PCR熒光定量檢測HBV—DNA與其血清學標志物檢測的對比分析

乙型肝炎病毒HBV-DNA定量檢測已越來越受到臨床的重視，我們采用聚合酶鏈反應（PCR）雜交定量檢測試劑測定乙型肝炎（乙肝）患者血清HBV-DNA定量，并且對檢測試劑作初步評價和臨床應用觀察。

1 資料與方法

1.1血清 受檢血清來自于門診和病房患者的216份血清樣品。

1.2儀器 DNA擴增儀為Bio-Red擴增儀；熒光檢測用FX990型熒光檢測儀；酶標儀型號為Elx800。

1.3試劑 PCR熒光定量檢測HBV-DNA試劑盒購自上海科華生物工程股份有限公司；HBV血清標志物ELISA檢測試劑盒購自上海榮生生物技術有限公司。

1.4檢測方法 所有操作均按試劑盒使用說明書進行，由專業技術人員操作，每次檢測均有購自衛生部臨檢中心的質控血清。

2 結果（見表1）

3 討論

在HBV-PCR雜交酶聯定量檢測中，采用dUTP-UNG防污染措施和探針雜交技術，保證了檢測的特異性。從檢測結果可以看出\"大三陽\"HBV-DNA陽性率為98.3%，DNA含量也很高（3.66×106），與傳統認為此種血清的傳染性較高是相符的。在HBsAg（+）、HBeAg（+）、抗HBe（-）血清中，其DNA陽性率為100%，DNA含量最高（1.46×107）。在\"小三陽\"中HBV-DNA陽性率為25%，病毒含量為5.92×104，表明抗HBe出現后病毒已基本停止復制。在3個抗體陽性血清和全陰性血清標本中也檢測出DNA病毒呈陽性，從其DNA含量較低來看，可能是低水平的HBV感染或感染的最早期，說明PCR熒光定量檢測技術的高度敏感性和在HBV檢測中的必要性。

目前，不少臨床大夫及患者反映，定量PCR檢測結果與患者血清學標志物結果存在不相符合的問題，其中一個原因是對檢測指標如何分析的問題，因為PCR檢測的是病毒核酸水平，而血清學指標檢測的是病毒蛋白，二者不在一個水平上，也就是說二者測定的不是同一個物體，理論上允許有差別。如大三陽患者可能出現PCR陰性，如何對待抗病毒治療，必須綜合分析，動態觀察結果，不能只依靠一個指標來診斷。

當然對試驗本身必須做到準確無誤，必要時重復多次或對不同廠家的試劑進行對比，盡量避免假陽性或假陰性。編輯/劉小燕