K562細胞ssDNA適配子檢測方法對慢性粒細胞白血病診斷價值的研究

查成喜，邢福軍，張雪燕，郭 鵬，習 靜，韓躍武

(1.甘肅省中醫院檢驗科，甘肅蘭州730050;2.蘭州大學基礎醫學院生物化學與分子生物學研究所，甘肅蘭州730000)

白血病(leukemia)是起源于骨髓多能造血干細胞的惡性增殖性腫瘤，是十大高發性腫瘤之一。其中慢性粒細胞性白血病(chronic myeloid leukemia，CML)約占各類白血病的20%，占慢性白血病的95%。臨床上CML的診斷主要依靠血象、骨髓象、細胞化學染色以及用流式細胞儀檢測白血病細胞抗原[1-2]。但是血象檢查無特異性;骨髓穿刺具有一定的風險性，且技術要求較高;細胞化學染色結果受影響的因素較多，如試劑、每個實驗人員判斷標準等，使結果相差很大;流式細胞儀檢測價格昂貴，不能作為常規體檢的項目對白血病進行人群普查[3-4]。我們利用前期建立的高靈敏度、高特異性的K562細胞ssDNA核酸適配子檢測方法(簡稱適配子檢測法)[5-6]檢測臨床白血病患者血液標本，評價該法在臨床CML診斷中的實際應用價值。

材料和方法

一、標本收集及處理

選擇2010年6月至2011年10月首次入院，經臨床診斷標準[2]確診的CML患者18例(男10例，女8例，平均年齡35歲)、其他白血病患者22例(男10例，女12例，平均年齡37歲)，另選取同期健康體檢者20名作為正常對照組，男10例，女10例，平均年齡35歲。

二、儀器及試劑

RF-5301PC型熒光分光光度計(日本);Promega鏈霉親和素磁珠及磁力架(Promega公司);洗滌緩沖液:4.5 g/L葡萄糖、5 mmol/L MgCl2·6H2O 溶于含0.1 g/L MgCl2和0.133 g/L CaCl2的磷酸鹽緩沖液(PBS);結合緩沖液:洗滌緩沖液中加入0.1 mg/mL tRNA、1 mg/mL BSA和0.1%疊氮鈉。其它試劑均為分析純，實驗用水均為去離子水。

三、方法

分別采集所有對象靜脈血5 mL，分離粒細胞，－20℃保存備用。……