葉下珠提取物的抑菌活性研究

摘要：采用生長速率法測定葉下珠（Phyllanthus urinaria Linn）的5種溶劑提取物對大腸桿菌[Escherichia coli （Migula） Casleillii Chalmers]、傷寒沙門氏菌[Salmonella typhi （Schroeter） Warren Scott]、痢疾志賀氏菌[Shigella dysenteriae （Shiga） Castellani Chalmers]、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus Frankland）、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）的抑制活性。結果表明，10 mg/mL葉下珠甲醇提取物、乙醇提取物和丙酮提取物對痢疾志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和傷寒沙門氏菌有較強的抑制活性，其抑菌率均不低于60%，對大腸桿菌和蠟狀芽孢桿菌的抑制作用較弱，抑菌率均不高于60%；10 mg/mL水提取物和石油醚提取物對5種細菌的抑制作用弱，抑菌率均在51%以下。比較各提取物對5種供試菌的毒力可見，甲醇提取物對痢疾志賀氏菌的抑菌活性最強，其抑制有效中濃度（EC50）為2.915 5 mg/mL，乙醇提取物、丙酮提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌活性最強，EC50分別為3.440 2、4.320 6 mg/mL。

關鍵詞：葉下珠；提取物；抑菌活性

中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）12-2812-03

Study on Antibacterial Activities of Extracts from Phyllanthus urinaria Linn

DENG Zhi-yong

（College of Chemical and Biological Engineering， Hezhou University，Hezhou 542800，Guangxi，China）

Abstract： The antibacterial activities of 5 solvent extracts from Phyllanthus urinaria Linn against 5 species of bacterium were determined by growth rate method. The results showed that 3 solvent which were methanol， ethanol and acetone extracts had high antibacterial activities Shigella dysenteriae （Shiga） Castellani Chalmers， Staphyloccocus aureus Rosenbach， Salmonella typhi （Schroeter） Warren Scott with antibacterial rates more than 60%， and had low antibacterial activities against Escherichia coli （Migula） Casleillii and Chalmers， Bacillus cereus Frankland with antibacterial rates below 60%. The water extracts and petroleum ether extracts had low antibacterial activities against 5 species of bacterium with the antibacterial rates below 51%. The methanol extracts had the highest antibacterial activities against Shigella dysenteriae（Shiga） Castellani Chalmers， whose EC50 was 2.915 5 mg/mL. The ethanol extracts had the highest antibacterial activities against Staphyloccocus aureus Rosenbach， which EC50 was 3.440 2 mg/mL. The acetone extracts had the highest antibacterial activities against Staphyloccocus aureus Rosenbach， whose EC50 was 4.320 6 mg/mL.

Key words： Phyllanthus urinaria Linn； extracts； antibacterial activities

植物源殺菌劑是指從植物中提取的具有殺菌、抑菌活性的物質，以及由其分離純化的單體物質加工而成的藥劑。從植物中尋找殺菌、抑菌活性物質已成為當今開發、研制無公害新型殺菌劑的熱點之一[1]。葉下珠（Phyllanthus urinaria Linn）為大戟科（Euphorbiaceae）葉下珠屬（Phyllanthus）草本植物，又名珍珠草、夜合草、陰陽草、油柑草等[2]，全草入藥，具有清熱利尿、解毒、止瀉、抑菌、體內和體外抗HBV[3]、防治肝細胞損傷[4]、抗乙型肝炎病毒[5]等作用。迄今，從葉下珠中已發現的化合物有40多種[6]，包括生物堿類、黃酮類、木脂素類、萜類、鞣質等多種成分。試驗研究了葉下珠5種溶劑提取物對大腸桿菌[Escherichia coli （Migula） Casleillii Chalmers]、傷寒沙門氏菌[Salmonella typhi （Schroeter） Warren Scott]、痢疾志賀氏菌[Shigella dysenteriae （Shiga） Castellani Chalmers]、蠟狀芽孢桿菌（Bacillus cereus Frankland）、金黃色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）的抑制活性，以期發現新型抗菌物質，為葉下珠作為原料開發食品防腐劑提供理論依據，現將試驗結果報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試病原菌 5種病原菌大腸桿菌、傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌均來自廣西師范大學生命科學學院微生物學實驗室。

1.1.2 供試植物材料 葉下珠全株，采自廣西壯族自治區賀州市郊區。

1.1.3 溶劑 甲醇、乙醇、丙酮、石油醚，市售分析純；純凈水，自制。

1.2 方法

1.2.1 植物成分提取 采用冷浸法。取葉下珠全株，洗凈風干，放入60 ℃的恒溫鼓風干燥箱內烘干至發脆，用植物粉碎機將其粉碎，過425 μm篩。稱取一定量的植物干粉放入三角瓶中，加入5倍量的溶劑，在室溫下浸提（其間每隔12 h振蕩1次）48 h后抽濾。再重復浸提2次，將3次濾液合并，用旋轉蒸發儀減壓濃縮，蒸干溶劑得膏狀粗提物。稱重，置于4 ℃冰箱中保存備用。

1.2.2 提取物抑菌活性測定 參照參考文獻[7]，采用生長速率法進行測定。

2 結果與分析

2.1 葉下珠提取物的抑菌活性

葉下珠5種溶劑提取物在10 mg/mL的濃度下對大腸桿菌、傷寒沙門氏菌、痢疾志賀氏菌、蠟狀芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌都有一定的抑制作用（表1）。5種溶劑提取物對5種細菌的抑制作用有較大的差別。總體上，甲醇提取物抑菌率較高，分別為87.85%（痢疾志賀氏菌）、85.00%（金黃色葡萄球菌）、75.50%（傷寒沙門氏菌）、60.00%（大腸桿菌），51.89%（蠟狀芽孢桿菌）；其次是乙醇提取物，抑菌率分別為84.00%（金黃色葡萄球菌）、75.55%（痢疾志賀氏菌）、67.37%（傷寒沙門氏菌）、42.90% （大腸桿菌）、16.67%（蠟狀芽孢桿菌）；再次是丙酮提取物，抑菌率分別為72.56%（金黃色葡萄球菌）、68.23%（痢疾志賀氏菌）、64.60%（傷寒沙門氏菌）、29.67%（蠟狀芽孢桿菌）、19.90%（大腸桿菌）；水提取物和石油醚提取物對這5種細菌的抑菌率較低，都在51%以下。同一溶劑提取物對不同細菌的抑制作用有較大的差別。甲醇提取物對痢疾志賀氏菌的抑菌率最高，為87.85%；乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌率最高，為84.00%；丙酮提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌率最高，為72.56%。由上可知，甲醇提取物抑制作用最為明顯，乙醇提取物次之，丙酮提取物第三；甲醇提取物對痢疾志賀氏菌的抑菌率最高，乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌率最高，丙酮提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌率最高。

2.2 葉下珠3種溶劑提取物對3種細菌的毒力

鑒于葉下珠甲醇提取物、乙醇提取物和丙酮提取物對痢疾志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和傷寒沙門氏菌有較高的抑制活性，在實驗室條件下進一步測試了這3種溶劑提取物對以上3種細菌的毒力，以y為死亡率機率值、 x為劑量對數值建立毒力回歸方程，計算有效中濃度（EC50），結果見表2。葉下珠甲醇提取物對痢疾志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和傷寒沙門氏菌的抑制作用較強，有效中濃度分別為2.915 5、3.233 9、3.796 4 mg/mL；葉下珠乙醇提取物對痢疾志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和傷寒沙門氏菌的有效中濃度分別為3.980 5、3.440 2、5.324 1 mg/mL；葉下珠丙酮提取物對痢疾志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和傷寒沙門氏菌的有效中濃度分別為5.411 1、4.320 6、5.595 7 mg/mL。

3 結論

1）10 mg/mL葉下珠甲醇提取物、乙醇提取物和丙酮提取物對痢疾志賀氏菌、金黃色葡萄球菌和傷寒沙門氏菌有較強的抑制活性，其抑菌率都不低于60%，對大腸桿菌和蠟狀芽孢桿菌的抑菌率較低，其抑菌率都不高于60%；而水提取物和石油醚提取物對這5種細菌的抑菌率都比較低，其抑菌率都在51%以下。

2）葉下珠甲醇提取物對痢疾志賀氏菌的抑菌效果好，其抑制有效中濃度為2.915 5 mg/mL；乙醇提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌效果好，其抑制有效中濃度為3.440 2 mg/mL；丙酮提取物對金黃色葡萄球菌的抑菌效果好，其抑制有效中濃度為4.320 6 mg/mL。

參考文獻：

[1] 任 芳，劉 強.珍珠柴粗提物對13種植物病原菌的抑制活性[J].廣西植物，2009，29（1）：132-135.

[2] 羅文繼，阮細發，楊義雄.葉下珠研究概述[J].海峽藥學，1988， 10（1）：70-72.

[3] 張 韜.葉下珠的化學成分和藥理作用研究進展[J].中醫藥信息，2002，19（4）：22-23.

[4] 周 軍，李 茂.葉下珠醇提物對實驗性肝損傷的保護作用[J]. 廣西中醫學院學報，2004，7（1）：5-7.

[5] 馬海倫.苦味葉下珠抗乙型肝炎病毒作用的研究進展[J]. 天津醫藥，1994，22（12）：760-763.

[6] 袁宇熹，林 毅，明艷林，等.葉下珠抗腫瘤抗病毒研究進展[J]. 亞熱帶植物科學，2008，37（2）：77-80.

[7] 陳年春.農藥生物測定[M].北京：北京農業大學出版社，1991.