基因分型在疑難血型中的診斷意義

梁義安，蔣利星，秦次貴

（1.南寧中心血站 采血科，廣西 南寧530003；2.桂林市中心血站 檢驗(yàn)科；3.桂林銀海醫(yī)院 檢驗(yàn)科）

ABO血型抗原在某些疾病狀況下會(huì)出現(xiàn)減弱或消失等情況，血型鑒定困難，用血清學(xué)方法有時(shí)不能完全準(zhǔn)確定型，造成不能及時(shí)準(zhǔn)確配型延誤救治。采用PCR－SSP方法對(duì)疑難血型準(zhǔn)確定型有效解決疑難血型鑒定困難問題，是對(duì)血型學(xué)方法的有益補(bǔ)充。我們收集2010年10月－2011年9月共10例疑難血型，進(jìn)行基因分型并正確定型，報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 一般材料

10例患者是南寧市醫(yī)院入院經(jīng)臨床申請(qǐng)輸血，正反定型檢測(cè)不符的病例。其中白血病7例，肝病1例，多發(fā)性骨髓瘤2例，年齡在55歲－71歲。收集10例患者EDTA抗凝劑靜脈全血300μl用于基因檢測(cè)。

1.2 試劑

正反定型試劑采用上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司生產(chǎn)抗－A、抗－B抗－H（單克隆抗體）；標(biāo)準(zhǔn) A、B、O紅細(xì)胞南寧中心實(shí)驗(yàn)室自制。ABO血型基因分型試劑由美國(guó)G＆T公司提供。

1.3 方法

1.3.1 ABO正反定型 參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》［1］操作。

1.3.2 PCR擴(kuò)增 10例患者的300μl EDTA抗凝全血，采用Promega System試劑盒按操作說明書制備DNA，用TB溶液20μl溶解待用。采用序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)（PCR－SSP）檢測(cè)ABO血型基因型，內(nèi)對(duì)照基因是人類生長(zhǎng)激素（HGH），每個(gè)ABO基因分型反應(yīng)孔內(nèi)各加入9μl混合液。按循環(huán)參數(shù)94℃，3min預(yù)變性；94℃變性30s、60℃退火30s、72℃延伸30s；30個(gè)循環(huán)后72℃延伸5min；降溫4℃。擴(kuò)增結(jié)束PCR產(chǎn)物在2%的瓊脂糖內(nèi)電泳30min，結(jié)束電泳，凝膠成像記錄結(jié)果。

2 結(jié)果

10例正反定型不符的疑難血型標(biāo)本中有2例白血病病例正定型結(jié)果為A型血，且抗A凝集較弱，與抗B不凝集，基因分型結(jié)果為AB型。2例白血病病例、1例多發(fā)性骨髓瘤病例正定型為B血型，反定型檢測(cè)為AB型血，基因分型結(jié)果為AB型血。2例白血病病例正定型為O型血，反定型為B型血，基因檢測(cè)結(jié)果為B／O型血。1例白血病和1例肝病正、反定型均為O型血，基因分型為B／O型血。1例多發(fā)性骨髓瘤正定型為O型血，反定型為A型血，基因檢測(cè)結(jié)果為A／O型血。詳見表1。圖1所示即基因分型檢測(cè)結(jié)果，以上病例選擇相合血液輸注后未見輸血反應(yīng)。

表1 10例疑難血型定型結(jié)果

圖1 ABO血型基因擴(kuò)增電泳圖

3 討論

根據(jù)最后血型定型結(jié)果，收集的10例疑難血型病例有8例血型抗原減弱導(dǎo)致正定型漏檢血型抗原，2例血型抗原和抗體均減弱導(dǎo)致正反定型血型鑒定有誤。采用血清學(xué)方法檢測(cè)血型有時(shí)受到抗原活性、抗體特異性等因素的影響，基因分型方法操作簡(jiǎn)便不受抗原抗體因素影響、結(jié)果可靠可用于疑難血型的鑒定中［2，3］。分子生物技術(shù)的迅速發(fā)展推廣完全可作為血型定型的常規(guī)手段，該方法定型具有準(zhǔn)確、快速、操作簡(jiǎn)便和所需標(biāo)本少等優(yōu)點(diǎn)。PCRSSP方法可對(duì)于正反定型不相符判斷血型困難無法配血，一段時(shí)間反復(fù)輸血患者造成血清學(xué)干擾結(jié)果，由于疾病本身造成血型抗原的變化等具有明顯優(yōu)勢(shì)。以上因素，對(duì)于一些亞型和弱血型抗原的鑒定均能顯現(xiàn)出優(yōu)勢(shì)［4，5］，尤其對(duì)于一些臨床表現(xiàn)嚴(yán)重的老年患者，血型抗原易出現(xiàn)改變，基因檢測(cè)方法可有效避免血清學(xué)假陰性結(jié)果誤判血型等情況［6］。應(yīng)用血清學(xué)檢測(cè)基礎(chǔ)上，科學(xué)合理結(jié)合ABO血型基因分型方法可更有效及時(shí)解決疑難血型鑒定問題，促進(jìn)臨床輸血醫(yī)學(xué)發(fā)展。

［1］葉毓三，申子瑜.全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程／中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部醫(yī)政司［M］.第3版.南京；東南大學(xué)出版社，2006：246－257.

［2］石 寧，蘭炯采.ABO血型系統(tǒng)的基因分型［J］.國(guó)外醫(yī)學(xué)·輸血及血液學(xué)分冊(cè)，1997，20（5）：286.

［3］趙桐茂.人類血型分型的新紀(jì)元［J］.中國(guó)輸血雜志，2007，20（1）：1.

［4］劉立坤.血型檢測(cè)中ABO血型正反定型不符影響因素分析［J］.河北醫(yī)藥，2009，31（27）：3235.

［5］毛 偉，王 芳，程 磊，等.ABO血型定型中正反定型不一致原因分析［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2007，36（21）：2148.

［6］賈業(yè)紅，邢紅妍.骨髓增生異常綜合征致A、B抗原減弱1例［J］.中國(guó)冶金工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2007，24（2）：248.