幾種消毒劑對植物離體葉片藥害的比較

摘 要：目前植物組織培養外植體消毒劑首選氯化汞屬劇毒且污染環境，急需殺菌效果好，適用性廣，藥害小，對人體低毒，環境友好，使用方便，成本低廉的消毒劑。將常用消毒劑及幾種環保型消毒劑對5種植物離體葉片的傷害進行對比，結果表明次氯酸鈉、氯化汞對葉片傷害最大，溴硝醇和鄰苯二甲醛相對較安全。

關鍵詞：消毒劑；離體葉片；藥害

中圖分類號 Q945 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）20-26-03

污染是組織培養的最大難點，外植體攜帶微生物（真菌和細菌）是最常見且不易解決的問題，傳統的外植體消毒劑有氯化汞（升汞）、次氯酸鈉（鈣）、過氧化氫、乙醇、新吉爾滅等，其中以升汞消毒效果較好，也最為常用，但對人體劇毒，常溫下微量揮發，可滲透皮膚，消毒的汞廢液嚴禁排入下水道，國家嚴格規定汞的排放，消毒廢液無害化處理操作繁瑣，成本高。已有少量報道在個別植物的外植體消毒劑方面的改進，有些還需與升汞配合使用，如抗菌肽[1]、培福朗[2]、代森錳鋅加抗生素[3]、苯菌靈加鏈霉素[4]，擯棄升汞而獲得較好滅菌效果的也有少量嘗試，如臭氧應用在橡皮樹外植體[5]、多菌靈—酒精—次氯酸鈉應用在葡萄外植體[6]。筆者介紹幾種目前最為常用的外植體消毒劑乙醇、氯化汞、次氯酸鈉與幾種環保型消毒劑對植物離體葉片的傷害的對比，為從中挑選適宜外植體消毒劑提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 葉材料：四季海棠（Bedding begonia）、睡蓮（Nymphaea tetragona）、黃芯梅（Duranta repens cv.‘Dwarf Yellow’）、米蘭（Aglaia odorata）、三角梅（Bougainvillea spectabilis）。

1.2 方法 葉片過流水30min，浸泡入下述各種消毒液中，蒸餾水作對照（ck）：（1）75%乙醇30s；（2）2%次氯酸鈉30min；（3）0.1%氯化汞10min；（4）0.2%鄰苯二甲醛30min；（5）0.5%鄰苯基苯酚鈉30min；（6）0.2%溴硝醇30min；（7）0.5%鄰苯基苯酚鈉、0.2%溴硝醇各20min，期間用蒸餾水沖洗3遍；（8）0.5%鄰苯基苯酚鈉、0.2%鄰苯二甲醛各20min，期間用蒸餾水沖洗3遍。消毒劑浸泡后都用蒸餾水沖洗5遍，四季海棠、睡蓮、三角梅葉各剪成小片，放入干凈培養皿，每個培養皿放置5～10塊，加蓋，重復3次。25℃，1 500lx光下培養，光照12h/d，保持培養皿內濕潤，觀察葉片受傷害程度。

2 結果與分析

8種消毒劑（組合）對植物葉片藥害程度見表1及圖1～5。從表1可看出，同種藥劑對不同植物傷害程度并不相同，如鄰苯基苯酚鈉（5）對黃芯梅傷害甚大，排名第1，對睡蓮傷

害很輕，排第7，乙醇（1）對四季海棠、睡蓮傷害中等，對黃芯梅傷害最小，這種差異可能與葉細胞代謝特征、葉質地結構（表皮是否有油蠟層）有關。對5種植物傷害綜合評價表明，外植體消毒常用的次氯酸鈉（2）、氯化汞（3）對植物葉片傷害最大（排名1和2），強氧化劑次氯酸鈉的傷害在葉片周邊褐化很明顯，酒精（1）較安全，排名第6，其傷害表現為整片葉浸潤狀，可能與浸泡時間短有關。

從表1還可看出，鄰苯基苯酚鈉（5）、鄰苯基苯酚鈉+鄰苯二甲醛（8）均有較大傷害作用，排名都是第3，主要表現在葉面局部褐變，溴硝醇（6）和鄰苯二甲醛（4）較安全，排名都是第7。本試驗中，黃芯梅、米蘭、三角梅在靜置數天后再次進行觀察，消毒劑對葉片傷害程度有所改變，如鄰苯基苯酚鈉+鄰苯二甲醛（8）對黃芯梅傷害在第11d排第6，到第15d排第3，對米蘭傷害在第7d排第5，到第15d排第1，對三角梅傷害在第7d排第5，到第10d排第3，可能與植物經鄰苯基苯酚鈉與鄰苯二甲醛先后浸泡后，對藥劑吸收較多，無菌水難以沖洗干凈，殘余藥劑對植物繼續傷害有關。

植物生物技術、組培生產領域的理想的外植體消毒劑應該是殺菌效果好、對植物適用性廣，藥害小，對人體低毒，環境友好，使用方便，成本低廉。中國近日簽署《水俁公約》，將更加嚴厲控制汞污染，目前首選的氯化汞、次氯酸鈉均對植物有較大傷害。在本試驗的8種消毒劑（組合）中，溴硝醇和鄰苯二甲醛對植物藥害相對較小，但選擇消毒劑的關鍵是殺菌效果好且對植物藥害小，所以在本實驗基礎上可進一步進行外植體消毒效果試驗。

參考文獻

[1]賈云超，白瑋，張銳，等.抗菌肽在棉花、煙草組織培養中的應用初探[J].中國農業科技導報，2008，10（3）：97-101.

[2]高成偉，梁倩華.殺菌劑在夏橙外植體組織培養中的應用[J].廣西師范大學學報：自然科學版，1998，16（2）：76-78.

[3]李群，石軼松.馬蹄蓮組培過程中真菌和細菌污染的消除方法研究[J].四川師范大學學報，2001，24（6）：607-609.

[4]朱廣廉.植物組織培養中的外植體滅菌[J].植物生理學通訊，1996，32（8）：444-449.

[5]焦立為，黃克梅，閆小飛，等. 植物組織培養前用臭氧對外植體進行消毒滅菌的效果初探[J].植物生理學通訊，2002，38（5）：466.

[6]田永亮，張文，張國珍，等.兩種抗生素對葡萄組培中污染菌的抑制作用[J].北方園藝，2005（5）：84-85. （責編：徐世紅）