農村散養雞新城疫抗體水平的檢測與分析

雞新城疫（ND）是由新城疫病毒（NDV）引起的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，發病急、傳播快、死亡率高，發病率可達90%。臨床上常見呼吸困難，排水樣或黃綠色糞便，產蛋雞產蛋量急劇下降，軟殼蛋、畸形蛋明顯增多。雞只接種新城疫疫苗后體內會產生特異性抗體，借助間接酶聯免疫吸附試驗（間接ELISA），可對血清中新城疫抗體水平進行檢測，有效評估雞群的免疫效果。為摸清汾陽市散養雞新城疫抗體水平，筆者于2013年5月對汾陽市3個鄉鎮散養雞新城疫抗體進行了血清學檢測，現報告如下：

一、材料與方法

1. 血樣的采集

對汾陽市3個養殖集中鄉鎮散養雞隨機采血，每只翅下靜脈采血2毫升，共采集血樣178份，其中冀村75份，杏花46份，陽城57份。

2. 血樣的處理

采集的血樣傾斜靜置1小時，待析出血清后，2000轉/分鐘離心8～10分鐘，取上層血清待檢。

3. 儀器與試劑

單道、多道微量移液器；吸頭；D-9602酶標分析儀，北京普朗新技術有限公司生產；新城疫病毒抗體檢測試劑盒，北京維德維康生物技術有限公司生產，批號為121202。

4. 試驗方法與原理

①試驗方法。間接酶聯免疫吸附試驗（間接ELISA）。

②原理。特異的NDV被包被在96孔平底聚苯乙烯板上。在反應過程中，檢測樣本被加入反應孔中，樣本中的特異性抗體會與孔中包被的特異性抗原反應，在洗板的過程中不會被清洗掉，當添加酶標復合物時，這些酶標復合物就會與雞血清的抗體發生反應。沒有結合的酶標復合物在洗板的過程中被清洗。再加入底物顯色，顯色的深淺與樣本所含NDV的抗體濃度成正比。

③操作步驟。第一步樣本稀釋，將被檢血清用稀釋液做1∶100稀釋。第二步加樣，陰性血清和陽性血清各占1孔做對照，其余孔加1∶100稀釋的被檢血清，每孔100微升，加樣位置做好記錄，反應板蓋上膜，置37℃環境下作用30分鐘后洗滌3次。第三步加酶標抗體，每孔加酶標抗體液100微升，反應板蓋上膜，置37℃環境下作用30分鐘后洗滌3次。第四步加底物使用液，每孔100微升，置室溫避光顯色2～3分鐘。第五步加終止液，每孔100微升，使其終止反應。

④結果判定。在酶標儀490納米波長處，測定酶標板的每孔吸光值（P），除以同板標準陰性對照的吸光值（N），測得每份被檢樣品的P/N值。P/N≥2.5時，樣品判定為陽性；P/N<2.5時，樣品判定為陰性；N≥0.3時，結果不準確，必須查找原因，重新測定。

二、結果分析

178份待檢血清吸光值見表1、表2。H11孔為陰性血清吸光值，H12孔為陽性血清吸光值。冀村75份血清對應孔為表1的A行、B行、C行、D行、E行、F行和G1～G3；杏花46份血清對應孔為表1的G4～G12與H1～H10和表2的A行、B行、C1～C3；陽城57份血清對應孔為表2的C4～C12、D行、E行、F行、G行。冀村合格數62份，合格率82.7%；杏花合格數27份，合格率58.7%；陽城合格數51份，合格率89.5%。總的合格數140份，合格率78.7%，見表3。

三、討論

我市要求新城疫免疫密度達到100%，從本次檢測結果來看，冀村、陽城的新城疫免疫合格率達到了農業部的要求（70%以上），但值得注意的是杏花鎮的新城疫合格率（58.7%）遠低于農業部標準。筆者通過調查了解，分析主要原因如下：

1. 疫苗保存不當。部分養殖戶為圖省事，將油乳劑滅活苗、凍干苗都放在4℃冷藏箱中，導致凍干苗因儲存溫度過高而失效。

2. 飼養條件和飼料質量差。一些農村散養戶的雞舍通風不良、衛生條件差，雞群長期處于應激狀態，免疫力下降。有的飼料黃曲霉素超標、營養物質缺乏，影響新城疫抗體產生。

3. 防疫員責任心亟待加強。有的防疫員在接種疫苗時沒有按照規定劑量免疫，有的過分追求防疫進度而忽視效果，有的嫌注射疫苗麻煩，而采用飲水免疫，這都造成新城疫抗體水平低下，必須加強防疫員的責任心。

（作者聯系地址：山西省汾陽市動物疫病預防控制中心 郵編：032200）