福林酚法測定茶樹中茶多酚的分布水平

摘要：采用福林酚法對茶樹不同部位多酚化合物總含量進行測定，比較不同部位中茶多酚含量的差異，探討茶多酚在茶樹體內的分布情況。結果表明，茶樹中茶多酚含量隨生長部位的不同而存在差異，葉片中茶多酚含量最高，根部含量最低。了解茶樹不同部位茶多酚的分布將有助于為茶樹茶多酚代謝的相關研究奠定基礎。

關鍵詞：茶樹；茶多酚；福林酚法；分布

中圖分類號：O657.3 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）10-2417-03

茶葉富含茶多酚，一般是茶葉中兒茶素類、酚酸類和花色素類多酚化合物的總稱，是茶葉中具有生物活性的主要成分，其含量一般占干重的15%～35%，其含量及組成與制茶類別及品質關系密切，直接影響茶湯色澤、滋味，歷來為茶葉科技工作者所重視[1-3]；此外，人們還發現茶多酚具有抑菌、消炎等多種功效，其抗氧化特性還可應用于肉類、蔬菜等產品保鮮及深加工保健等領域[4-6]。本研究針對同一茶樹的不同部位所含茶多酚含量進行比較，分析茶多酚在茶樹中分布差異，以期為茶樹茶多酚的代謝及體內轉運途徑等研究奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 材料

茶樹品種：早白尖5號無性系6～7年生健壯植株；采樣時間：2011年7月15日；采集地：四川省自貢市榮縣五通農場茶園（海拔715 m左右）。

在不同植株上隨機剪取樣品，按根、莖、當年生新葉、隔年生老葉片歸類，分別用塑料保鮮袋密封樣品，迅速帶回實驗室，80～85 ℃熱風烘干至恒重后粉碎備用。

1.2 試劑與儀器

10 mg/100 mL沒食子酸標準溶液；1%（m/V，下同）鐵氰化鉀，現配現用。

福林酚試劑：稱取Na2CO3·2H2O 50 g和Na2HPO4·12H2O 12.5 g，加入350 mL去離子水、25 mL濃硫酸及50 mL濃HCl溶液，混勻，以小火回流10 h；再加入75 g LiSO4，25 mL去離子水及數滴溴，開口沸騰15 min，以除去過量溴，冷卻后定容至500 mL，過濾至棕色試劑瓶中；用1 mol/L的NaOH標準液滴定，酚酞為指示劑，后稀釋至終濃度為1 mol/L。

T6型紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）；LG10-2.4A型高速離心機（北京京立離心機有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 沒食子酸標準曲線的制作 采用福林酚法（Folin-Ciocalteaut）[7，8]。在20 mL具塞試管中，分別加入不同體積（0、0.4、0.8、1.2、1.6、2.0 mL）的10 mg/100 mL沒食子酸標準溶液和3 mL福林酚試劑，7～8 min后加入3 mL 10%（m/V，下同）Na2CO3溶液，搖勻，于25 ℃靜置反應l h，用去離子水定容至20 mL，測定OD760 nm。以吸光度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。

1.3.2 樣品液中總酚的測定 取適量樣品溶液于20 mL具塞刻度試管中，按上述方法測定760 nm處吸光度，按照式（1）計算樣品中總酚的質量分數。式中：G為標準曲線中查的總酚含量，單位μg；W為樣品重量，單位g。

總酚含量=0.003 75G/W×100% （1）

1.3.3 樣品中茶多酚提取 準確稱取5 g干粉樣品于索氏提取管中，加入一定體積的乙醇，用恒溫磁力加熱攪拌器加熱，于80～85 ℃回流1 h，待提取液冷卻至室溫，以去離子水定容至100 mL，澄清后測定OD760 nm，根據式（1）計算出樣品中的總酚含量。

2 結果與分析

2.1 福林酚法測定條件的優化

采用福林酚法測定茶多酚時，對測定結果產生影響的因素有：福林酚試劑用量、福林酚試劑與Na2CO3溶液的比例、溫度、時間等，針對上述因素分析，尋找各因素最佳的反應條件。

在福林酚試劑用量優化試驗中，沒食子酸標準溶液0.5 mL，于20 ℃反應1.5 h，研究不同體積福林酚試劑對吸光度的影響，其中Na2CO3溶液與福林酚試劑等體積使用，結果見圖1。由圖1可知，當福林酚試劑加入量為3.0 mL時，吸光度最大。

在福林酚試劑和Na2CO3溶液體積比的優化試驗中，沒食子酸標準溶液為0.5 mL，福林酚試劑3 mL，于20 ℃反應1.5 h，研究2種試劑不同體積比例條件下對吸光度的影響，結果見圖2。由圖2可知，當體積比為1∶1時，吸光度最大，顯色反應完全。

在溫度優化試驗中，沒食子酸標準溶液0.5 mL，福林酚試劑和Na2CO3溶液各3 mL，反應時間1.5 h，研究不同溫度對吸光度的影響。由圖3可知，25 ℃吸光度最高，選擇25 ℃是最佳反應溫度。

在時間優化試驗中，沒食子酸標準溶液0.5 mL，福林酚試劑和Na2CO3溶液各為3 mL，25 ℃反應，研究不同反應時間對吸光度的影響，結果見圖4。由圖4可知，反應1 h后其吸光度達到最大并保持穩定，選擇1 h為最佳反應時間。

綜合上述結果，該反應的最佳條件為，福林酚試劑用量為3.0 mL，福林酚試劑與Na2CO3溶液的比例為1∶1，于25 ℃反應1 h。

2.2 繪制沒食子酸標準曲線

按以上的優化條件，測定吸光度并繪制標準曲線（圖5）。線性回歸方程為y=0.142 0x-0.081 8，R2=0.999 4。

2.3 茶樹不同部位的茶多酚含量

茶樹不同部位的茶多酚含量見表1。由表1可知，在茶樹各不同部位中，茶多酚含量不同，其中茶葉中含量最多，當年生新葉中茶多酚含量高于老葉，茶樹莖與根部含量較低，以根部為最低。

3 結論

試驗發現福林酚法檢測總酚的最佳反應條件為福林酚試劑3.0 mL，10% Na2CO3溶液3.0 mL，25 ℃反應1 h，在此條件下線性回歸方程為y=0.142 0x-0.081 8，R2=0.999 4。茶樹植株不同部位茶多酚含量存在明顯差異，茶多酚主要分布于茶樹葉片中，其中又以幼嫩芽葉中茶多酚含量為高。茶樹植株內茶多酚的分布情況可能與茶樹茶多酚代謝及轉移運輸有關[9，10]，尚有待進一步研究。

參考文獻：

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