HPLC測定綠絨蒿中槲皮素的含量研究

2013-11-29 08:00:58孫躍寧王海英

中國民族醫藥雜志 2013年7期

孫躍寧王海英孫楠

(青海阿如拉藏醫藥研究開發有限公司，青海西寧 810003)

綠絨蒿，藏名歐貝，為罌粟科植物全緣綠絨蒿Meconopsis integrifolia(Maxim.)Franch.及五脈綠絨蒿Meconopsis quintuplinervia Regel、長葉綠絨蒿 Meconopsis lancifolia(Franch.)Franch.等的干燥花，6～8月花盛期采集，晾干［1、2］。綠絨蒿全世界共用49種，主產于亞洲中南部，以我國最為豐富。綠絨蒿不僅具有很高的觀賞價值，有限種類還可以入藥治病。其性味涼，甘，澀。清熱，用于肝熱病，肺熱病。如全緣綠絨蒿、尼泊爾綠絨蒿全草可入藥，具有清熱解毒的功效，其他如被稱為“紅毛洋參”、“雪參”的綠絨蒿根可入藥，可治療氣虛、浮腫、哮喘等癥［3、4］。綠絨蒿中含有大量的黃酮類化合物，黃酮類化合物具有抗炎、抗病毒、解熱和保肝的作用［5］。槲皮素為綠絨蒿中所含的活性成分，槲皮素具有較好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，用于治療慢性支氣管炎，此外還有降低血壓、增強毛細血管抵抗力、減少毛細血管脆性、降血脂、擴張冠狀動脈、增加冠脈血流量的等作用，對冠心病及高血壓患者有輔助治療作用［6、7］。本文采用HPLC測定綠絨蒿中槲皮素的含量，因此為評價綠絨蒿藥材的質量及研發提供依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器:HHS－4型電熱恒溫水浴鍋，生產廠家:國華電器有限公司;LC－20AT高效液相色譜儀，生產廠家:日本島津。

1.2 試藥:綠絨蒿藥材由金訶藏藥股份有限公司提供，批號:20120701，20120702，20120703;槲皮素對照品，批號:100081－200406(供含量測定用);以上對照品購自中國藥品生物制品鑒定所;雙蒸餾水(自制);甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 實驗方法與結果

2.1 色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑;以甲醇－0.4%磷酸(50:50)為流動相;檢測波長為360nm;流速1.0mL/min;理論板數按槲皮素峰計算應不低于5000。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備:取槲皮素對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含槲皮素20μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備:取本品粉末0.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50mL，密塞，稱定重量，加熱回流1n，放冷，再稱定重量，用80%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續濾液25 mL，加入鹽酸5mL，置水浴中加熱1n，取出，迅速冷卻，轉移至50mL量瓶中，用80%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm濾膜濾過，取續濾液，即得供試品溶液。

圖1 (A)槲皮素對照品

圖1 (B)綠絨蒿樣品的HPLC圖譜

2.3 線性關系實驗:精密吸取對照品溶液 2、4、6、8、10、12μL注入液相色譜儀測定，按2.1項下的色譜條件測定峰面積，以進樣量為橫坐標(X)，以峰面積的積分值為縱坐標(Y)繪制標準曲線。得槲皮素回歸方程為Y=47472X－1026，r=0.9999;結果表明，在上述色譜條件下，槲皮素在0.0396 ～0.2376μg范圍內呈良好的線性關系。

2.4 精密度實驗:精密吸取兩種對照品溶液各10μL，在上述色譜條件下連續進樣6次，測定峰面積，結果槲皮素對照品的RSD為0.26%(n=6)說明儀器性能良好。

2.5 穩定性實驗:精密吸取制備的供試品溶液10μL，于0、2、4、6、8、10h 進樣，測定峰面積，結果在測定時間內，供試品中槲皮素含量穩定。

2.6 重復性實驗:取同一批號樣品5份，分別按樣品溶液制備法制備，測定其槲皮素峰面積值，其結果樣品中槲皮素平均含量為1.41mg·g－1，RSD 為 1.03%(n=5)，表明分析方法重復性良好。

2.7 回收率實驗:精密吸取已知含量的樣品6份，分別精密加入槲皮素對照品溶液，按樣品制備方法制備供試品溶液，并按上述色譜條件測定，計算回收率。結果見下表1