天蔥花序軸再生體系研究

摘要：以天蔥（Allium chrysanthum Regel.）花序軸為外植體，研究不同激素組成及其濃度對天蔥花序軸愈傷組織誘導、繼代培養和芽分化的影響，以篩選適合天蔥花序軸再生的最適培養基。結果表明，以花序軸為外植體的最適愈傷誘導培養基為 MS+2.0 mg/L 2，4-D +0.1 mg/L 6-BA；最適愈傷繼代培養基為 MS+2.0 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA；最適愈傷芽分化培養基為MS+2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA。

關鍵詞：天蔥（Allium chrysanthum Regel.）；花序軸；離體培養

中圖分類號：S633；Q813.1+2 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）23-5906-03

天蔥（Allium chrysanthum Regel.）屬百合科蔥屬多年生草本植物。分布于湖北、西藏、云南、四川、陜西、青海、甘肅、山西等地，生長在海拔2 000～ 3 000 m的山坡草地或山脊草叢中。鱗莖及幼苗均可作蔬菜食用，其蔥香味濃郁，口感甚佳。由于大量采挖，野生天蔥資源數量急劇減少，其資源保護和合理開發利用日趨緊迫。用組織快繁的方式既能保持野生天蔥的原有種性，又能在短時間內繁殖大量天蔥幼苗，對其種質資源保護和開發利用有重要的意義。目前，天蔥的組培快繁工作尚未見報道，本研究從天蔥愈傷組織誘導、繼代培養、芽分化等方面研究了天蔥的組培快繁，以期為天蔥的種質資源保護和開發利用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

2010年3月上旬從五峰縣采集天蔥種植在湖北省農業科學院蔬菜科學研究所武昌南湖試驗基地，常規管理。4月中旬天蔥開始抽薹。

1.2 方法

1.2.1 無菌外植體的構建 當天蔥花薹抽出5～7 d時，于睛天上午10：00左右采摘未開放的嫩花薹。取回后將花薹于6 ℃放置1 d，然后在超凈工作臺上剪取花薹花序軸苞段，用75%乙醇表面消毒滅菌30 s，再用0.1%升汞浸泡10 min，無菌水沖洗3次，剝去外層苞葉，在花序軸頂部橫切，去除花莖部分，將花序軸接種到不同處理的花序軸愈傷誘導培養基上培養，培養溫度為（25±2） ℃，光照 14 h/d，光照度為2 500～3 000 lx。

1.2.2 天蔥花序軸愈傷誘導培養基及其繼代培養基的篩選 將消毒后的天蔥花序軸接種于含不同激素配比的13種MS培養基上進行愈傷組織誘導培養，培養溫度25 ℃，具體激素配比見表1。培養15 d后統計出愈率；然后將長出的愈傷組織分成小塊接種于含不同激素配比的5種愈傷繼代培養基上，具體激素配比見表2，統計愈傷組織繼代培養情況，以愈傷組織能在15 d內有明顯生長為繼代培養成功。愈傷誘導培養基及其繼代培養基的基本成分為：MS、3%蔗糖、8 g/L瓊脂，pH 6.0。

1.2.3 天蔥花序軸愈傷芽分化培養基的篩選 采用4種天蔥花序軸愈傷芽分化培養基對其進行培養，以篩選出最佳愈傷芽分化培養基，其具體配方見表3。

2 結果與分析

2.1 天蔥花序軸愈傷組織的誘導

13種MS培養基上接種天蔥花序軸，對其進行愈傷組織的誘導，在12號培養基上誘導出的愈傷組織最好，從出愈傷數和質量綜合考慮，12號培養基是最佳的愈傷誘導培養基，8號培養基次之（表4、圖1a）。從表4可以看出，KT對天蔥花序軸的愈傷誘導不利，2，4-D對其愈傷誘導有促進作用。

2.2 天蔥花序軸愈傷組織的繼代培養

在天蔥花序軸愈傷組織的繼代培養中，4號（MS+2.0 mg/L NAA +1.0 mg/L 6-BA）培養基的繼代培養成功率最高，達到80.0%，為天蔥花序軸最適愈傷繼代培養基（表5）。

2.3 天蔥花序軸愈傷組織的芽分化

天蔥花序軸繼代培養中出現緊密型愈傷組織時，進行芽的誘導分化，將愈傷組織轉到4種不同激素配比的分化培養基上，在25 ℃ 2 000 lx光照條件下培養。7 d后出現淡綠色芽點，15 d時有叢生芽形成。如表6所示，在不加任何激素的4號培養基上，雖然也有16.7%的芽分化率，但分化的芽數量很少，平均每塊愈傷組織上僅有0.3個芽。2號分化培養基的芽分化率達96.7%，分化芽的數量也是最高的，每塊愈傷組織上平均有3.6個芽。這表明2號分化培養基（MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA）對天蔥花序軸誘導芽的分化是最適宜的（圖1b）。

利用最適分化培養基進行培養，得到的天蔥試管苗如圖1c所示，將試管苗移栽至田間，生長良好（圖1d）

3 小結與討論

在植物組織培養中，以花序軸為外植體的研究較多[1-6]，但在蔥蒜類蔬菜中，僅發現熊正琴等[4]以大蒜花序軸為外植體進行了研究。在本研究中，以天蔥花序軸為外植體，通過誘導產生愈傷再分化芽，而熊正琴等[4]的研究中是采用大蒜花序軸直接生芽。本研究中天蔥花序軸愈傷誘導的最適培養基為MS+0.1 mg/L 6-BA +2.0 mg/L 2，4-D，吳麗艷等[1]在青花菜花序軸誘導愈傷中以MS+1.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA培養基培養效果最好，這可能是材料不同所致；天蔥花序軸愈傷繼代最適培養基為MS +2.0 mg/L NAA +1.0 mg/L 6-BA， 愈傷組織芽分化的最適培養基為MS +2.0 mg/L 6-BA +0.1 mg/L NAA，吳麗艷等[1]在青花菜組織快繁中發現培養基MS+0.01 mg/L NAA+0.2 mg/L KT+0.5 mg/L 6-BA 培養的不定芽分化效果最好，這也可能是材料不同導致的。

蔥蒜的花薹上可產生氣生鱗莖，這表明花序軸具有很強的腋芽萌發能力。本研究以幼嫩的花序軸為外植體，通過誘導愈傷后分化芽獲得大量再生試管苗。未成熟花序軸頂端為分生組織，也是生殖器官，多數病毒均不能通過分生組織和種子傳播，故經花序軸培養可獲得脫毒苗[4]。因此，本研究結果不僅能提高天蔥的繁殖系數，而且在保持天蔥種質遺傳穩定性和脫毒方面具有指導意義。

參考文獻：

[1] 吳麗艷，柏柯帆，李石開，等.利用花序軸組培快繁青花菜蘿卜胞質雄性不育系的研究[J]. 云南農業大學學報（自然科學版），2009， 24（5）：712-716.

[2] 唐 征，張小玲，劉 慶，等.利用花托與花序軸組培快繁青花菜雄性不育株的研究[J].江西農業學報，2007，19（3）：54-56.

[3] 黃遠新，何鳳發，玉永雄，等.青蒿花序軸離體培養的初步研究[J]. 四川草原，2004（4）：15-17.

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