豬偽狂犬病野毒抗體不同檢測單位的比對試驗

摘要：在種豬群偽狂犬病野毒（gE）抗體監測的第一階段，進行了不同檢測單位的比對試驗。對來自71個個體間隔1周的兩次血清樣本進行檢測，2個檢測機構之間的gE抗體陽性符合率分別為35.71%、45.45%，總體檢測符合率分別為87.32%、91.55%；2個檢測機構各自的gE抗體陽性符合率分別為40.00%、75.00%，總體檢測符合率分別為87.32%、97.18%。表明在豬群進行偽狂犬病野毒感染鑒定的初期，有必要對檢測單位進行篩選。

關鍵詞：偽狂犬病毒（Pseudorabies virus，PRV）；野毒抗體；對比試驗

中圖分類號：S828 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）24-6124-02

偽狂犬病是由偽狂犬病毒（Pseudorabies virus， PRV）引起的多種動物共患傳染病，以發熱、奇癢（豬除外）及腦脊髓炎為主要癥狀[1]。豬感染偽狂犬病毒后主要表現為母豬流產、死胎等繁殖障礙[2]，哺乳仔豬尖叫、腹瀉和轉圈、大量發病死亡，保育豬神經癥狀，育肥豬呼吸道癥狀、生長發育緩慢。豬偽狂犬病對養豬生產的影響很大，給中國的養豬業特別是集約化養豬造成了巨大經濟損失[3]。

國家生豬產業技術體系疫病控制研究室“十二五”重點任務“偽狂犬病、豬瘟凈化與藍耳病綜合防控”中要求，在偽狂犬病凈化任務結束時，參與試驗的種豬場（或生產線）應全部為野毒gpI（gE）抗體陰性。根除和凈化措施分為普查、強化免疫控制、檢測淘汰、全群清群與引種、監測認證與維持等5個階段，在實施過程中，檢測結果將影響凈化的具體方案和實施細節。本研究在種豬群偽狂犬病野毒感染狀況監測的第一階段，進行了豬偽狂犬病野毒抗體不同檢測單位檢測結果的比對試驗，現將試驗情況及建議報告如下，以供養豬生產中豬群偽狂犬病等疾病檢測、凈化時參考。

1 材料與方法

1.1 試驗動物與試劑

試驗豬為湖北省農業科學院實驗原種豬育種場基礎母豬520頭，種公豬19頭，自繁自養。gE基因缺失弱毒疫苗（K-61株自然缺失基因苗），德國柏林格茵格翰公司。后備豬在70日齡和配種前各免疫1次，種母豬每年普免3次，普免時避免在分娩前7 d內接種，以減少接種應激對分娩的影響，并在母豬分娩后補免；公豬采用集中普免的方式，每年免疫3次。

1.2 試驗方法

1.2.1 血樣采集 用保定器套住種豬上顎，用20 mL一次性注射器前腔靜脈采血。母豬按群體數量10%的比例進行采樣，種公豬進行全群采樣。

1.2.2 樣品制備 取編好號的血樣離心管放入離心機，4 000 r/min離心2～5 min，將上層血清用吸管慢慢吸出，每個樣品分別放入2支離心管，加蓋編號登記，全部樣品隨機分為2個平行組。

1.2.3 樣品送檢 將2組平行樣品分別送至具備檢測與分析條件的2家專業檢測機構（以下分別簡稱甲單位、乙單位），獨立檢測樣品中偽狂犬病野毒感染情況。

1.2.4 檢測方法 采用偽狂犬病野毒抗體檢測試劑盒（gE-ELISA試劑盒，IDEXX公司）進行檢測。

1.2.5 偽狂犬病gE抗體判定標準 S/N≤0.60，判定為陽性；0.600.70，判定為陰性。

2 結果與分析

由表1可知，甲單位gE抗體陽性豬為12頭，陽性率為16.90%（12/71），乙單位gE抗體陽性豬為7頭，陽性率為9.86%（7/71），兩單位的共同陽性豬為5頭，陽性符合率為35.71%（5/14）。兩單位的共同非陽性豬為57頭，共同陽性豬為5頭，總體符合率為87.32%（62/71）。

由表2可知，甲單位gE抗體陽性豬為9頭，陽性率為12.68%（9/71），乙單位gE抗體陽性豬為7頭，陽性率為9.86%（7/71），兩單位的共同陽性豬為5頭，陽性符合率為45.45%（5/11）。兩單位的共同非陽性豬為60頭，共同陽性豬為5頭，總體符合率為91.55%（65/71）。

由表3和表4可知，甲單位兩次gE抗體檢測中共同陽性豬為6頭，共同非陽性豬為56頭，兩次檢測陽性符合率為40.00%（6/15），總體符合率為87.32%（62/71）。乙單位兩次gE抗體檢測中共同陽性豬為6頭，共同非陽性豬為63頭，兩次檢測陽性符合率為75.00%（6/8），總體符合率為97.18%（69/71）。

3 小結與討論

1）用具有糖蛋白gE基因缺失背景的疫苗進行豬偽狂犬病免疫，用gE-ELISA試劑盒能區分疫苗接種豬和野毒感染豬，且敏感性很高[4]。2個檢測機構之間，兩次檢出gE抗體陽性樣本的共同符合率分別為35.71%、45.45%，顯示PRV gE抗體S/N值存在著偏差，但兩單位兩次檢測的總體符合率分別為87.32%和91.55%，說明對群體野毒感染陽性個體還是能夠確定檢出的。本試驗結果說明，為得到豬群偽狂犬病野毒感染較確定的檢測結論，檢測樣本量不能低于10頭。

2）偽狂犬病的根除是通過使用基因標志疫苗與相應的鑒別診斷來進行的，通過逐步隔離和淘汰自然感染豬，建立和擴大健康豬群，從而達到根除偽狂犬病的目的。兩個檢測機構兩次檢測gE抗體陽性結果各自的符合率分別為40.00%、75.00%，各自的總體檢測符合率分別為87.32%、97.18%。在進行豬群偽狂犬病野毒感染鑒定時，有必要進行檢測單位的篩選；同時，對可疑豬有必要進行重復檢測加以確認。

3）本試驗受檢豬群健康狀況相對良好，豬偽狂犬病野毒感染檢出率為9.86%～16.90%，且檢測出偽狂犬病野毒感染陽性的豬只相對集中于2010年留種群，表明此階段留種群在疫苗的制備、運輸以及免疫注射等操作過程中存在著操作失誤的可能。因此，也證明合理的免疫程序和規范的免疫操作可有效地阻止豬偽狂犬病野毒感染，有必要將該病納入常規免疫程序對豬群進行免疫保護。

參考文獻：

[1] 殷 震，劉景華.動物病毒學[M]. 第二版.北京：科學出版社，1997.

[2] 胡 杰，磨龍春，黃 夏，等.豬偽狂犬病gpI抗體鑒別ELISA方法在豬偽狂犬病控制與凈化中的效果分析[J].廣西農業科學，2008，39（5）：678-680.

[3] 金升藻，陳煥春，熊 符.偽狂犬病基因缺失疫苗研究進展[J].中國農業科學，2002，35（1）：89-93.

[4] 李春蕾，田召芳，柳 林，等.偽狂犬病檢測技術研究進展[J].中國動物檢疫，2010，27（6）：64-66.