英夫利昔單抗治療類風濕關節炎對外周血CD147及MMPs的影響

[摘要] 目的 探討Infliximab對類風濕關節炎患者外周血CD147及MMPs的影響。 方法 選擇類風濕關節炎患者40例為研究對象，所有患者均經MTX治療3個月但效果欠佳。其中20例患者加用Infliximab治療14周，為第一組；10例患者加用Infliximab治療6周，為第二組；10例患者繼續給予MTX治療14周，為第三組。分別于第0、10、18周檢測患者外周血單個核細胞CD147和MMPs水平，外周血CD14+細胞CD147的平均熒光強度，第0、18周檢測外周血清MMP2、MMP3、MMP9的表達情況。另選擇10例健康體檢者為對照組。 結果 第一組晨僵、ERS、CRP、RF、HAQ均有不同程度的下降（P < 0.05或0.01），第二組晨僵、ERS、HAQ均有不同程度的下降（P < 0.01），但第三組各指標前后變化不明顯。治療后第一組和第二組CD147、MMP9表達均較治療前下降，而第三組較治療前增加，三組比較差異有統計學意義（P < 0.05），第一組和第二組之間比較差異不明顯。MMP2和MMP3三組比較差異不明顯。第一組的MMP2、MMP3、MMP9均較前明顯下降（P < 0.01），第二組MMP3、MMP9均較前明顯下降（P < 0.01）。第三組各指標差異不明顯（P > 0.05）。 結論 Infliximab聯合甲氨蝶呤治療類風濕關節炎，可以下調外周血中CD147、MMPs的表達，從而改善癥狀、延緩疾病的進一步發展。

[關鍵詞] 類風濕關節炎；英夫利昔單抗；CD147；MMPs

[中圖分類號] R593.22 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701（2013）17-0001-05

類風濕關節炎（RA）是由于自體免疫引發的關節炎，是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對稱性、多滑膜關節炎和關節外病變為主要臨床表現，屬于自身免疫炎性疾病。該病好發于手、腕、足等小關節，反復發作，呈對稱分布。類風濕是一種自身免疫性疾病，與內分泌、營養、地理、職業、心理和社會環境的差異、細菌和病毒感染及遺傳因素等方面有關系[1，2]。RA是一種常見病、多發病。CD147是基質金屬蛋白酶誘導劑，近年來有研究發現在類風濕關節炎患者的外周血以及滑膜細胞中CD147表達上調，誘導間質細胞基質金屬蛋白酶的產生（MMPs）。MMPs具有降解細胞外基質的作用，能夠降解關節骨與軟骨中的細胞外基質大分子。Infliximab是一種特異性阻斷α腫瘤壞死因子的人鼠嵌合型單克隆抗體，屬于目前可使用的TNF拮抗劑。本文主要研究Infliximab對外周血CD147及MMPs的影響，探討其延緩RA患者骨質破壞的可能機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2012年1～6月，選擇在我院治療的類風濕關節炎患者40例為研究對象。其中男4例，女36例，年齡40～57歲，平均（48.9±10.4）歲。入選標準：①所有患者均經MTX治療3個月，劑量穩定在每周7.5～15.0 mg超過4周，但效果欠佳；②所有患者臨床資料完整；③所有患者診斷明確。排除標準：①過敏體質或者對英夫利昔單抗過敏的患者，或者對人免疫球蛋白過敏的患者；②關節功能狀態為Ⅳ級或者X線檢查結果顯示為Ⅳ期；③入組前1個月內接種過活的或者減毒的病毒或細菌疫苗，或者使用過中草藥治療類風濕關節炎；④入組前3個月內接受過生物制劑治療；⑤有活動性肺結核的病史；⑥入組前2個月患有嚴重的感染或者正處于急性感染或慢性感染發作期；⑦入組前半年內有機會性感染史；⑧裝有人工關節并有感染史；⑨入組前3個月接受過器官移植治療；⑩患有或曾患全身自身免疫性疾病。其中加用英夫利昔單抗治療14周的患者共20例，為第一組；加用英夫利昔單抗治療6周的患者共10例，為第二組；繼續使用MTX治療14周的患者為第三組。另選擇健康體檢者10名為對照組，其中男2例，女8例，平均年齡（50.1±11.7）歲。四組患者的性別比、平均年齡等一般資料比較，差異無統計學意義（P > 0.05），具有可比性。

1.2 治療方法

第一組在繼續使用MTX（上海醫藥（集團）有限公司信誼制藥總廠，國藥準字H31020644，250 mg/片）治療的基礎上，加用英夫利昔單抗（Centocor B.V.，100 mg，批準文號：S20060024）治療，3 mg/kg，分別于第0、2、6、14周給藥治療，療程14周；第二組在使用MTX治療的基礎上加用英夫利昔單抗治療，3 mg/kg，分別于第0、2、6周給藥，療程6周；第三組繼續使用MTX治療14周。

2結果

2.1 三組RA患者及對照組的一般資料

見表1。RA各組及對照組一般資料比較，差異無統計學意義（P > 0.05）。

2.2 不同時間點三組RA患者各臨床和常規實驗室指標的變化

見表2。第一組晨僵、ERS、CRP、RF、HAQ均有不同程度的下降（P < 0.05或0.01），第二組晨僵、ERS、HAQ均有不同程度的下降（P < 0.01），但第三組各指標前后變化不明顯。

2.3 RA患者和正常人外周血目的基因CD147、MMPs表達比較

目的基因CD147、MMPs熒光定量的數據減去各自的內參基因β-actin的熒光定量數據（Ct值），得到△Ct，轉換為對數2-△Ct，即目的基因相對于內參基因的表達倍數。倍數越高則表達越高。RA患者與正常人外周血目的基因CD147、MMPs表達比較見圖1。

2.4 RA三組治療前各目的基因相對于內參基因倍數比較

見圖2。

2.5 RA三組治療后目的基因表達情況

治療后的目的基因表達采用2-△△Ct法分析。即△△Ct=△Ct治療前-△Ct治療后。

2.6 RA三組治療前后血清MMPs表達

見表3。治療后18周，第一組的MMP2、MMP3、MMP9均較前明顯下降（P < 0.01），第二組MMP3、MMP9均較前明顯下降（P < 0.01）。第三組各指標差異不明顯（P > 0.05）。

3討論

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA），是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，是一種自身免疫性疾病。可能與內分泌、代謝、營養、地理、職業、心理和社會環境的差異、細菌和病毒感染及遺傳因素等方面有關系，以慢性、對稱性、多滑膜關節炎和關節外病變為主要臨床表現。好發于手、腕、足等小關節，反復發作，呈對稱分布。早期有關節紅腫熱痛和功能障礙，晚期關節可出現不同程度的僵硬畸形，并伴有骨和骨骼肌的萎縮，極易致殘。主要累及關節滑膜（以后可波及到關節軟骨、骨組織、關節韌帶和肌鍵），其次為漿膜、心、肺及眼等結締組織的廣泛性炎癥性疾病。

多種炎性細胞因子參與了RA的發病過程[3，4]，刺激滑膜細胞增殖，形成血管翳，是導致骨侵蝕的基礎。X線上早期主要表現為關節周圍腫脹，關節附近的輕度骨質疏松，隨后出現間隙狹窄、關節破壞、融合、脫位等。RA患者關節部位的軟骨和骨侵蝕有多重因素參與?；|金屬蛋白酶參與了軟骨與骨的侵蝕，其他還有細胞因子、T細胞、B細胞等。

正常情況下人體的骨和軟骨的合成和降解處于一種平衡狀態，一旦這種平衡狀態被打破，則出現持續的降解，造成骨和軟骨的破壞?；|金屬蛋白酶是水解細胞外基質的蛋白裂解酶，包括基質中以及整合于質膜中的各種膠原酶和彈性蛋白酶等?；|金屬蛋白酶是一個大家族，因其需要Ca2+、Zn2+等金屬離子作為輔助因子而得名，其家族成員具有相似的結構，同一種MMP可降解多種細胞外基質成分，而某一種細胞外基質成分又可被多種MMP降解，但不同酶的降解效率可不同。MMPs幾乎能降解ECM中的各種蛋白成分。以往主要是研究其在腫瘤的發生發展及轉移中的作用。MMPs能夠破壞關節骨與軟骨中的膠原、蛋白多糖、其他細胞外基質，促進了血管翳對軟骨的侵蝕，在關節破壞中發揮重要的作用。類風濕關節炎滑膜的巨噬細胞是產生MMPs的主要細胞。其中MMP3是基質溶解酶，MMP2和MMP9主要是溶解膠原和明膠。類風濕關節炎的患者在外周血中均存在明顯的基質金屬蛋白酶的高表達，并且與病情的程度有一定的相關性[5]。CD147是MMPs的拮抗劑，可刺激鄰近的間質細胞產生MMPs[6，7]。CD147在體內廣泛存在與造血細胞和非造血細胞中，除了血液系統，其他如中樞神經系統、血液系統、泌尿系統、消化系統等均有CD147的表達。近年來研究顯示，在類風濕關節炎患者中的外周血細胞以及滑膜細胞上均有CD147表達上調[8-10]?；ぜ毎械腃D147表達增加，可通過自分泌或者旁分泌的方式誘導鄰近的滑膜成纖維細胞大量分泌MMPs。促進了血管翳的形成以及對軟骨的侵蝕，參與關節的破壞[11-13]。

近些年生物制劑的研發以及在臨床上的應用成為治療類風濕關節炎的重大進展。目前有多重生物制劑如TNF-α抑制劑、白介素-1拮抗劑通過對抗TNF-α、IL-1等過度分泌來治療類風濕關節炎[14-16]。Infliximab能與TNF-α的可溶形式及跨膜形式高度結合，抑制TNF-α與p55/p75受體的結合，從而使TNF-α失去活性。在本研究中，第一組和第二組在治療后各項主要的臨床癥狀和實驗室結果均較治療前有不同程度的下降，而第三組下降不明顯。說明Infliximab聯合甲氨蝶呤治療類風濕關節炎能夠改善患者的癥狀，延緩疾病的發展。第一組和第二組18周外周血單個核細胞中CD147 mRNA的表達較治療前下降，而第三組卻有所上升，說明Infliximab能夠明顯降低CD147 mRNA的表達。治療后第一組和第二組MMP9 mRNA表達均明顯下降，與第三組比較差異明顯，但MMP2和MMP3三組間比較，差異不明顯。對患者外周血清中MMPs的表達進行檢測，治療后18周，第一組MMP2、MMP3、MMP9均有明顯下降，而第二組也有不同程度的下降，但以MMP3和MMP9下降更明顯，第三組下降不明顯。

綜上所述，Infliximab聯合甲氨蝶呤治療類風濕關節炎，可以下調外周血中CD147、MMPs的表達，從而改善癥狀、延緩疾病的進一步發展。

[參考文獻]

[1] 劉彥龍. 關節腔注射復方倍他米松聯合依那西普針治療類風濕關節炎療效觀察[J]. 中國實用醫藥，2012，7（30）：129-130.

[2] 孫鳳英，李繼業. 類風濕關節炎患者天然、氧化脂蛋白（α）水平與心血管疾病的關系[J]. 中國醫藥指南，2012，10（31）：533-534.

[3] 劉金石，李琦，李敏. 白細胞介素-20在類風濕關節炎患者血清中的表達及影響因素探討[J]. 臨床和實驗醫學雜志，2012，11（24）：1936-1937.

[4] 張金山，張巖，趙潔，等. 類風濕關節炎患者血清及關節滑液中Ghrelin和TNF-α水平的相關性[J]. 中國醫藥科學，2012，2（8）：18-20.

[5] 李守勇，陳維霞，孫陽. 類風濕性關節炎患者血清中sCR1和MMP-2、MMP-9水平的檢測及其臨床意義[J]. 中國實用醫刊，2012，39（24）：68-70.

[6] 王莉，高愛平. 非小細胞肺癌中CD147和MMP2的表達及意義[J]. 臨床肺科雜志，2012，17（12）：2237-2238.

[7] 楊紹興，湯傳昊，劉曉晴. CD147分子及其與腫瘤關系的研究進展[J].軍事醫學，2012，36（11）：867-869.

[8] 羅筱雯，李敬揚. 英夫利昔單抗治療類風濕關節炎臨床觀察[J]. 中國社區醫師：醫學專業，2012，14（25）：108-109.

[9] 牛紅青，董海原. 英夫利昔單抗可改善類風濕關節炎患者動脈血管彈性[J]. 中華風濕病學雜志，2009，13（2）：113.

[10] 丁振華，王小冬，熊俊慧，等. 白細胞介素-17對英夫利昔單抗治療類風濕關節炎療效的預測作用[J]. 實用醫學雜志，2012，28（3）：416-418.

[11] 陳新，唐雪梅，趙曉東，等. 英夫利昔與依那西普治療兒童幼年特發性關節炎臨床對照研究[J]. 中國實用兒科雜志，2012，27（10）：770-773.

[12] 何偉珍，徐曉東，葉志中，等. 英夫利昔單抗治療類風濕關節炎療效預測因素研究[J]. 現代生物醫學進展，2010，10（19）：3675-3677.

[13] 卞正巧. 英夫利昔單抗治療類風濕關節炎的臨床觀察[J]. 黑龍江醫藥，2011，24（6）：967-968.

[14] 張挺，夏曉茹，朱小春. 實驗室指標在英夫利昔單抗治療類風濕關節炎中的療效預測價值[J]. 實用醫學雜志，2011，27（24）：4466-4468.

[15] 呂洪華，張乾坤，吳雪蓮. 英夫利昔單抗對兔骨關節炎動物模型的影響[J]. 浙江實用醫學，2011，16（6）：401-402.

[16] 陳崇剛. 類風濕關節炎患者血清軟骨寡聚基質蛋白水平及其臨床意義的研究[J]. 醫學綜述，2013，19（5）：927-928.

（收稿日期：2013-02-27）