoniflorin (4)

2.2 牡丹籽粕粗提液成分分析

按1.3 所述方法對(duì)牡丹籽粕進(jìn)行乙醇提取，得到濃縮液480 mL。用1.6 所述方法對(duì)提取液成分進(jìn)行HPLC 分析，結(jié)果如圖3 所示，1～4 號(hào)色譜峰分別為6'-O-β-D-葡萄糖芍藥內(nèi)酯苷、芍藥內(nèi)酯苷、β-gentiobiosylpaeoniflorin 和芍藥苷，以芍藥苷含量最高，占提取物干重的8.36%(按1.6 方法計(jì)算)，其余3 種成分含量分別為3.43%、3.92%和2.50%。因此本文試驗(yàn)以芍藥苷為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用樹(shù)脂吸附法對(duì)牡丹籽粕粗提物進(jìn)行純化。

圖3 牡丹籽餅粕醇提取物的HPLC 色譜圖Fig.3 HPLC chromatogram of crude extract of seed cakes of P.sufruticosa

2.3 樹(shù)脂的篩選

樹(shù)脂的極性和空間結(jié)構(gòu)是影響其吸附特性的重要因素［20］。本試驗(yàn)考察了極性、中極性、弱極性的11 種大孔吸附樹(shù)脂對(duì)芍藥苷的靜態(tài)吸附與解吸性能，結(jié)果見(jiàn)表1。由表1 可以看出，隨著樹(shù)脂極性的逐漸增強(qiáng)，其對(duì)芍藥苷的吸附能力會(huì)很有規(guī)律的逐漸下降，其中非極性的HPD-200A 對(duì)芍藥苷的靜態(tài)吸附量最高，氫鍵型的ADS-17 最低。95%乙醇對(duì)各樹(shù)脂的解吸能力差別較大且沒(méi)有明顯規(guī)律，其中HPD-200A 和HPD-750 的解吸率較高達(dá)到90%以上，而AB-8 和ADS-17 兩種樹(shù)脂的解吸率較低，不足30%。綜合吸附量和解吸率的結(jié)果，選用HPD-200A 樹(shù)脂用于芍藥苷純化的后續(xù)試驗(yàn)。

表1 各種樹(shù)脂的類(lèi)型、吸附量及解吸率Table 1 Type，adsorption capacity and desorption rate of the 11 investigated resins

2.4 靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線

以吸附時(shí)間為橫坐標(biāo)，吸附量為縱坐標(biāo)作圖，得到HPD-200A 大孔吸附樹(shù)脂對(duì)芍藥苷的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線，如圖4 所示。由圖4 可見(jiàn)，HPD-200A 大孔吸附樹(shù)脂可快速吸附芍藥苷，30 min 內(nèi)變化迅速，1 h 達(dá)到吸附平衡。

圖4 HPD-200A 樹(shù)脂對(duì)芍藥苷的靜態(tài)吸附動(dòng)力學(xué)曲線ig.4 The kinetic curve of static adsorption of HPD-200A resin

2.5 大孔樹(shù)脂純化條件的優(yōu)化

2.5.1 上樣濃度對(duì)吸附效果的影響

分別以濃度為4.0、6.2、7.4、8.5 和9.6 mg/mL的芍藥苷粗提液以1/16 BV/min 的流速上樣進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，每1/2 BV 收集一管，測(cè)定其中芍藥苷的濃度，考察上樣濃度對(duì)吸附效果的影響。以收集管數(shù)為橫坐標(biāo)、流出液中芍藥苷濃度與上樣液中芍藥苷濃度之比為縱坐標(biāo)，繪制吸附透過(guò)曲線，結(jié)果見(jiàn)圖5。

圖5 不同濃度的芍藥苷樣液在HPD-200A 樹(shù)脂柱上的吸附透過(guò)曲線Fig.5 The adsorption breakthrough curve of different concentrations of paeoniflorin solutions on HPD-200A resin column

由圖5 可知，隨著上樣濃度的增加，穿透點(diǎn)逐漸提前，在濃度高于8.5 mg/mL 時(shí)，流出液中芍藥苷濃度隨上樣量的增大快速增加，而濃度低于6.2 mg/mL 時(shí)，流出液中芍藥苷濃度增加緩慢。上樣濃度過(guò)低，樹(shù)脂出現(xiàn)泄漏點(diǎn)緩慢，達(dá)到吸附飽和時(shí)所需時(shí)間較長(zhǎng);濃度過(guò)高，樹(shù)脂的泄漏點(diǎn)出現(xiàn)較早，樹(shù)脂未能充分吸附，使其利用率降低。因此，綜合以上因素本試驗(yàn)選擇8.0 mg/mL 作為上樣液的濃度，上樣體積為4.5 倍柱體積。

2.5.2 流速對(duì)吸附效果的影響

將濃度為8.0 mg/mL 的提取液分別以0.5、1、1.5、2、2.5 mL/min 流速進(jìn)行動(dòng)態(tài)吸附，比較不同流速對(duì)吸附效果的影響，繪制吸附透過(guò)曲線，結(jié)果見(jiàn)圖6。由圖6 可知，隨著流速增加泄漏點(diǎn)的出現(xiàn)會(huì)逐漸提前，經(jīng)計(jì)算其樹(shù)脂的吸附量會(huì)逐漸減少，這是因?yàn)榱魉龠^(guò)大時(shí)上樣液中的芍藥苷未能被樹(shù)脂充分吸附，造成吸附效率降低。較小的流速雖然有利于芍藥苷的充分吸附，但操作時(shí)間會(huì)相應(yīng)延長(zhǎng)，生產(chǎn)效率低。綜合考慮工作效率和吸附效果，我們推薦采用1 mL/min 的上樣速度較為適合，大約相當(dāng)于1/16 BV/min。

圖6 不同上樣流速下芍藥苷在HPD-200A 樹(shù)脂柱上的吸附透過(guò)曲線Fig.6 The adsorption breakthrough curve of paeoniflorin solutions with different flow rates on HPD-200A resin column

2.6 大孔吸附樹(shù)脂洗脫條件的優(yōu)化

2.6.1 乙醇濃度對(duì)洗脫效果的影響

向吸附平衡的樹(shù)脂中分別加入濃度為30%、40%、50%、60%、70%、80%、95% 的乙醇溶液30 mL，按1.9 所述方法充分解吸，測(cè)定洗脫液中芍藥苷的含量，比較不同濃度乙醇溶液的解吸效果。結(jié)果如圖7。由圖中可見(jiàn)，當(dāng)乙醇濃度在40%以下時(shí)解吸不夠完全，50%～70%的乙醇可以達(dá)到很高的解吸率，繼續(xù)提高乙醇濃度解吸率不再提高。考慮生產(chǎn)成本和安全性的因素，最終選用50%的乙醇溶液為洗脫液。

圖7 乙醇濃度對(duì)洗脫效果的影響Fig.7 The effect of ethanol concentration on desorption

2.6.2 洗脫液用量的確定

按2.3 確定的最優(yōu)吸附條件上樣，吸附之后用2 BV 去離子水淋洗樹(shù)脂柱以除去水溶性雜質(zhì)。再用50%乙醇溶液以流速1.0 mL/min 進(jìn)行洗脫。收集洗脫液(每1/2 BV 為1 管)，測(cè)定含量并繪制解吸曲線，如圖8 所示。由圖8 可見(jiàn)，當(dāng)洗脫體積為2～3 BV 時(shí)，洗脫液中的芍藥苷含量達(dá)到最大值，并且洗脫峰相對(duì)集中、無(wú)明顯拖尾現(xiàn)象，約4 倍柱體積洗脫液可將芍藥苷基本洗脫完全，解吸率為93.0%。

圖8 芍藥苷動(dòng)態(tài)洗脫曲線Fig.8 The dynamic elution curve of paeoniflorin

2.7 樹(shù)脂重復(fù)使用周期的考察

HPD-200A 樹(shù)脂的重復(fù)使用結(jié)果如表2 所示。由表中可以看出，吸附率和解吸率首次最高，分別為84.9%和94.3%，之后漸漸下降，到第四次后基本保持穩(wěn)定，而芍藥苷的純度無(wú)明顯下降。說(shuō)明樹(shù)脂柱對(duì)芍藥苷的死吸附很少，樹(shù)脂可重復(fù)使用多次而不需要再生。重復(fù)吸附解吸10 次，收集液的干物質(zhì)中芍藥苷的平均含量為32.3%，同時(shí)6'-O-β-D-葡萄糖芍藥內(nèi)酯苷，芍藥內(nèi)酯苷和β-gentiobiosylpaeoniflorin 的平均含量分別為8.02%、16.5%和6.63%。

表2 HPD-200A 樹(shù)脂柱重復(fù)使用的性能變化Table 2 Changes of adsorption properties of HPD-200A resin with repeated usage

3 結(jié)論

采用制備HPLC 等方法從牡丹籽粕醇提物中分離純化了4 種主要成分，經(jīng)UV、MS、NMR 分析鑒定其分別為6'-O-β-D-葡萄糖芍藥內(nèi)酯苷，芍藥內(nèi)酯苷，β-gentiobiosylpaeoniflorin 和芍藥苷，其中以芍藥苷含量最高。通過(guò)靜態(tài)吸附、解吸試驗(yàn)從11 種備選樹(shù)脂中篩選出HPD-200A 型大孔吸附樹(shù)脂，其對(duì)牡丹籽中芍藥苷的較佳純化工藝參數(shù)為:樣液濃度8.0 mg/mL，上樣速度1/16 BV/min，上樣體積4.5 BV，洗脫液乙醇濃度50%，洗脫流速1/16 BV/min，洗脫體積4 BV。在此條件下樹(shù)脂重復(fù)使用10 次其吸附率、解吸率以及所得產(chǎn)品純度無(wú)明顯下降。經(jīng)樹(shù)脂分離純化的提取物中含有芍藥苷32.3%，芍藥內(nèi)酯苷16.5%，6'-O-β-D-葡萄糖芍藥內(nèi)酯苷8.02%，β-gentiobiosylpaeoniflorin 6.63%。

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