直接免疫熒光法同時檢測兒童多種呼吸道病毒抗原的臨床應(yīng)用

摘要：目的 分析兒童多種呼吸道病毒抗原采用直接免疫熒光法同時檢測的臨床應(yīng)用效果。方法 針對我所2011年2月～2013年接待的1000例呼吸道感染患兒作為研究對象，將他們呼吸道分泌物中的病毒抗原采用直接免疫熒光法同時檢測，主要包括七種病毒抗原，即RSV（呼吸道合胞病毒）、FB（流感病毒B型）、FA（流感病毒A型）、PIV1（副流感病毒1型）、PIV2（副流感病毒2型）、PIV3（副流感病毒3型）、ADV（腺病毒），統(tǒng)計分析相關(guān)情況。結(jié)果 1000例呼吸道感染患兒中，檢出101例病毒感染患兒，占10.10%。其中，最多的病毒抗原為RSV共計58例占57.43%，其次為混合型，共15例占14.85%，再次為ADV，共8例占7.92%；此外，隨著年齡增長，呼吸道病毒感染率呈現(xiàn)下降趨勢，而兒童呼吸道感染在冬春兩季發(fā)生率較高，在本次研究中顯示明顯多于夏秋兩季。結(jié)論 兒童多種呼吸道病毒抗原采用直接免疫熒光法同時檢測效果比較明顯，該檢測方法有著高效、快速、經(jīng)濟(jì)、簡便及經(jīng)濟(jì)等優(yōu)勢，值得臨床借鑒。

關(guān)鍵詞：兒童；呼吸道感染；病毒抗原；直接免疫熒光法；同時檢測；臨床應(yīng)用

就這幾年我國兒科臨床研究發(fā)現(xiàn)，呼吸道感染屬于兒童感染性疾病中最為常見的一種，并且已經(jīng)表明大約有95%左右的急性上呼吸道感染與大部分下呼吸道感染的發(fā)生是因?yàn)榧?xì)菌以外的病原體所致，其中最為多見的當(dāng)屬病毒感染[1]?？偟膩碚f，病毒所致的兒童呼吸道感染會因?yàn)槟挲g、季節(jié)及病原類型的不同而存在差異，雖然這些年抗生素廣泛應(yīng)用，呼吸道細(xì)菌感染呈現(xiàn)下降趨勢，但是呼吸道病毒感染卻與日俱增[2]。雖然當(dāng)前檢測這方面的方式很多，不過要么存在不足，要么比較復(fù)雜且昂貴，為了進(jìn)一步分析該檢測方法同時檢測兒童多種呼吸道病毒抗原的臨床效果，我所展開了相關(guān)研究，現(xiàn)將結(jié)果作如下報告。

1資料與方法

1.1一般資料 我所2011年2月～2013年接診的1000例呼吸道感染患兒，全部經(jīng)臨床確診，其中男患兒573例、女患兒427例；年齡5個月～11歲，平均為（5.6±2.9）歲。分別采集患兒的鼻咽部分泌物進(jìn)行檢測，其中量為1～2ml，檢測在2h完成。

1.2方法 本次研究采用的儀器為BX51型熒光顯微鏡，而試劑則為呼吸道病毒診斷試劑盒，全部患兒的分泌物皆采用直接免疫熒光法檢測，具體操作如下：①標(biāo)本采集與運(yùn)送：從鼻腔處將采樣導(dǎo)管插入7～8cm，以便其達(dá)到咽部下，然后采用誘導(dǎo)吸取的方式，收集患兒分泌物1～2ml，并放置在無菌瓶中，應(yīng)注意減少大量唾液的混入而影響檢出率；送檢的人員必須迅速與謹(jǐn)慎，快速達(dá)到檢測地點(diǎn)并及時檢測可以減少細(xì)胞的破裂與死亡，進(jìn)而影響檢測結(jié)果（造成假陰性）。②細(xì)胞涂片制備：打勻樣本（鼻咽處的分泌物）后，將其移到尖底離心管中，并以1500r/min進(jìn)行離心處理，時間為5min，然后將其上清液去除后留下沉淀，利用PBS進(jìn)行沉淀洗滌，次數(shù)以洗滌徹底為宜，盡量減少黏絲或黏液造成非特異性熒光而影響正常檢測[3]；在0.5～1ml的PBS溶液中將沉淀溶解，并吹打成細(xì)胞懸液，然后在玻片上點(diǎn)七個樣（每孔為25μl），經(jīng)室溫風(fēng)干后采用冷丙酮加以固定。③直接免疫熒光法檢測：將前述制備好的細(xì)胞涂片和病原體對照玻片一起，同時采用直接免疫熒光法進(jìn)行檢測。

1.3統(tǒng)計學(xué)分析 本次研究相關(guān)數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS18.0處理，計數(shù)資料用%表示，行χ2檢驗(yàn)，以P<0.05差異為統(tǒng)計學(xué)有意義的標(biāo)準(zhǔn)。

2結(jié)果

2.1病毒感染情況 1000例呼吸道感染患兒中，檢出101例病毒感染患兒，百分比為10.10%。其中，最多的病毒抗原為RSV，總計58例，百分比為57.43%，其次為混合型，總計15例，百分比為14.85%，再次為ADV，總計8例，百分比為7.92%。見表1。

2.2不同年齡病毒感染檢出情況 隨著年齡增長，呼吸道病毒感染率呈現(xiàn)下降趨勢，其中0～1歲檢出率要明顯高于1～6歲與6～11歲，見表2。

2.3不同季節(jié)感染情況 兒童感染呼吸道病毒在不同季節(jié)情況有所不同，其中冬春兩季發(fā)生率要明顯高于夏秋兩季，差異性顯著（P<0.05），有統(tǒng)計學(xué)意義，見表3。

3討論

這些年相關(guān)臨床研究顯示大部分兒童呼吸道感染發(fā)病是由于多種病毒所致，而兒童急性呼吸道感染引發(fā)的病毒主要是呼吸道合胞病毒、流感病毒B型、流感病毒A型、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒3型、腺病毒等。臨床做好早期診斷，能為臨床治療提供依據(jù)與參考，有著很高的臨床價值。

雖然檢測病毒感染的臨床方法很多，不過都有一定的局限性，比如說病毒分離培養(yǎng)，其是傳統(tǒng)檢測的\"金標(biāo)準(zhǔn)\"[4]，但是其費(fèi)時與耗力，并且結(jié)果很難為臨床提供指導(dǎo)；再比如病毒特異性抗體檢測，這是檢測病毒感染的一個重要指標(biāo)，但是特異性IgG陽性一般僅能表明存有相應(yīng)病毒感染，而不能用在早期感染的判斷與療效檢測中，同時IgM類抗體也是感染早期病毒活化產(chǎn)生，不過嬰幼兒可能因?yàn)槊庖咻^弱等因素出現(xiàn)假陰性，從而干擾檢測結(jié)果[5]。在眾多檢測方法中，在20多年前興起的免疫熒光法卻有著獨(dú)特的優(yōu)勢，逐漸被廣泛使用。由于病毒性肺炎診斷最好從肺活檢組織中檢測出病毒的標(biāo)志，但是這類樣本的采集十分困難，故而免疫熒光法直接以呼吸道分泌物脫落細(xì)胞為樣本進(jìn)行病毒感染檢測，其在本次研究中針對七種病毒同時檢測，取得了比較良好的效果。

本次研究采用直接免疫熒光法同時檢測兒童多種呼吸道病毒抗原，其結(jié)果顯示1000例呼吸道感染患兒中，檢出101例病毒感染患兒，占10.10%。其中，最多的病毒抗原為RSV共計58例占57.43%，其次為混合型，共15例占14.85%，再次為ADV，共8例占7.92%；兒童呼吸道感染在冬春兩季發(fā)生率較高，在本次研究中顯示明顯多于夏秋兩季。總的來說，早期做好病毒感染檢測與診斷，及時對癥處理，可以縮短病程及提高患兒生存質(zhì)量，而采用直接免疫熒光法檢測不失為一種高效、簡便、經(jīng)濟(jì)、快速及直觀的方式，值得臨床借鑒。

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