紫外分光光度法測定可樂中咖啡因的含量

武開業

（榆林市環境監測總站，陜西 榆林 719000）

咖啡因（C8H10N4O2）是從茶葉、咖啡果中提煉出來的一種甲基黃嘌呤的生物堿，化學名是1,3,7-三甲基黃嘌呤或3,7-二氫-1,3,7三甲基-1H-嘌呤-2,6-二酮，純的咖啡因是白色而具有強烈苦味的粉狀物，熔點 238°,升華溫度178°，易溶于水、乙醇、丙酮及氯仿等有機溶劑。適度地使用咖啡因有祛除疲勞、興奮神經的作用，臨床上用于治療神經衰弱和昏迷復蘇。但是，大劑量或長期使用也會對人體造成損害，特別是它也有成癮性，一旦停用會出現精神萎頓、渾身困乏疲軟等各種戒斷癥狀。

各國制定了咖啡因在飲料中的食品衛生標準，美國、加拿大、阿根廷、日本、菲律賓規定飲料中咖啡因的含量不得超過200mg/L，南斯拉夫規定不得超過120mg/L，到目前為止我國僅允許咖啡因加入到可樂型飲料中，其含量不得超過150mg/L，為了加強食品衛生監督管理，對飲料中咖啡因的含量進行測定是十分必要的。

圖1 咖啡因的結構式Figure 1 structure of caffeine

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

UV-1200紫外分光光度計(上海美譜達儀器有限公司)；萬分之一電子分析天平(梅特勒-托利多公司)；KQ-50B超聲儀（昆山市超聲儀器有限公司）；咖啡因標準品（純度99%以上，廣佛精細化工公司)；三氯甲烷；高錳酸鉀；氫氧化鈉；乙酸鋅；無水硫酸鈉；亞硫酸鈉；亞鐵氰化鉀；硫氰酸鉀；磷酸（所用試劑均為分析純）。

1.2 樣品前處理

在250mL分液漏斗中，準確移入10-20mL經超聲脫氣后的可樂飲料樣品，然后加入1.5%高錳酸鉀溶液5mL，搖勻，靜置5min,加入亞硫酸鈉-硫氰酸鉀混合溶液10mL，搖勻，加入磷酸溶液1mL，搖勻，加入氫氧化鈉溶液1mL，搖勻，加入50 mL重蒸三氯甲烷，振搖100次，靜置分層，收集三氯甲烷，水層再加入40mL重蒸三氯甲烷，振搖100次，靜置分層，合并倆次三氯甲烷萃取液，并用重蒸三氯甲烷定容至100mL，搖勻，備用。

2 結果與討論

2.1 方法的精密度、線性關系和檢出限

配制濃度為0、5、10、15、20 ug/mL的咖啡因三氯甲烷標準溶液，以0 ug/mL標準溶液作參比，每個濃度在276.5nm波長下測定6次吸光度值，RSD在0.19%～1.85%之間.分別測定不同濃度的咖啡因標準溶液的吸光度值，咖啡因濃度在0～30 ug/mL范圍內與吸光度值呈良好線性關系，線性回歸方程為Y＝0.456 X-0.0019,相關系數為0.9998，方法檢出限為3ug/mL。

2.2 實際樣品測定

我們以不同品牌的可樂飲料為實驗對象，測定其中含有的咖啡因，含量見表1。

表1 實際樣品測定結果及回收率Table 1 Contents of caffeine in samples

方法的相對標準偏差為（RSD）在0.25%～2.03%之間，同時做回收率實驗，加標回收率為97.5%～101.3%。

3 小結

通過對實際樣品的測定，本方法可以快速、準確地測定可樂飲料中的咖啡因，可滿足食品安全中對可樂飲料中咖啡因含量檢測的要求。

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