梵凈山七葉一枝花總黃酮含量測定

摘 要：采用紫外分光光度法對不同生長年限的梵凈山珍稀藥用植物七葉一枝花總黃酮的含量進行了測定。結果表明，不同生長年限的七葉一枝花，其總黃酮含量不同。1年生的總黃酮含量為3.86mg/g，4年生的總黃酮含量為4.91mg/g，8年生的總黃酮含量為5.29mg/g。該研究可為發展銅仁藥材經濟、提高藥農種植積極性、帶動藥農增收、推動地方特色藥用植物發展提供科學的理論依據。

關鍵詞：七葉一枝花；總黃酮；含量；梵凈山

中圖分類號 S567 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2013）20-25-02

梵凈山是國家級重點自然保護區，1986年加入聯合國教科文組織世界生物圈保護區網絡，以保護森林生態系統和珍貴動植物物種及其獨特的景觀資源為主[1]。其保護區內及其周邊生長有珍稀藥用植物七葉一枝花。七葉一枝花（Paris polyphylla），百合科重樓屬多年生草本植物，屬珍稀瀕危植物[2]，在我國浙江、江蘇、江西、福建、安徽、湖北、四川、云南、廣西、貴州等地均有分布[3]。其藥用歷史悠久，藥用價值大[4]。以重樓和七葉一枝花為主要原料的云南白藥噴霧劑已經是家喻戶曉的知名藥劑，50g瓶裝市場價為30元左右，現在已作為家庭必備的常規藥之一。作為季德勝蛇藥片主要藥用成分之一的七葉一枝花，主治清熱解毒、消腫止痛，是毒蛇、毒蟲咬傷的良藥，現市場銷售單價為每盒（0.4g×60粒）19元，且市場銷售量大。七葉一枝花也是宮血寧膠囊藥用成分之一。宮血寧膠囊主治功能性子宮出血、產后出血、縮宮、消炎，是醫院、診所、家庭常用藥，市場單價每盒（每粒裝0.13g，每盒18粒）為17.5～19.8元。七葉一枝花除了是云南白藥、季德勝蛇藥片、宮血寧膠囊的主要藥用成分之一之外，它還廣泛用于多種中藥制劑中，如抗病毒顆粒、抗病毒沖劑、紅藥、熱毒清等重要中成藥。武珊珊等歸納了七葉一枝花化學成分、藥理作用和臨床應用等研究結果，指出七葉一枝花作為抗腫瘤藥和婦科用藥的開發具有良好的前景[5]。目前，七葉一枝花原材料的市場收購價至少140元/kg以上，零售價800～2 000元/kg。國內市場需求量達3 000t以上，而現供應量僅為1 500多t，供求矛盾突出[6]。據有關分析報告指出，預計未來2a之內，新興醫藥市場的市場潛力年度增幅將高達19%。伴隨著科學技術和醫藥技術的飛速發展，綜合社會各階層的需求，以七葉一枝花為原料開發一系列中藥、中成藥、美容產品及其他附屬產品越來越多，從而帶動一批醫藥企業和種植企業的發展。由于穩定、確切的療效和新功能的發現，七葉一枝花藥材的需求逐年增多，其開發前景大。目前，有關七葉一枝花的研究主要集中在人工栽培技術[7-8]、皂苷含量[9]和引種馴化[10]等方面。用比色法測定總黃酮含量已經廣泛應用于棗果、刺梨、葛根、苦杏仁和楊梅[11-15]等植物。筆者用紫外分光光度法對梵凈山珍稀藥用植物七葉一枝花總黃酮含量進行了測定，旨在為發展銅仁藥材經濟、提高藥農種植積極性、帶動藥農增收、推動地方特色藥用植物發展提供科學的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1 材料 1年生的七葉一枝花購自梵凈山保護區內藥農；4年生和8年生的七葉一枝花采自銅仁梵凈山保護區周邊地區。

1.1.2 試劑 蘆丁、無水乙醇、亞硝酸鈉、硝酸鋁、氫氧化鈉，以上藥品和試劑均為分析純。

1.1.3 儀器設備 T6新世紀紫外可見分光光度計，AL204型電子天平，DHG-9140A型電熱恒溫鼓風干燥箱，80-2離心機，超聲波清洗器。

1.2 總黃酮含量的測定[16]

1.2.1 標準曲線的繪制 精確稱取10mg蘆丁，用90%乙醇定容至100mL，精確量取0、0.2、0.5、1、2、3、4mL分別置于10mL容量瓶中，加入5g/100mL亞硝酸鈉0.4mL，放置6min后加入10g/100mL硝酸鋁0.4mL，放置6min后再加入4g/100mL的氫氧化鈉4mL，最后用蒸餾水定容至100mL，搖勻，放置15min后在波長510nm處測定吸光度。其標準曲線方程為y=0.082 3x-0.003 3，R2=0.999 3。標準曲線見圖1。

1.2.2 樣品的測定 稱取七葉一枝花粉末1.000g于100mL三角瓶中，以90%的乙醇作為浸提試劑，在70℃下進行超聲浸提3次，每次30min，3 000r/min離心10min，上清液加入5g/100mL亞硝酸鈉0.4mL，放置6min后加入10g/100mL硝酸鋁0.4mL，放置6min后再加入4g/100mL的氫氧化鈉4mL，最后用蒸餾水定容至100mL，搖勻，放置15min后以空白溶液作為對照，在波長510nm處測定吸光度。

2 結果與分析

不同年限的梵凈山七葉一枝花，其總黃酮含量也不同。1年生的七葉一枝花總黃酮含量為3.86mg/g，4年生的七葉一枝花總黃酮含量為4.91mg/g，8年生的七葉一枝花總黃酮含量為5.29mg/g。該研究可為發展銅仁藥材經濟、提高藥農種植積極性、帶動藥農增收、推動地方特色藥用植物發展提供科學的理論依據。

參考文獻

[1]雷孝平.貴州梵凈山[J].人與生物圈，2011，3：40-41.

[2]王詩云，趙子恩，彭輔松，等.華中珍稀瀕危植物及其保存[M].北京：科學出版社，1995：139.

[3]周政賢.梵凈山研究[M].貴陽：貴州人民出版社，1990.

[4]邊洪榮，李小娜，王會敏.重樓的研究及應用進展[J].中藥材，2002，25（3）：218-220.

[5]武珊珊，高文遠，段宏泉，等.重樓化學成分和藥理作用研究進展[J].中草藥，2004，35（3）：344-347.

[6]張偉.七葉一枝花 GAP 林下種植和人工促繁栽培技術研究[J].林業調查規劃，2011，36（6）：125-129.

[7]王英，饒軍，王海輝，等.七葉一枝花人工栽培技術研究[J].衛生職業教育，2011，29（23）：116-117.

[8]馬濟民.七葉一枝花人工栽培技術[J].四川農業科技，2011（9）：34.

[9]梁玉勇，劉振，高文遠，等. HPLC 測定貴州不同產地的七葉一枝花中9種甾體皂苷的含量[J].中國中藥雜志，2012（15）：2 309-2 312.

[10]孟繁蘊，汪麗婭，馮成強，等.滇重樓引種馴化研究進展[J].中草藥，2005，36（7）：1 102-1 104.

[11]宋琳琳，成元剛，路源.超聲波法對棗果中總黃酮提取工藝的優化[J].貴州農業科學，2010，38（11）：222-224.

[12]劉暢，王秋紅，方波，等.刺梨黃酮提取工藝研究[J].食品工業，2010（1）：52-54.

[13]張雁，池建偉，魏振承，等.葛根韌皮部總黃酮提取工藝及其抗氧化作用初探[J].食品工業，2010（3）：12-15.

[14]文連君，張清安，張志琪.響應曲面法優化苦杏仁皮總黃酮的微波提取工藝研究[J].南方農業學報，2011，42（1）：74-78.

[15]董悅涵.楊梅樹皮提取物中總黃酮快速分析方法研究[J].南方農業學報，2011，42（10）：1 263-1 266.

[16]張志良，瞿偉菁，李小方.植物生理學實驗指導[M].第4版.北京：高等教育出版社，2009：135-136.

[17]牟林春，羅勤，蔡佩玲，等.重樓的栽培與利用[J].經濟作物，2006，6：34-35.

（責編：徐世紅）