骨橋蛋白與基質金屬蛋白酶9在子宮內膜病變中的表達

張巖，王雪飛，徐楓，那飛，趙巍

（中國醫科大學1.附屬第四醫院婦科，沈陽110032；2.第95期臨床醫療系，沈陽110001）

骨橋蛋白（osteopontin，OPN）是一種分泌型磷酸化糖蛋白，在細胞的惡性轉化及腫瘤細胞的侵襲和轉移中起重要作用［1］，國外有研究報道OPN在子宮內膜癌中高表達［2］。基質金屬蛋白酶9（matrixmetalloproteinase9，MMP9）能水解基膜和細胞外基質中的Ⅳ型膠原，與腫瘤的演進相關。目前研究認為OPN可能作為上游基因，使腫瘤細胞表達MMP9增高。本研究檢測OPN和MMP9在正常子宮內膜、不典型增生子宮內膜及子宮內膜腺癌組織中的表達情況，探討OPN和MMP9與子宮內膜癌發生及發展的關系及其在子宮內膜腺癌診療及預后判斷等方面的潛在價值。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 研究對象：2003年12月至2011年2月于中國醫科大學附屬第四醫院婦科就診的患者因診治原因獲取子宮內膜標本112例，均經病理學診斷證實。其中正常增殖期子宮內膜組織（normal endometrium，NE）15例，不典型增生子宮內膜組織（atypical hyperplasia，AH）22例，子宮內膜腺癌（endometrial adenocarcinoma，EC）75例。所有患者獲取標本前均未接受過放、化療或激素治療。子宮內膜腺癌患者根據2000年國際婦產科聯盟（FIGO）手術病理分期，Ⅰ～Ⅱ期45例，Ⅲ～Ⅳ期30例；組織學分級，G128例，G221例，G326例。

1.1.2 實驗試劑：鼠抗人OPN單克隆抗體及鼠抗人MMP9單克隆抗體、DAB顯色液試劑盒均購自北京中山生物技術有限公司。

1.2 方法

1.2.1 實驗方法：所有標本均在同一條件下采用免疫組化SP法進行染色。用PBS替代一抗為陰性對照，用已知陽性片為陽性對照。

1.2.2 結果判定：OPN和MMP9染色陽性定位主要在細胞質，染色為棕黃色。采用雙盲法：隨機計數10個高倍鏡視野共計1000個腺上皮及腫瘤細胞的陽性細胞數。評分方法：⑴按細胞顯色有無及深淺對染色強度評分：0分為無色，1分為淺黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色；⑵按陽性細胞所占的百分比評分：0分為陰性，1分為陽性細胞≤10%，2分為陽性細胞11%～50%，3分為陽性細胞51%～75%，4分為陽性細胞≥75%。每例染色積分為兩種評分相乘，進行半定量分析，積分≥3為免疫反應陽性。

1.3 統計學分析

采用SPSS11.5統計分析軟件，統計學處理采用χ2檢驗，檢驗水準取α=0.05。

2 結果

2.1 OPN、MMP9在不同子宮內膜組織中的表達

OPN、MMP9在正常增殖期子宮內膜組織中為陰性或弱陽表達，在不典型增生組織及子宮內膜腺癌組織中表達增加明顯（圖1、圖2）。本研究在正常增殖期子宮內膜、不典型增生子宮內膜、子宮內膜腺癌中，OPN的陽性表達率分別為26.67%、72.73%和80.00%，MMP9的陽性表達率為20.00%、63.64%和70.67%。2者在不典型增生子宮內膜組織及子宮內膜腺癌中的表達均明顯高于正常增殖期子宮內膜組織，差異有統計學意義（P<0.05）。

2.2 OPN、MMP9與子宮內膜腺癌臨床病理特征的關系

OPN、MMP9均與子宮內膜腺癌組織分級及肌層浸潤程度相關，其中低分化腺癌中表達明顯高于高分化腺癌（P<0.05）。OPN的表達與臨床分期及淋巴轉移相關（P<0.05），MMP9的表達在臨床分期及淋巴轉移方面差異不顯著（P>0.05）。見表1。

2.3 OPN與MMP9子宮內膜腺癌中表達的相關分析

OPN和MMP9在子宮內膜腺癌中均呈高表達，二者的表達呈正相關（r=0.287 9，P<0.05）。

3 討論

OPN 是細胞外基質（extracellularmatrix，ECM）中的一種重要的功能性非膠原蛋白。在腫瘤的發展過程中，OPN通過其分子N端的精氨酸—甘氨酸—天冬氨酸（RGD）結構域，經磷酸化后可以和腫瘤細胞表面的整合素受體結合；C端與黏附分子CD44結合，能強化腫瘤細胞的黏附、趨化和遷移，從而促進惡性腫瘤細胞的侵襲轉移。此外，OPN還可促進腫瘤血管生成、抑制腫瘤細胞的凋亡等，在腫瘤的發生發展中起促進作用。OPN在惡性腫瘤組織及血清中的過度表達，與多種腫瘤的發生和侵襲轉移有關［3～4］。本研究結果表明，OPN在不典型增生子宮內膜及子宮內膜腺癌中陽性表達率均明顯高于正常對照組（P<0.05），因此推測OPN參與子宮內膜細胞惡性轉化過程。同時OPN的陽性表達與腫瘤的組織分級、肌層浸潤、臨床分期及淋巴轉移呈正相關（P<0.05），證實了OPN與子宮內膜腺癌的發生發展過程密切相關。

MMP9以酶原形式分泌，被激活后可降解腫瘤表面ECM中Ⅳ、Ⅴ型膠原及明膠，促進腫瘤細胞向周圍組織侵襲及侵入淋巴及血管向遠處轉移。目前通過分子生物學等研究認為MMP9參與了腫瘤發生、侵襲及轉移的多個階段［5］。王香平等［6］檢測發現子宮內膜癌患者血清中MMP9活性形式的表達高于對照組，而其酶原形式的表達沒有差異，表明MMP9活性形式在子宮內膜癌的組織中起主要作用。本研究顯示MMP9在子宮內膜不典型增生及子宮內膜腺癌組織中高表達，并與子宮內膜腺癌的組織分級及肌層侵潤正相關（P<0.05）。可見在內膜癌的發生發展中MMP9的陽性表達及酶原激活增加，MMP9的高表達預示著內膜癌的生物學行為惡劣，預后差。

本實驗對OPN、MMP9在子宮內膜病變及內膜癌中表達的相關性進行研究，結果顯示2者在子宮內膜癌變過程中有相關性。在內膜癌的發生發展過程中OPN可通過激活絲裂原激活的蛋白激酶（motigen-activated protein kinase，MAPK）/核因子 κB抑制劑激酶（I kappaB alpha kinase，IKK）信號通路，使腫瘤細胞分泌MMP9等基質金屬蛋白酶及尿激酶型纖溶酶原激活物（uPA）等［1］，促進細胞的黏附和遷移，介導腫瘤細胞的侵襲轉移［7］。體外細胞培養實驗研究發現OPN可通過ERK/IKKα/β途徑激活核因子誘導激酶而活化核轉錄因子κB，增強其調控uPA分泌和uPA依賴性蛋白MMP9的活化［8］。同時MMP9可作用于OPN分子中的MMP的酶切位點，正向調節OPN與細胞表面的整合素結合。此外2者均可促進腫瘤血管生成［9，10］，參與腫瘤細胞的免疫逃逸，有關2者在此方面是否具有關聯性及協同作用，有待于進一步研究。

綜上所述，本研究認為OPN和MMP9與子宮內膜腺癌的發生、發展有密切的關系，能夠反映腫瘤的惡性程度，通過對2者的檢測將有助于判斷患者的預后，同時也為臨床診治子宮內膜癌提供依據。

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